盐酸小檗碱对照品稳定性

1020 引言本文中所述黄藤素是以小檗碱为原料，通过化学合成法制得的产品，合成品国内尚无批准的原料药，也尚未收载在欧洲药典和美国药典及论坛中，根据工艺研究过程中使用原辅料的情况，研究者以植物提取的黄藤素【1】标准，盐酸小檗碱【2】标准为基础，参照中华人民共和国药典（以下简称“中国药典”）、ICH技术指导原则及相关文献【3-19】，重点对产品含量检测方法、有关物质检测方法，如可能存在的有机杂质，金属离子钡的残留等情况进行研究。

通过系统的方法学考察、验证等制定了相应的检测方法，同时开展了稳定性研究，根据研究结果确定了产品贮存条件和产品有效期。

1 仪器与试药1.1仪器1.2试药盐酸巴马汀对照品，批号为110732-201510；盐酸小檗碱对照品，批号为110713-201212，盐酸药根碱对照品，批号为110733-201108，均购自国家官网；非洲防己碱，批号为151108，成都普菲德生物技术有限公司；黄藤素（编号YFS16001、YFS16002、YFS16003）；乙腈为默克色谱纯试剂，三氯甲烷、甲醇、乙醇、乙醚、盐酸、氢氧化钠、磷酸、磷酸二氢铵、硝酸等均为分析纯试剂；自制超纯水。

2含量检测方法2.1 色谱条件检测柱：安捷伦碳十八柱，直径4.6毫米，长度250毫米，孔径5微米；洗脱液为350mL乙腈与0.2%磷酸溶液650mL混合得到，流速为0.8mL/分钟；测试波长为342纳米；柱温35摄氏度；上样体积为5 微升。

2.2溶液的制备2.2.1稀释液分别量取乙腈350mL、0.2%磷酸溶液650mL，混合，摇匀，超声处理，即得2.2.2空白溶剂取1ml甲醇加稀释液稀释至25ml，摇匀，即得。

2.2.3盐酸巴马汀对照品溶液取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加“2.2.1”稀释液，制成浓度为0.04mg/mL的溶液，即得。

2.2.4盐酸小檗碱储备液取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加“2.2.1”稀释液，制成浓度为0.1mg/mL的贮备溶液。

关于薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量【摘要】目的建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。

方法样品经提取、薄层展开后，采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定，展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，激发波长Ex＝365 nm，发射波长Em＝409 nm。

结果盐酸小檗碱在0.473～3.784 μg范围内线性关系良好，r＝0.999 3。

黄连的回收率为99.03%，RSD＝1.86%。

香连丸的回收率为97.10%，RSD＝1.09%。

结论该法操作简便，分离效果好，灵敏度高。

【关键词】黄连；香连丸；荧光分光光度法；盐酸小檗碱；含量测定Key words：Coptis chinensis Franch.；Xianglian Pills；fluorescence spectrophotometry；berberine hydrochloride；content determination黄连为毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)、三角叶黄连(Coptis deltoides C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall.)的干燥根茎，具有清热燥湿、抗菌消炎、利胆等功效，临床上用于治疗消化道感染、泻痢等疾病。

以黄连作原料的中成药香连丸气微、味苦，具有清热燥湿、行气止痛等功效，临床多用于湿热痢疾、里急后重、腹痛泄泻、菌痢、肠炎等症。

盐酸小檗碱为两者共有的有效成分，具有抗菌、抗病毒、抗凝等作用，治疗原发性高血压、糖尿病等疾病。

本试验采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量，为其质量控制提供依据。

1 仪器与试药RF-5000荧光分光光度计(日本岛津)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，AG135(四川时运成套仪器有限公司)，80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)，CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

GMP文件验证篇盐酸小檗碱对照品溶液有效期验证方案方案编号: SOP-COD0400年月验证方案审批表盐酸小檗碱对照品溶液有效期验证方案目录1.目的2.背景3.稳定性研究3.1.标签3.2.对照品溶液配制3.3.贮存条件3.4.测试时间点3.5.分析方法和接受标准4.参考文件5.结果报告6.附件1.目的：确定盐酸小檗碱对照品溶液的有效期。

2.背景：因药典中没有规定对照品溶液的有效期，因此，对于没有规定有效期的盐酸小檗碱对照品溶液进行4个月的研究，来观察其稳定性，并规定其内部使用有效期。

本方案适用于常规方法—高效液相色谱法。

3. 稳定性研究：3.1.标签：用于对照品溶液效期研究的溶液瓶上需注明“用于对照品溶液效期研究”。

3.2.对照品溶液配制：根据《中国药典》2010版一部中药成方制剂—黄连上清片的含量测定项下对照品溶液制备方法。

3.3.贮存条件：按规定将配制好的盐酸小檗碱对照品溶液用封口膜封好，放在2～8℃的冰箱内贮存。

注意：用于分析前需放臵至室温。

3.4.测试时间点：分别在0天、7天、14天、30天、2个月、3个月、4个月内测试。

3.5.分析方法和接受标准:3.5.1分析方法：高效液相色谱法。

色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液（35：65）为流动相；检测波长345nm,理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000.对照品液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成1 ml含20ug的溶液。

分别制备两份盐酸小檗碱对照品溶液（贴上“用于对照品溶液效期研究”的贴签），在零时间点，对两份对照品溶液分析两次，互相复核含量。

在零时间点以外的测试时间点，分别新鲜配制一份对照品溶液，并用新鲜配制的对照品溶液和用于研究效期的两份对照品溶液分析两次。

用新鲜配制的对照品溶液的平均响应值，来重新计算用于研究效期的两份对照品溶液的含量值。

3.5.2接受标准：在每次分析前，观察测试用的对照品溶液与新鲜配制的对照品溶液的外观是否一致。

对照品溶液稳定性考察报告（薄层色谱法用于鉴别）报告书编号：YB- 1203·0017-00-01（2013）一、考察目的：通过薄层鉴别实验，考察葛根素等共33种对照品分别用相应溶剂所配制的相应浓度的对照品溶液的稳定性，从而规定其用于薄层鉴别实验的有效期。

二、考察范围：对照品溶液稳定性考察。

三、考察类型：同步考察四、考察日期及对照品及相应溶剂种类考察日期2013 年01 月01 日至2013 年08 月30 日对照品及相应溶剂种类：大黄素（甲醇液）、大黄素（乙醇液）、丹参酮IIA（乙酸乙酯液）、丹参酮IIA （甲醇液）、丹酚酸B（75%甲醇液）、丹皮酚（丙酮液）、甘草酸铵（甲醇液）、葛根素（甲醇液）、瓜氨酸（稀乙醇液）、桂皮醛（乙醇液）、华蟾酥毒配基（乙醇液）、黄芪甲苷（甲醇液）、黄芩苷（甲醇液）、黄芩素（甲醇液）、汉黄芩素（甲醇液）、苦参碱和槐定碱（混合乙醇溶液）、苦参碱（甲醇液）、氧化苦参碱（甲醇液）、苦杏仁苷（甲醇液）、芒柄花素（甲醇液）、毛蕊花糖苷（甲醇液）、没食子酸（甲醇液）、人参皂苷R0蜕皮甾酮（混合甲醇溶液）、山栀苷甲酯（乙醇液）、8-0-乙酰山栀苷甲酯（乙醇液）、芍药苷（乙醇液）、天麻素（甲醇液）、五味子甲素(三氯甲烷液）、盐酸水苏碱（无水乙醇液）、氧化苦参碱（乙醇液）、异钩藤碱（甲醇液）、栀子苷（乙醇液）、酯蟾酥毒配基（乙醇液）、梓醇（甲醇液）、盐酸小檗碱（甲醇液）、黄芩苷（（甲醇液）。

五、考察过程中的偏差及漏项情况：考察试验过程中无偏差情况发生，考察项目无遗漏；考察实施过程中考察方案无修改，考察记录完整，实验结果符合考察要求，无需做进一步的补充试验。

六、考察过程总结：检验仪器设备均在检定效期内；试剂试液等实验条件均符合检验要求；人员具有相应的检验能力和资质。

整个考察过程严格按《对照品（标准品）和对照药材溶液稳定性考察操作规程》(方案编码：1203·0117-00)进行考察。

RP-HPLC法测定复方芩连肠溶片中盐酸小檗碱的含量摘要】目的：建立以高效液相色谱法测定复方芩连肠溶片中盐酸小檗碱含量的方法。

方法：以Waters XterraRP18为色谱柱，流动相为乙腈-水＝55：45，检测波长为265nm，流速为1ml·min-1，柱温为25℃，进样量是10μl。

结果：盐酸小檗碱在3.071μg～24.568μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为100.2％，RSD=0.9％。

结论：本方法简便、准确、专属性强，可用于该制剂的含量测定。

【关键词】复方芩连肠溶片；高效液相色谱法；盐酸小檗碱【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）24-0326-02Determination of the Content of Berberine Hydrochloride in Fufang Qinlian Changrong Tablets by RP-HPLC【Abstract】 Objective: To establish a method for the determination of berberine hydrochloride in fufang qinlian changrong tablets. Methods: HPLC was performed on aC18 column using acetonitrile-water (55:45) as the mobile phase at a flow rate of1ml·min-1. The detection wavelength was at 265nm. The column temperature was 25℃and the sample size w as 10μl. Results: The linear range of berberine hydrochloridewas 3.071μg～24.568μg (r= 0.9999), the average recovery was 100.2％(RSD=0.9%). Conclusions: The method is simple, accurate, special and can be used for the quality control of fufang qinlian changrong tablets.【Key words】 fufang qinlian changrong tablets; HPLC; berberine hydrochloride该肠溶片是按照中医药理论组方，经多年临床经验用于治疗溃疡性结肠炎的中药制剂，处方中主要含有黄连、黄芩、黄芪等药材。

关于盐酸小檗碱对照品使用方法的讨论
乐健;刘茜;王林波;梅妮;王麟达
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2008(9)4
【摘要】当采用HPLC法测定含有盐酸小檗碱制剂（如盐酸小檗碱片）的含量时，会使用到盐酸小檗碱对照品[1]。

现在，对于盐酸小檗碱对照品如何使用和计算的
问题，主要有以下几种意见：①对照品不经处理直接使用，每分子盐酸小檗碱按含2份结晶水计算；②对照品经105℃干燥5h后使用，按含2份结晶水计算；③对照品经105℃干燥5h后使用，按不含结晶水计算，所得含量结果再乘以1．097（1．097为含2份结晶水盐酸小檗碱与盐酸小檗碱无水物分子量的比值）。

【总页数】2页(P250-251)
【作者】乐健;刘茜;王林波;梅妮;王麟达
【作者单位】上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203
【正文语种】中文
【中图分类】R921.2
【相关文献】
1.三黄片中盐酸小檗碱含量测定若干问题的讨论 [J], 周华杨;覃志高
2.盐酸小檗碱对照品干燥时间对含量测定影响的探讨 [J], 郑梓扬;何芳芳
3.黄连盐酸小檗碱对照品的制备 [J], 迟明艳;王正廷;袁洁;李俐
4.有关移液枪使用方法对移液准确性影响的讨论 [J], 于涛;赵秋蓉;吴迪
5.关于盐酸小檗碱对照品如何使用请示的回复 [J],
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RP-HPLC法测定甘海胃康胶囊中盐酸小檗碱的含量摘要：目的RP-HPLC法测定甘海胃康胶囊中盐酸小檗碱的含量。

方法采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：甲醇—水 (80:20)，检测波长为270nm；流速为1.0mL/min。

色谱柱为PhenomenexHyper Clone 5u BDS C18130A(250×4.60mm 5 micron)；柱温为30℃。

结果：盐酸小檗碱进样量在0.515～5.15m g范围内，线性关系良好，A=2.86*106C+7477，r=0.99993。

平均回收率为99.53%，RSD=2.9%。

结论：本方法简便准确、重现性好，可对甘海胃康胶囊进行质量控制。

关键词：甘海胃康胶囊；高效液相色谱法；盐酸小檗碱酮Ⅱ甘海胃康胶囊是由甘草、海螵蛸、沙棘、枳实、白术、黄柏、延胡索、绞股蓝总苷等中药组成的复方制剂。

具有健脾和胃，收敛止痛。

用于脾虚气滞所致的胃脘痛，及慢性浅表性胃炎见上述症状。

黄柏[1]为该制剂的主要药物之一，含有盐酸小檗碱等有效成分。

原标准中未收载含量测定项 ,本文采用高效液相色谱法对该制剂中的盐酸小檗碱含量进行研究 ,实验结果表明，该法简便易行，灵敏度高，能准确地反映盐酸小檗碱的含量[2]，为更好的控制本品的内在质量提供了科学依据。

1 仪器与试药Agilent 1100LC高效液相色谱仪，G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱，G1315BDAD检测器，Agilent 1100化学工作站，BP211D电子天平。

盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供；甘海胃康胶囊为医院售；甲醇为色谱纯；水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Phenomenex HyperClone 5uBDS C18130A(250×4.60mm 5 micron)；流动相：甲醇-水(80：20) [3]；流速：1.0mL/min检测波长：270nm；柱温：30℃；进样量：10μ1。