最新-盐酸小檗碱含量判断方式 精品

实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。

黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。

黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。

其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。

小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。

[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。

2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。

3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。

[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。

盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。

小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。

N +OH -O OOCH 3OCH 3N OOOCH 3OCH 3OHNHCHOOOOCH 3OCH 3季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色）N +OOOCH 3OCH 3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。

盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。

易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。

N +H 3COH 3COOCH 3OCH 3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。

高效液相色谱法测定香连片中盐酸小檗碱含量黄玲;王明霞【摘要】目的建立香连片的盐酸小檗碱含量的测定方法.方法采用高效液相色谱法对方中的盐酸小檗碱进行含量测定,采用ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为室温,流动相为每100 ml加十二烷基磺酸钠0.1 g的乙腈-0.1%磷酸溶液(49:51),检测波长为265 nm,流速:1 ml/min.结果盐酸小檗碱进样量在1.95～13.0 μg范围内线性良好,r=0.9995,平均回收率为98.84%(n=5),RSD=1.47%.结论试验结果表明本法简便快速,重现性好,结果准确可靠,可以作为香连片中盐酸小檗碱含量测定的方法.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2010(004)013【总页数】2页(P15-16)【关键词】高效液相色谱法;香连片;盐酸小檗碱;含量测定【作者】黄玲;王明霞【作者单位】272100,济宁市中区妇幼保健院;272100,济宁市中区妇幼保健院【正文语种】中文香连片［1］是由《中国药典》(2005年版)一部收载的传统中成药香连丸经改变剂型而得。

组方由中药黄连，木香组成。

具有清热燥湿，行气止痛功效。

用于湿热痢疾，里急后重，腹痛泄泻;菌痢，肠炎。

中国药典2005版对香连片中盐酸小檗碱的含量测定采用薄层扫描法。

为改进制剂质量控制标准，笔者建立了高效液相色谱法测定香连片中盐酸小檗碱含量方法。

利用超声波提取法提取供试样品，优选提取时间，本方法操作简便易行，结果准确可靠，可用于香连片的质量控制。

1 仪器与试药Agilent 1200型高效液相色谱仪;CP225D型电子分析天平;KQ-400DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);盐酸小檗碱对照品(购于中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水;香连片(湖北某制药有限公司生产，批号:080318、080514、080822);其他试剂(分析纯)。

实验三黄连中盐酸⼩檗碱的提取分离与鉴定实验三黄连中盐酸⼩檗碱的提取分离与鉴定⼩檗碱⼜称黄连素，是在⾼等植物中分布⽐较⼴泛的、有明显⽣理活性的化学成分。

主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。

⼩檗碱具有显著的抗微⽣物、抗原⾍的作⽤，临床⽤其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。

黄连为⽑茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch 。

），三⾓叶黄连（C 。

deltoidea C 。

Y 。

Cheng et Hsiao ）或云连（C 。

teetoides C 。

Y 。

Cheng ）的根茎，含有⼩檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等⽣物碱，其中以⼩檗碱含量最⾼，可达10%左右，⼩檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。

⽬前制药⼯业提取⼩檗碱主要以三颗针为原料。

三颗针来源于⼩檗科⼩檗属（Berberis ）多种植物，其根⽪含⽣物碱约2%，主要含⼩檗碱、⼩檗胺、药根碱、巴马汀等⽣物碱。

N +OH ￡-R 1O OR 4OR 3R 2OR 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5CH 3 CH 3 HCH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 HCH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2⼩檗碱 (Berberine)属异喹啉类⽣物碱，⾃⽔和⼄醇中结晶出来的⼩檗碱为黄⾊长针状结晶，含5个结晶⽔，在100℃⼲燥时即失去结晶⽔，转为棕黄⾊，加热⾄110℃时，其颜⾊加深变暗⾊。

Mp.145℃⾄160℃即分解。

N HH 3NO CH 3O CH 3O O HON HH 3COC H 3⼩檗胺游离⼩檗碱能缓缓溶于⽔，在热⽔及热⼄醇中易溶，⽽在冷⼄醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。

醇式和醛式⼩檗碱则具有⼀般⽣物碱的通性，难溶于⽔，易溶于有机溶剂。

⼩檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，⼀般在⽔中的溶解度均较⼩。

实验黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eraneh）、三角叶黄连（coptis deltoidca C．Ycheng et Hsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。

黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。

黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。

其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。

小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。

[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。

2．学习和掌握生物碱的化学检识。

[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。

盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。

[实验内容]一、提取分离黄连粗粉20g加0.3%硫酸200ml，浸泡20min煎煮30min，滤过药渣加石灰乳调pH值11-12放置10min，抽滤滤液加HCl调pH2-3加滤液体积4-5%的NaCl，放置30min滤液沉淀加200ml水加热至澄明趁热抽滤滤液静置，抽滤沉淀二、精制盐酸小檗碱粗品水，加热溶解，趁热过滤不溶物pH1-2沉淀（盐酸小檗碱）三、检识精制小檗碱溶液滤过，抽干，用少许蒸馏水洗涤，70℃以下干燥，得小檗碱精品。

称重，计算提取率。

1. 浓硝酸、漂白粉实验取盐酸小檗碱少许，加稀硫酸8ml溶解，分置两支试管中，一支加入2滴浓硝酸，观察颜色变化；另一支加入少许漂白粉，观察颜色变化。

2. 丙酮小檗碱实验取盐酸小檗碱少许，加5ml蒸馏水，水浴加热溶解，溶解后加入氢氧化钠试液2滴，观察颜色变化，放冷，加入丙酮4滴，观察现象。

盐酸小檗碱的提取、精制及检识小檗碱又称黄连素，是在高等植物中散布比较普遍的、有明显生理活性的化学成份。

要紧存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。

小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）医治细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。

黄连为毛茛科黄连属植物黄连（Coptis chinensis Franch.），三角叶黄连（ . Cheng et Hsiao ）或云连（ ）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。

目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。

三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis ）多种植物，其根皮含生物碱约2%，要紧含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。

N +OH £-R 1O OR 4OR 3R 2OR 5R 1 R 2 R 3 R 4 R 5CH 3 CH 3 HCH 3 CH 3 CH 3 CH 3 H H CH 3 H CH 3 CH 3 CH 3 HCH 212345CH 2CH 2CH 2CH 2小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。

℃至160℃即分解。

N HH 3NO CH 3O CH 3O HONHH 3COC H 3小檗胺小檗碱有三种互变异构体：其中以季铵碱式结构状态最稳固，能够离子化呈强碱性，用过量的氢氧化钾处置小檗碱盐类时，可转变成醇式叔胺碱和醛式仲铵碱，季铵碱式小檗碱可离子化，故有必然亲水性，因此，游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1：100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。

醇式和醛式小檗碱那么具有一样生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。

HPLC测定连参通淋片中盐酸小檗碱的含量孔德宪;姜海;刘育强;张特利;段文静;卢树杰【摘要】目的:建立连参通淋片中盐酸小檗碱含量的测定方法.方法:高效液相色谱法,C18柱(4.6mmx250mm,5μm),乙腈-水(1:1)(每1000mL中加磷酸二氢钾3.4g,十二烷基硫酸钠1.7g)为流动相,检测波长345nm.结果:盐酸小檗碱在0.1274～0.6370μg呈良好线性关系,平均回收率为98.62 %,RSD=1.17%.结论:该方法简便、灵敏、准确,适用于连参通淋片中盐酸小檗碱的含量测定.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2011(013)005【总页数】3页(P29-30,35)【关键词】高效液相色谱法;连参通淋片;盐酸小檗碱【作者】孔德宪;姜海;刘育强;张特利;段文静;卢树杰【作者单位】神威药业有限公司,河北,石家庄,051430;神威药业有限公司,河北,石家庄,051430;神威药业有限公司,河北,石家庄,051430;神威药业有限公司,河北,石家庄,051430;河北省中药注射剂工程技术研究中心,河北,石家庄,051430;神威药业有限公司,河北,石家庄,051430;河北省中药注射剂工程技术研究中心,河北,石家庄,051430【正文语种】中文连参通淋片为神威药业有限公司自主研发的中药6类新药，由黄连、苦参等十余味药味组成，具有清热解毒，燥湿杀虫，利尿通淋，健脾化浊的功能，用于临床诊断为非淋菌性尿道炎，辩证属湿热下注者，临床表现尿频、尿急、尿痛，排尿困难，尿道刺痒，尿道口有分泌物。

其中黄连为君药，其所含生物碱为本制剂活性成分，研究采用高效液相色谱法测定制剂中盐酸小檗碱的含量，从而控制产品质量。

高效液相色谱仪：日本岛津LC-6A；色谱柱：C18（4.6 mm×250 mm，5μm）。

乙腈：色谱纯；磷酸二氢钾：分析纯；十二烷基硫酸钠：化学纯。

连参通淋片（神威药业有限公司，批号：090421，090422，090423）。

三黄实验法方法名称：三黄片—盐酸小檗碱的测定—高效液相色谱法应用范围：该方法采用高效液相色谱法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量。

该方法适用于由大黄、盐酸小檗碱和黄芩浸膏等组成的片剂。

方法原理：三黄片由大黄、黄芩浸膏和盐酸小檗碱组成，是一种具有清热泻火、消炎利便功效的常用中成药。

收载于《中国药典》2000年版一部。

其中盐酸小檗碱的含量测定标准未作规定。

目前文献报道的测定方法有薄层扫描法、脉冲极谱法、分光光度法、示波极谱法和离子选择电极法等。

该方法为高效液相色谱法，紫外吸收检测器于波长347nm处检测盐酸小檗碱的吸收值，外标法计算含量。

本法操作简便、精密度高、分离效果良好。

试剂：盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，713 9204）；乙腈为色谱纯，水为高纯水，甲醇、三乙胺、磷酸为分析纯；三黄片为市售品。

仪器设备：1 仪器1.1仪高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱工作站1.2 色谱柱色谱柱：KF C18（250mm×4.6mm,10μm,中国科学院大连化学物理研究所），柱温：室温1.3 紫外吸收检测器2 色谱条件2.1 流动相：乙腈 0.05mol·L-1三乙胺溶液（用磷酸调节pH 至3.0)=35 65；流速：1.0mL·min-12.2 检测波长：347nm，进样量：20μL。

试样制备：1. 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加流动相制成36μg·ml-1的对照品溶液。

2.供试品溶液的制备取该品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱1.8mg），置50ml量瓶中，加流动相适量，超声处理5min，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，再经0.45μm的微孔滤膜滤过后，即得。

取大黄粉、黄芩浸膏和其它辅料，按处方比例同法制得三黄片阴性空白溶液。

操作步骤：1. 标准曲线的绘制分别吸取上述对照品溶液1，2，3，4，5，6ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进样10μl测定，以盐酸小檗碱的进样量（μg) 为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程2. 供试品的测定精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长347nm处测定吸收值，计算出其含量。

盐酸小檗碱片含量测定方法的改进目的改进盐酸小檗碱片含量测定的方法。

方法用流动相溶解和改变过滤方式的方法处理样品。

结果经过三种方法的对比，改进方法获得满意结果。

结论改进的两种方法可靠，可用于盐酸小檗碱片样品溶液的制备。

标签：盐酸小檗碱片；高效液相色谱法；含量测定盐酸小檗碱片是一种抗菌药，临床上主要用于治疗肠道感染、如肠胃炎等。

盐酸小檗碱片的含量測定的方法标准收载于《中国药典》2015年版二部[1]中，其含量测定的方法采用HPLC方法。

在检验过程中发现含量测定项下由于对样品的处理不尽完善，导致测定结果偏低。

同时也有相关文献报道[2]。

因此对样品处理方法进行了相应的改进。

分别采用流动相溶解并超声的方法和增加微孔滤膜（0.45 μm）过滤弃去初滤液的方法。

1 仪器与试药Agilent 1260高效液相色谱仪；电子天平（SARTOROUS CP225D）；盐酸小檗碱对照品（来源：中国药品生物制品检验所，批号：110713-201613，标示含量：86.8%）；盐酸小檗碱片样品（规格：0.1 g；市售品；批号：160613）；色谱纯乙腈；水为纯化水；其他试剂均为分析纯试剂。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18（4.6×250 mm，5 μm）；流动相：磷酸盐缓冲液[0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液和0.05 mol/L庚烷磺酸钠溶液（1：1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（40：60）；流速：1.0 ml/min；检测波长：263 nm；进样量：20 μL；柱温：35℃；理论塔板数不低于3000；小檗碱峰与相邻杂质峰分离度大于1.5。

2.2 对照品溶液的制备精密称量盐酸小檗碱对照品20 mg，置于50 mL容量瓶中，加沸水使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

精密量取5 mL，置于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备2.3.1 药典法取供试品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于40 mg盐酸小檗碱），置于100 ml量瓶中，加沸水适量使溶解，放冷后用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液（约8 ml），精密量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

万方数据药物研究Ｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎｅｓｔｕｄｙ中国民族民￥ｕ１医药Ｃｈｉｎｅｓｅｊｏｕｍａｌｏｆｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅａｎｄｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ·３３·０．７３５。

Ｉｔ＂＝０．９９９８。

结果表明盐酸小檗碱在２．１５—２１．５ｐ，ｇ·ｌＩｌｌ。

范围内线性关系良好。

图１盐酸小檗碱对照品图２盐酸小檗碱保留时间为２．８ｍｉｎ１．３．５．２精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液１０止，测定峰面积，重复进样５次，求得盐酸小檗碱峰面积ＲＳＤ＝０．５２％。

１．３．５．３稳定性试验于０，４，８，１２，２４ｈ分别吸取盐酸小檗碱对照液、样品液各１０山测定，盐酸小檗碱对照品峰面积ＲＳＤ＝０．６３％，样品液峰面积ＲＳＤ＝１．５４％，说明２４ｈ内稳定性良好。

１．３．５．４重复性试验分别取同一样品５份，按供试品溶液的制备的方法和测定方法进行测定，盐酸小檗碱峰面积积分值的ＲＳＤ＝１．８７％，表明本试验方法重复性良好。

１．３．５．５加样回收率试验取已知含量的供试品，分别加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按含量测定项下操作，结果见表１，平均回收率为９９．００％，符合要求。

衰１盐酸小檗碱的回收率试验２结果分别精密吸取样品溶液和对照品溶液各ｌＯ止，注入液相色谱仪，测定，对照品及样品色谱图见图ｌ，２，（图中横坐标为保留时向，纵坐标为峰高），结果见表２。

裹２盐酸小檗碱的含量测定结果３讨论３．１本试验测定三颗针提取物中盐酸小檗碱的平均含量为１５．４０％，由于三颗针来源广泛，采收季节不同、部位不同，均会对其提取物中盐酸小檗碱含量有影响拍１，我们按８５％规定下限，因此，规定该提取物中盐酸小檗碱含量不低于１３．１％。

３．２比较甲醇，水，磷酸不同用量和流动相不同ｐＨ值对盐酸小檗碱的保留时间及其相邻峰分离度的影响。

结果表明甲醇一水一磷酸（２５：７５：０．２），保留时间适当分离效果较好，与其它方法相比，该方法所采用的流动相具有简便，柱污染小，分离度好的优点。

ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定复方黄柏软胶囊中盐酸小檗碱含量【摘要】目的建立复方黄柏软胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。

方法采用RP-HPLC法，乙睛-0.5‰磷酸水溶液（21：79）为流动相，在检测波长269 nm 下测定盐酸小檗碱的含量。

结果盐酸小檗碱在20.00～200.00 μg/ml范围内呈良好线性关系。

结论该法简便、重现性好，可用于复方黄柏软胶囊的质量控制。

【关键词】复方黄柏软胶囊；盐酸小檗碱；RP-HPLC法复方黄柏软胶囊是由黄柏、赤芍、丹参等七味中药组成。

为控制制剂质量，我们选择君药黄柏中有效成分盐酸小檗碱作为质量控制指标，采用RP-HPLC法检测其含量，并进行方法学考察。

结果表明，本法准确、快捷，能达到控制制剂质量的目的。

1仪器与试药Agilent 1100高效液相色谱仪；MWD紫外检测器；复方黄柏软胶囊；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：103574-200401）；乙腈（色谱纯），水（超纯水），其余试剂为分析纯。

2方法与结果2.1色谱条件的选择色谱柱：X-Terra C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），WATERS 公司；流动相：乙腈-0.5‰磷酸水溶液（21：79）；测定波长：269 nm ；柱温：31℃；系统适应性：理论塔板数不得低于4200。

2.2对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含30 μg 的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声（超声功率为250 W，频率为40 KHz）处理30 min，放冷，称重，加50%甲醇补足减失的重量，滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。

2.4阴性供试品溶液的制备取阴性样品（无黄柏药材外，其他组成同复方黄柏软胶囊），按供试品溶液制备方法制备阴性供试品溶液。

照上述色谱条件进行试验，在阴性供试品溶液色谱图中与盐酸小檗碱峰无干扰。