HPLC-UV法测定黄芪干燥根中黄芪甲苷的含量

HPLC法测定复方黄芪口服液中黄芪甲苷的含量
顾利青;汤道权
【期刊名称】《抗感染药学》
【年(卷),期】2000()3
【摘要】目的:测定复方黄芪口服液中黄芪甲苷的含量。

方法:高效液相色谱法。

采用YWG-C18柱,乙腈:水(1:2.3)为流动相,检测波长为203nm。

结果:不同批号(三个批号)样品中黄芪甲苷的含量分别为138μg/ml,177μg/ml,167μg/ml。

结论:该方法简便,快速,灵敏适用于复方黄芪口服液的质量控制。

【总页数】3页(P22-24)
【关键词】复方黄芪口服液;黄芪甲苷;高效液相色谱法
【作者】顾利青;汤道权
【作者单位】苏州市第五人民医院;南京中医药大学
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.HPLC-ELSD法测定阿胶黄芪口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 王欣;郭宏伟;张悫;庞燕军
2.HPLC-ELSD法测定黄芪口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 王俐
3.HPLC与比色法测定复方黄芪注射液中总皂苷与黄芪甲苷含量 [J], 李永吉;管庆霞;关延彬;李秋红
4.RP-HPLC法测定复方补气养血口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 翟海云;吴燕红;黄庆华;李苑新;袁旭江
5.用HPLC法测定复方附子口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 徐小芳
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第26卷,第3期光　谱　实　验　室Vol.26,No.3 2009年5月Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor atory May,2009UPLC-ELSD法测定黄芪中的黄芪甲苷含量杨俊 王文辉　王齐　孙晓东　朱艳琴(昆明理工大学分析测试研究中心　昆明市学府路253号　650093)摘　要　采用Waters A cquity U P L C BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7 m),流动相为乙腈-水(30∶70),流速为0.2mL·m in-1,柱温30℃,用U P LC-EL SD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量。

黄芪甲苷在0.10—0.50mg·mL-1范围内有良好的线性关系(r=0.9990),平均回收率(n=6)为98.9%。

该方法快速、准确、重复性好,为黄芪的质量控制提供了一种快速准确的检测方法。

关键词　超高效液相色谱-蒸发光散射;黄芪;黄芪甲苷中图分类号:O657.7+2 文献标识码:B 文章编号:1004-8138(2009)03-0484-031　前言黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge.V ar.mongholicus(Bunge.)H siao或膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)B unge.的干燥根,具有补气升阳、固表止汗、托疮生肌、利水消肿的作用,为许多中成药的组成成分[1]。

黄芪中的主要化学成分包括皂苷类、黄酮类及多糖类等[2]。

黄芪甲苷为黄芪的主要有效成分,是其质量控制的主要指标,其分析方法已有比色法、UV 法、荧光分光光度法、薄层扫描法、HPLC法、HPLC-M S等[3—8]。

其中比色法和薄层法存在定量不够准确的缺点,HPLC-MS虽然有较高的准确性和灵敏度,但使用仪器昂贵,操作复杂,故不适合常规分析,目前高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法是较为常用的黄芪甲苷的测定方法。

HPLC法测定归芪补血口服液中黄芪甲苷的含量在临床中，通过等度洗脱的高效液相色谱法，对归芪补血口服液中所含的微量物质黄芪甲苷的含量进行测定，在测试中，经过对不同的样品进行检测和对比，确立起了最好的提取条件以及检测条件。

这样的方法十分的简便容易操作，测量的精密度和准确度都是十分值得参考的，具有很好的稳定性，回收率也比较高，所以能够作为测定归芪补血口服液中黄芪甲苷提供方法的依据。

标签：高效液相色谱法；归芪补血口服液；黄芪甲苷；提取随着我国医药事业的发展，在我国很多的常见药物中，有很多时具有营养机制和抗氧化价值的，其药理活性和药用价值都是十分值得研究的，这些药物在我们的实际生活中跟人体健康密切相关。

黄芪中富含有很多的黄芪皂苷、黄酮等化合物，这些化合物自身有十分强的生物活性，归芪补血口服液能够用在治疗细胞免疫功能低下的慢性肝炎，也可以用于慢性活动性肝炎，在临床中治疗的效果十分的有效。

不仅如此，归芪补血口服液还可以用来治疗白细胞减少症及和血小板减少性紫癜。

在对蒙古黄芪中的皂苷类和黄酮类有效成分的相关的研究和探索中发现，皂苷类成分拥有14个共有峰，而黄酮类成分则具有12个共有峰[1-3]，这些数据说明这些成分的化学成分是十分复杂的，那么对有效物质的提取和检测的要求就会变的很高。

1材料与仪器试剂：95％乙醇；无水乙醇；氯仿；正丁醇；丙酮；无水乙醚；盐酸；碳酸钡；乙酸酐。

上述所有的剂都是分析纯。

仪器：UV-2401P紫外分光光度仪，TG328B 光电分析天平；CKQ-250DE型数控超声波清洗器。

Gilentlloo高效液相色谱仪；HH-S2系列恒温水浴锅；FTIR一8400S型红外光谱仪；GSP-84-02型磁力恒温搅拌器，上述仪器都是由岛津公司生产。

2检测的方法与取得的结果2.1对黄芪甲苷的提取归芪补血口服液50ml加入6倍体积量(V／V)的60％乙醇，NaOH饱和溶液调节pH至12，温度：调节至60°，通过加热回流提取2次，最终得到提取液200ml，之后通过减压浓缩获取到浓缩液约100ml。

天然产物研究与开发Nat Prod Res Dev 2019，31：434-440，458收稿日期：2018-07-16接受日期：2019-02-18基金项目：国家中药标准化项目（ZYBZH-C-QIN-45）；陕西省咸阳市2016年科学技术研究计划（2016k02-110）*通信作者Tel ：86-29-38185060；E-mail ：tzs6565@163．comHPLC-UV-ELSD 法同时测定黄芪中黄芪皂苷和黄酮类成分史鑫波1，2，唐志书1，2*，刘妍如1，2，宋忠兴1，2，陈衍斌3，苏瑞1，2，许刚3，王升41陕西中医药大学陕西省中药资源产业化协同创新中心；2陕西省创新药物研究中心，咸阳712083；3陕西步长制药有限公司，西安710075；4中国中医科学院中药资源中心，北京100700摘要：建立HPLC-UV-ELSD 法同时测定黄芪中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮的含量，并比较四种不同供试液中7种成分的含量差异，实验采用Agilent 5TC-C 18色谱柱（250mm ˑ4．6mm ，5μm ），0．3%甲酸水溶液-乙腈进行梯度洗脱，流速为1．0mL /min ，检测波长254nm ；柱温30ʎC ，漂移管温度70ʎC 。

在该色谱条件下，黄芪中7种成分能得到较好的分离，稳定性，重复性及精密度良好。

本方法能简便、快捷、有效的测定黄芪药材中多种成分含量。

大孔树脂制备供试品中黄芪皂苷和黄酮类成分更高，说明碱化处理对黄芪中的成分含量产生了一定影响。

关键词：黄芪；HPLC-UV-ELSD ；黄芪皂苷；黄酮类成分；含量测定；碱化处理中图分类号：R284．1；R917文献标识码：A文章编号：1001-6880（2019）3-0434-08DOI ：10．16333/j．1001-6880．2019．3．010Simultaneous determination of astragaloside and flavonoids components in astragali radix using HPLC-UV-ELSDSHI Xin-bo 1，2，TANG Zhi-shu 1，2*，LIU Yan-ru 1，2，SONG Zhong-xing 1，2，CHEN Yan-bin 3，SU Rui 1，2，XU Gang 3，WANG Sheng 41Shaanxi University of Chinese Medicine ，Shaanxi Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization ；2Shannxi Research Centre on Discovery and Innovation of New Medicine ，Xianyang 712083，China ；3Shaanxi Buchang Pharmaceutical Limited Company ，Xian 710075，China ；4National Resource Center for Chinese Materia Medica ，China Academy of Chinese Medical Sciences ，Beijing 100700，ChinaAbstract ：HPLC-UV-ELSD method was developed for the simultaneous determination of astragaloside I ，astragaloside II ，astra-galoside III ，astragaloside IV ，calycosin glucoside ，ononin ，and calycosin in Astragali Radix ．This method was then used to de-termine the contents of seven active analytes in four different testing samples．The seven compounds were analyzed simultane-ously with an Agilent C 18（250mm ˑ4．6mm ，5μm ）column by gradient elution using 0．3%（v /v ）formic acid-acetonitrile as the mobile phase at the flow rate of 1．0mL /min ；The detection wavelength was set at 254nm ，the column temperture was maintained at 30ʎC ，and the evaporative light-scattering detector （ELSD ）drift tube temperature was 70ʎC．The seven active analytes of Astragali Radix can be separated in the chromatographic conditions．Precision ，repeatability and stability were good．The developed method was simple ，rapid and effective for the determination of the components in Astragali Radix．As a result ，astragaloside and flavonoids were higher in the preparation of macroporous resin ，indicating that alkalization had an effect on the content of composition in Astragali Radix ．Key words ：astragali radix ；HPLC-UV-ELSD ；stragaloside ；flavonoids ；content determination ；alkalization黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membrana-ceus （Fisch．）Bge．var．mongholicus （Bge．）Hsiao 或膜荚黄芪Astragalus membranaceus （Fisch．）Bge．的干燥根［1］。

HPLC法测定黄芪口服液中黄芪甲苷的含量
戴军平
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】1999(14)4
【摘要】建立了测定黄口服液中黄芪甲苷的ＨＰＬＣ法，采用Ｃ１８柱，流动相为乙腈一水（１：２．５），检测波长为２０３ｎｍ，平均回收率为９７．４％，ＲＳＤ为１．３８％。

【总页数】1页(P149)
【作者】戴军平
【作者单位】江苏省扬子江药业集团药物研究所;江苏省扬子江药业集团药物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R286.0
【相关文献】
1.HPLC-ELSD法测定阿胶黄芪口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 王欣;郭宏伟;张悫;庞燕军
2.HPLC-ELSD法测定黄芪口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 王俐
3.反相高效液相色谱法测定复方黄芪口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 吴清华;
4.反相高效液相色谱法测定复方黄芪口服液黄芪甲苷的含量 [J], 吴清华
5.HPLC法测定复方黄芪口服液中黄芪甲苷的含量 [J], 顾利青;汤道权
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80、85、90、95、100 °C，加8倍水量，煎煮1次1 h,合 并煎液过滤，按“2. 1.2”方法制备成供试品溶液，在 “2. 1.3”色谱条件下进行含量测定,考察煎煮温度 对黄便甲昔的含量影响，结果见图2。由图可见，随 着煎煮温度的提高，黄罠甲昔的含量也有所提高。 在90、95、100 T时，黄便甲昔的含量值较高并趋向 稳定。因此，选取90 ,95,100七作为3个水平进行 正交实验。 2. 2.1. 3煎煮时间对制剂中黄便甲昔含量的影响
2.1.9加样回收试验取已知含量（黄罠甲昔 0. 15 g/L）的同一批样品，精密移取10 mL,加入对 照品约1.5 mg,按“2.1.2”制备加标样供试液。精 密吸取加标样供试液20piL,按上述测定方法测定其 峰面积,计算回收率和RSD。结果见表1。
表1增乳口服液中黄英甲昔的加样回收试验结果
样品含量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD 编号
5=6)。
表1英参固表口服液中黄黃甲昔的回收率试验
No
样品量（mL）
样品含量（吨）
加入量（m呂）
测得量（m呂）
1
20
2
20
3
20
4
20
5
20
6
20
1.0380 1.0380 1.0380 1.0380 1.0380 1.0380
1.0112 1.0112 1.0112 1.0112 1.0112 1.0112
2. 2. 7精密度 将浓度为0. 30 336 g • L"对照品 入色谱仪测定含量，计算黄罠甲昔平均含量为
溶液进样10 “L,重复6次，计算峰面积RSD为 0. 0 519 g • L" ,RSD =0. 48%（n=6）。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展张雪(本溪化学工业学校,辽宁本溪117019)摘要:在综述国内黄芪中黄芪甲苷含量测定方法基础上,分析黄芪中的黄芪甲苷含量测定方法研究进展,包括HPLC-ELSD 法、HPLC /ESI-MS 联用法、HPLC-UV 法、UPLC-MS 法、HPLC-DAD-ELSD 法等,旨在为进一步开展黄芪相关研究提供理论借鉴。

关键词:黄芪甲苷;含量测定;黄芪;HPLC-ELSD;HPLC /ESI-MS 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1674-1161(2019)04-0049-03黄芪具有补气升阳、益卫固表、利水消肿和托疮生肌等功效。

目前,主要用黄芪皂苷中的黄芪甲苷(astraga bside IV)作为评价黄芪药材质量的标准。

在查阅收集大量文献的基础上,综述黄芪甲苷的检测方法研究进展,为黄芪甲苷相关研究提供技术借鉴。

1黄芪中黄芪甲苷含量测定方法黄芪甲苷的检测方法主要有HPLC-ELSD 法、HPLC /ESI-MS 联用法、HPLC-UV 法、UPLC-MS 法、HPLC-DAD-ELSD 法、近红外光谱法等。

1.1HPLC-ELSD 法蒸发光散射检测器作为通用型检测器,不依赖于化合物光学性质,对非挥发组分均有较好的响应,广泛应用于皂苷类、萜类、生物碱类、糖类等中药成分的质量控制。

崔雪莹等探讨蒸发光散射检测器高效液相色谱法(HPLC-ELSD)测定黄芪中4种皂苷类活性成分含量的可行性。

采用ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.8mL /min,载气流速1.2L /min,漂移管温度105℃。

测定结果表明,黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ的含量分别为4.40,0.2,1.42,1.31mg /g,分别在0.476~5.712,0.139~8.340,0.434~6.944,0.392~4.704μg 范围内呈线性关系,精密度分别为2.25%,0.81%,2.52%,2.31%,平均回收率分别为101.84%,98.96%,103.27%,100.35%。

广东化工2019年第21期第46卷总第407期134-HP1C-E1SD法测定黄罠精粉中黄罠甲昔的含量杨广安，马海霞，谭琪明，陈敏(铜仁职业技术学院，贵州铜仁554300)［摘要］为更好地控制黄罠精粉的质量稳定性，建立HP1C-E1SD法测定黄英精粉中黄英甲昔的含量的方法；采用安捷伦1260型高效液相色谱仪和Waters Cis柱(4.6mmx250rrnn,5pm),以乙睛.水(32：68)为流动相梯度洗脱，流速：1mL/min,柱温30°C,蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按黄英甲昔峰计算不低于4000o结果表明，黄茂进样量在0.52-5.30昭内范围内均与峰面积呈良好线性关系，相关系数分别为：1.000,平均回收率分别为99.8%(RSD=0.59%),该方法方便快捷，重现性好，结果可靠，可用于测定黄英精粉中黄罠甲昔的含量。

［关键词JHP1C-E1SD法：黄花精粉：黄罠甲昔［中图分类号］TQ786［文献标识码］A［文章编号］1007-1865(2019)21-0134-02Determination of Astragaloside IV in Radix Astragali by HP1C-E1SDYang Guang'an,Ma Haixia,Tan Qiming,Chen Min(Tongren Polytechnic College,Tongren554300,China)Abstract:To better control the quality stability of Astragalus membranaceus powder,a method tor determining the content of Astragaloside IV in Astragalus membranaceus powder by HP1C-E1SD method was established.Agilent1260high performance liquid chromatography and Waters Cis column(4.6mm x250mm,5 pm),eluted with acetonitrile-water(32:68)as mobile phase,flow rate:1mL/min,column temperature30°C,detected by evaporative light scattering detector, theoretical plate number according to astragaloside IV The peak calculation is not less than4000.The results showed that the injection volume of Astragalus membranaceus was linear with the peak area in the range of0.52-5.30pg.The correlation coefficients were1.0and the average recovery was98.6%(RSD=1.9%). The method is convenient and fast.It has good reproducibility and reliable results.It can be used to determine the content of astragaloside IV in Astragalus membranaceus.Keywords:HP1C-E1SD method；Astragalus membranaceus：Astragalus黄英为豆科植物蒙古黄^.(Astragalus menbranceus(Fisch)Bse. var.mongholicusfBze.)Hsiao)或荚膜黄英(Astragalus menbranceus /7^必丿砂匕)的干燥根〔叽通过改善中药材粉碎粒度缩短中药浸出时间，使得中药指标性成分最大限度地溶出，提高其释放速度和利用率，中药有效成分的浸出与扩散面积(粉碎度)和扩散时间有关卩⑷。

黄芪中黄芪甲苷含量测定的最新研究进展叶飞;王亚丽;魏娟娟;张志峰;丁建海【摘要】综述了黄芪中有效成份黄芪甲苷含量测定方法的最新研究进展,主要包括薄层扫描法、荧光分光光度法、HPLC法和近红外光谱法,评述了每种分析方法的特点.【期刊名称】《宁夏师范学院学报》【年(卷),期】2018(039)004【总页数】5页(P52-56)【关键词】黄芪;黄芪甲苷;含量测定【作者】叶飞;王亚丽;魏娟娟;张志峰;丁建海【作者单位】宁夏师范学院化学化工学院, 宁夏固原 756000;宁夏师范学院化学化工学院, 宁夏固原 756000;宁夏师范学院化学化工学院, 宁夏固原 756000;宁夏师范学院化学化工学院, 宁夏固原 756000;宁夏师范学院化学化工学院, 宁夏固原 756000【正文语种】中文【中图分类】R917黄芪，又名黄耆，始适载于《神农本草经》，中国药典2010版收载为豆科植物蒙古黄芪(Astragalus membranaceus (Fish.)Bge.var.mongholicus(BGE.)Hsiao)或膜荚黄芪(Asraagalus membranaceus (Fish.)Bge)的干燥根，味苦，性温，归肺，脾经.具有补气固表、利尿排毒、排脓、敛疮生肌之功效，用于气虚乏力、中气下陷、久泄脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水肿、久溃不敛、慢性肾炎、蛋白尿、糖尿病等病症.主要分布于我国北方地区，普遍生长于大兴安岭与东北的东部山区，河北、山西、内蒙古、陕西、甘肃、宁夏等省区均有分布.黄芪甲苷，又称黄芪皂苷Ⅳ(Astragaloside Ⅳ)，属于四环三萜类皂苷，是中药黄芪中的主要活性成分之一[1]，其结构如图1所示.药理实验表明，其具有增加血清中cAMP及再生肝DNA含量，促进NK细胞活性，降压消炎，镇静镇痛，及抗肝损伤等作用[2-4]，因此，黄芪甲苷是黄芪中最重要的活性成分，常作为黄芪药材的定性定量指标.对于黄芪甲苷含量的测定方法，近些年研究较多，本文对目前最新的几种测定方法进行概述.图1 黄芪甲苷的分子结构1 薄层扫描法薄层扫描法是指用一定波长的光照射经薄层层析的层析板，对具有吸收或能产生荧光的层析斑点进行扫描，采用透射法或反射法测定吸收的强度，检测层析谱，比较其薄层扫描图谱达到定性定量测定的目的[5].张崇禧等[6]采用薄层扫描法测定了不同生长期、不同产地野生和栽培黄芪中黄芪甲苷的含量.以硅胶G与0.5%CMC按照1∶3混合自制薄层板，展开剂为氯仿∶甲醇∶水(65∶35∶10)，10%硫酸乙醇为显色剂，110 ℃烘烤5 min～10 min至斑点显色清晰，采用双波长(λS=530 nm，λR=700 nm)锯齿扫描，黄芪甲苷在1.1 μg～5.5 μg范围内线性关系良好，平均回收率100.5%，RSD=2.19%(n=3).该方法简单、精密度高、回收率较高,能够准确地测定黄芪甲苷的含量.2 荧光分光光度法刘养清，杜鸣，徐秉玖等[7,8]分别利用大茴香酸在硫酸介质中，香草醛在磷酸介质中与黄芪甲苷反应产生强烈荧光的特性进行测定黄芪中黄芪甲苷含量.结果显示：在大茴香酸-硫酸体系中，大茴香酸与黄芪甲苷的反应生成物的最大激发波长为Ex=320 nm，最大发射波长Em=387 nm，黄芪甲苷在2.0 μg/mL～40 μg/mL 浓度与荧光强度呈良好的线性关系.平均回收率为98.5%～101.9%，RSD=1.8%(n=6).该方法灵敏度高，选择性好，线性范围宽，检出限低.3 高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)因具有灵敏性高、分离度好，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中.3.1 HPLC-UV法HPLC法中最常用的检测器是紫外检测器，黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，只在紫外末端有最大吸收.姜丽丽等[9]在检测波长为203 nm，色谱柱为Kromasil C18柱，流动相为乙腈∶水(32∶68)，流速1.0 mL/min的条件下，采用HPLC-UV法的方法对蒙古地区黄芪中的黄芪甲苷含量进行了测定，其结果显示黄芪甲苷浓度在0.05 mg/mL～0.5 mg/mL范围内线性关系良好，平均回收率可达98.216%，RSD为2.85%，满足检测要求.3.2 柱前衍生化HPLC法黄芪甲苷因其独特的结构，只有在紫外末端203 nm处有最大吸收，且其在黄芪中的含量较低，导致采用HPLC-UV法测定黄芪甲苷含量干扰多，准确度低.Meicun Yao等[10]采用柱前衍生化HPLC法，通过向黄芪甲苷分子中引入具有紫外吸收的官能团，对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化反应，使其最大吸收波长成功移至230 nm处，提高了检测灵敏度和分离选择性，如图2所示.(a)空白溶液 (b)黄芪甲苷标品(1内标维生素D3；2黄芪甲苷衍生物)图2 衍生后黄芪甲苷色谱图以苯甲酰氯-吡啶(1∶2.5)为衍生化试剂，对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化.色谱柱为Spherisorb ODS C18柱(4.4× 250 mm ，5 μm)，以甲醇-四氢呋喃-水(90∶4∶6，0.2%三乙胺)为流动相，检测波长230 nm.结果黄芪甲苷在0.004～0.080 mg/mL范围内呈线性(r= 0.9999),平均回收率为94.7%.该衍生化方法反应条件温和，产物稳定，进样样品前处理简单，内标物选择适当，是一种较好的黄芪质量控制方法.3.3 HPLC-ELSD法HPLC-ELSD法是目前《中国药典》2010版中采用的测定黄芪甲苷含量的主要方法，其原理是恒定流速的洗脱液进入检测器经高压气流雾化，形成小液滴进入蒸发室，低沸点的组分及流动相被蒸发，高沸点小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电倍增管接收形成电信号得到响应，从而达到组分含量检测的目的，不要求被检测组分有特定的化学结构[11].Wenkui Li等[12]采用HPLC-ELSD法对黄芪中黄芪甲苷的含量进行测定，色谱柱：XDB C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：A相为乙腈，B相为水，梯度洗脱.A相随时间的变化为：20%～58%(0～30 min)，58%～90%(30～31 min)，90%(31～35min,洗脱)，90%～20%(36～37 min)，20%(37～40 min)；流速：1.6 mL/min；柱温20℃；ELSD检测器，漂移管温度：43℃，柱压为3.4 bar.其线性关系良好(r=0.998),平均回收率为95.8%，RSD=1.48%(n=3).3.4 HPLC-MS法由于质谱检测器的高灵敏度，使得高效液相-质谱(HPLC-MS)联用技术在天然药物成分定性定量领域得到广泛应用[13-15].郑重、宋凤瑞等[16]应用高效液相色谱-质谱串联技术(HPLC-MS)，以薯蓣皂苷为内标化合物，用色谱保护柱分离大部分干扰成分，采用Waters公司的多反应检测扫描模式检测黄芪中黄芪甲苷的含量.结果表明，黄芪甲苷在2.85～57 mg/L的范围内线性关系良好，稳定性和重复性试验RSD小于3%，样品回收率为98.9%.4 近红外光谱法近红外光谱法与传统分析方法相比，无污染，分析速度快，样品不需要特殊处理，是近年来新兴的一种绿色分析方法，可同时分析样品中多种成分，且适用于现场及在线检测[17].战皓、吴宏伟等[18]采用近红外漫反射光谱法对黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷的含量进行检测.以液相色谱质谱连用分析值为参比，采用偏最小二乘法建立黄芪甲苷的定量分析模型，其红外光谱及分析模型如图3.图3 黄芪甲苷近红外光谱及其含量测定模型结果显示，黄芪甲苷近红外光谱经二阶导数+Savitzky-Golay卷积平滑预处理后模型最优，模型参数R2为0.855，校正集R2为0.796，RMSEP值为0.0064，RMSEC值为0.00799，可快速对黄芪甲苷含量进行检测.5 讨论黄芪中黄芪甲苷的检测方法众多，薄层扫描法和荧光分光光度法因其灵敏度高，选择性好，线性范围宽，检出限低，较其他检测方法有一定优势，但因其操作繁琐，使其应用受到一定的限制.近年来，随着仪器分析的发展，新型检测器的不断涌现，如ELSD检测器的问世，使原本无紫外吸收的黄芪甲苷得到很好的分离检测.而化学衍生化法，色谱与质谱联用法(HPLC-MS)，各取所长，也可对黄芪中黄芪甲苷很好地进行定性定量分析，但受到衍生化条件及检测器的限制，分析成本较高.近红外波谱法利用近红外波谱技术与数学建模相结合的方法，绿色无污染，分析速度快，且适用于现场及在线检测，是黄芪甲苷分析检测技术发展的新方向.参考文献:[1] 屠鹏飞，郭洪祝，果的安.中药与天然产物活性成分研究及新药的发现[J].北京大学学报，2002,34(5)：513-518.[2] 段亚丽，谢梅冬.黄芪化学成分及其有效成分黄芪甲苷含量测定的研究现状[J].中国兽药杂志，2005,39(3)：35-38.[3] Zhang Y D，Wang Y L，Shen J P，et al.Effects on blood pressure andinflammation of astragalous saponin 1，a principle isolated from Astragalus membranaceus Bge[J].Acta Pham Sin (in Chinese)，1984，19(5):333-337.[4] Zhang Y D，Shen J P，Wang Y L，et al.Effects on astragalus saponin 1，on cAMP and cGMP level in plasma and DNA synthesis in regenerating liver[J].Acta Pham Sin (in Chinese)，1984，19(8):619-621.[5] 孙安武.黄芪薄层色谱发探讨[J].中国中医药现代远程教育,2007,5(8):40-41.[6] 张崇禧，王艳芳，蔡恩博.薄层扫描法分析黄芪中黄芪甲苷含量[J].资源开发与市场，2010,26(9)：769-772.[7] 刘养清，杜鸣，徐秉玖.大茴香酸-硫酸荧光体系测定黄芪甲苷[J].药学学报，2000,35(7)：544-546.[8] 杜鸣，刘养清，刘明杰,等.香草醛-磷酸体系荧光分光光度法测定黄芪甲苷[J].北京医科大学学报，2000,32(3)：248-250.[9] 姜丽丽，张传领，苏丽娟,等.HPLC-UV法测定黄芪干燥根中的黄芪甲苷的含量[J].安徽农业科技，2014,42(22)：7381-7383.[10] Meicun Yao,Ying Qi，Kaishun Bi，et al.A Precolumn Derivatization High-performance Liquid Chromatographic Method wit Improved Senstivity and Specificity for the Determination of Astragaloside Ⅳ in Radix Astragali[J].Journal of Chromatographic science,2000,38(8):325-328. [11] 欧阳春华.黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较[J].中国现代药物应用,2009,3(15):139-141.[12] Wenkui Li ,John F，Fitzloff,et al.A Precolumn Determination of Astragaloside Ⅳ in Radix Astragali Using High-performance Liquid Chromatography with Evaportative Light-scattering Detection[J].Journal ofChromatographic science,2001,39:459-462.[13] Stahnke H，Reemtsma T，Alder pensation of matrix effects by postcolumn infusion of a monitor substance in multiresidue，analysis with LC-MS/MS[J].Analytical Chemistry,2009,81(6):2185-2192.[14] TOKMANA N,SOLERA C ，MARINEL F，et al.Determination of amitraz and its transformation products in pears by ethyl acetate extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry [J].Journal of Chromatography A，2009,1216(15):3138-3146.[15] BRIAN K，STEVEN J，LEHOTAY，et al.New method for the analysis of flukicide and other anthelmintic residues in bovine milk and liver using liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Analytic Chemical Acta,2009,637(1-2):196-207.[16] 郑重，宋凤瑞，刘舒,等.Semi-LC/MS技术快速定量分析黄芪样品中黄芪甲苷含量[J].质谱学报,2012,33(4):208-221.[17] 史春香，杨悦武，郭治昕,等.近红外光谱在中药质量控制中的应用[J].中草药,2005,36(11):1731-1733.[18] 战皓，吴宏伟，张东,等.近红外光谱法测定不同产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷含量[J].光谱学与光谱分析,2017,37(5):1391-1396.。

HPLC 法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的研究
刘翠华;昌畅
【期刊名称】《中国民族民间医药》
【年(卷),期】2016(025)009
【摘要】目的：探讨采用高效液相色谱法鉴别黄芪与红芪中黄芪甲苷含量的价值。

方法：根据高效液相色谱法，色谱柱（150 mm ×4.4mm，5μm）；流动相：乙
腈－水（32∶68）；流速1 ml ／min；柱温：25℃。

分别对黄芪与红芪中的黄芪甲苷进行含量测定。

结果：在2.024～10.120μg 范围内，黄芪甲苷的线性关系良好。

结论：该方法具有准确、稳定、可重复的特点。

黄芪中明显含有黄芪甲苷，而红芪中黄芪甲苷的含量十分微少，可提供此法鉴别黄芪与红芪。

【总页数】2页(P24-25)
【作者】刘翠华;昌畅
【作者单位】南方医科大学南方医院药材科，广东广州 510515;南方医科大学南
方医院药材科，广东广州 510515
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.HPLC法测定红芪中黄芪甲苷的含量 [J], 王玉霞;金晓玲
2.黄芪注射液中黄芪甲苷含量测定HPLC法的比较研究 [J], 李燕
3.UHPLC-MS-MS法同时测定舒筋活血颗粒中葛根素和黄芪甲苷的含量 [J], 陈昭;
陈伟韬;胥爱丽;李养学;毕晓黎
4.UHPLC-MS-MS法同时测定舒筋活血颗粒中葛根素和黄芪甲苷的含量 [J], 陈昭;陈伟韬;胥爱丽;李养学;毕晓黎;;;;;;;;;;
5.HPLC法比较5个厂家黄芪配方颗粒中黄芪甲苷的含量 [J], 林翠华;孙涛;邵立功;纪国力
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ters 2424 ） ， KQ100 型超声清洗器 （ 昆明市超声仪器有限公 Sartorius BP211D 分析天平（ 德国赛多利斯） ， 黄芪甲苷 司） ， 200608 ， 对照品（ 批号： 110781购自中国药品生物制品检定 所） ， 药材黄芪为豆科植物膜荚黄芪 Astragalus m em branaceus（ Fish） Bge． 的干燥根， 购自郑州药材市场。 乙腈、 甲醇 为色谱纯、 正丁醇、 氨水均为分析纯， 水为重蒸去离子水。
回收率为 99． 3% 。结论： 该方法分离度高， 重现性好， 灵敏度高， 准确， 简便， 无干扰等优点， 可广泛用于黄芪药材的质量控制 。 Abstract： Objective： To determine astragaloside Ⅳ in Astragalus by HPLC － ELSD． Methods： HPLC － ELSD was used in the quantita5 μm， tive analysis of astragaloside Ⅳ in the sample． The separation was performed on Venusil XBP C18 column （ 25． 0 mm × 4． 6 mm， Agela Technologies） column with amixture of acetonitrile － water （ 32 68 ） asmobile phase． The flow rate was 1． 0 mL · min － 1 ． The temperature of drift tube formeasurement was 60 ℃ ． Results： The standard curve was linear in the range of 1． 4ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ2 8 ～ 7． 064 0 μg for asn = 5 ） ． The average recovery was 99． 3% ． Conclusion： The method is simple， reliable and good． It may be used tragalosideⅣ（ r = 0． 999 ， for the quality control of astragali． 关键词： 黄芪； 高效液相 － 蒸发光散射检测法； 黄芪甲苷 Key words： astragalus； HPLC － ELSD； Astragaloside Ⅳ 中图分类号 CLC number： R284． 2 文献标识码 Document code： A 文章编号 Article ID： 1674 － 8999 （ 2012 ） 03 － 0334 － 02

HPLC法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷及甘露醇的含量实验目的本实验旨在通过HPLC法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇的含量，以期为其质量的控制提供可靠的数据支持。

实验仪器与试剂实验中所用的仪器为高效液相色谱仪(HPLC)，色谱柱为C18柱，检测波长设定为280nm。

实验中所用的试剂有甲醇、乙腈、纯水、黄芪甲苷标准品和甘露醇标准品。

实验方法1. 标准曲线的制备分别取黄芪甲苷标准品和甘露醇标准品，按一定浓度比例用甲醇稀释，分别制备不同浓度的标准溶液。

然后分别注入HPLC仪器进行检测，得到各自的峰面积值。

再根据不同浓度的标准溶液的峰面积值和浓度的线性关系，绘制出黄芪甲苷和甘露醇的标准曲线。

2. 样品的制备取玉屏风颗粒适量，用甲醇进行提取，振荡均匀后通过0.22μm的滤膜过滤，得到待测的样品溶液。

3. HPLC法测定将待测的样品溶液注入HPLC仪器进行检测，根据样品的峰面积值与标准曲线的对应关系，计算出样品中黄芪甲苷和甘露醇的含量。

实验结果通过HPLC法测定，得到玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇的含量分别为Xmg/g和Ymg/g。

经过多次实验测定，数据具有较好的重复性和准确性。

讨论与分析本实验采用HPLC法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇的含量，结果表明，玉屏风颗粒中的有效成分含量较为稳定，符合药典规定的要求。

在实际应用中仍需不断加强对原材料和生产工艺的管理，保证产品的质量和疗效。

参考文献[1] 张三, 李四. 中药分析实验教程. 北京：化学工业出版社, 2010: 108-120.[2] 王五, 赵六. 高效液相色谱法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇含量. 药学杂志, 2015, 10(3): 56-60.。

反相高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量
蔡进章;王增寿;章晓东
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2003(012)012
【摘要】目的:用反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)测定黄芪中黄芪甲苷的含量.方法:采用RP-HPLC法,流动相为乙腈-水-磷酸(1:2:0.1),检测波长为203 nm.结果:黄芪甲苷浓度在1.28～12.8ug 范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为
96.8%,RSD为1. 17%(n=6).结论:RP-HPLC法操作简便,测定结果可靠,适用于黄芪中黄芪甲苷的含量测定.
【总页数】2页(P36-37)
【作者】蔡进章;王增寿;章晓东
【作者单位】温州医学院附属第二医院,浙江,温州,325027;温州医学院附属第二医院,浙江,温州,325027;浙江省兰溪市药品检验所,浙江,兰溪,321100
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
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5.反相高效液相色谱法测定益气生血胶囊中黄芪甲苷含量的方法学研究 [J], 孙宾娟
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HPLC法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷及甘露醇的含量【摘要】本研究利用HPLC法测定了玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇的含量。

首先进行了样品处理，并通过优化色谱条件建立了标准曲线。

然后分别测定了黄芪甲苷和甘露醇的含量。

结果显示，玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇的含量分别为X和Y。

对测定结果进行了分析，并探讨了研究结果的意义。

研究结果表明，该方法可准确测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇的含量，为该药物的质量控制提供了依据。

未来的研究可以进一步完善该测定方法，提高测定的准确性和灵敏性，以及探讨玉屏风颗粒中其他成分的含量及其药效成分的相互作用。

【关键词】HPLC法、玉屏风颗粒、黄芪甲苷、甘露醇、含量测定、样品处理、色谱条件、标准曲线、结果分析、研究意义、研究展望。

1. 引言1.1 研究背景玉屏风颗粒是一种常用的中药制剂，具有清热解毒、祛风排湿的功效，广泛应用于临床治疗。

黄芪甲苷和甘露醇是玉屏风颗粒中重要的活性成分，对其含量的准确测定具有重要意义。

黄芪甲苷是一种有效的生物活性成分，具有增强人体免疫功能、抗疲劳、抗氧化等多种药理作用。

甘露醇是一种重要的化学成分，具有保湿、滋润、镇静等功效。

准确测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇的含量，对研究其药效成分和质量控制具有重要意义。

目前，高效液相色谱法（HPLC）已被广泛应用于中药成分的分析和检测。

本研究旨在借助HPLC技术，建立准确、快速的测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷和甘露醇含量的方法，为其质量评价和临床应用提供科学依据。

通过本次研究，可以更好地了解玉屏风颗粒的药效物质基础，推动其在临床治疗中的应用。

1.2 研究目的研究目的：本研究旨在利用HPLC法测定玉屏风颗粒中黄芪甲苷及甘露醇的含量，为其质量控制提供有效手段。

具体而言，通过确定最佳的样品处理方法、优化色谱条件、建立合适的标准曲线，测定黄芪甲苷和甘露醇在玉屏风颗粒中的含量水平，从而为该中药制剂的质量评价和控制提供依据。

通过本次研究，还可探讨黄芪甲苷和甘露醇对玉屏风颗粒药效的贡献，为进一步研究中药复方的药效成分及其相互作用提供借鉴。

黄芪注射液中黄芪甲苷含量测定HPLC法的比较研究李燕【期刊名称】《十堰职业技术学院学报》【年(卷),期】2011(024)004【摘要】采用等度洗脱的高效液相色谱法,对黄芪注射液中主要微量物质黄芪甲苷的含量进行测定,通过对不同样品的分析比较,建立了最佳提取条件和检测条件。

该法操作简便迅速,精密度和准确度均较理想,稳定性强,回收率高,可为测定黄芪注射液中黄芪甲苷提供方法依据。

%With the method of equal concentration elution of HPLC,the main trace of astragaloside in astragalus injection is determined by analysis and comparison of different samples to establish the best extraction conditions and testing conditions.The method is simple and fast,it has an ideal precision and accuracy,it is reliable and highly recycled,and it will provide a way and basis for the determination of astragaloside in astragalus injection.【总页数】2页(P104-105)【作者】李燕【作者单位】十堰职业技术学院生化与环境工程系,湖北十堰442000【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.黄芪注射液中药用辅料聚山梨酯80两种含量测定方法的比较研究 [J], 王少敏;夏晶;陈洁;王柯;季申2.黄芪甲苷提取物中黄芪甲苷含量测定方法比较研究 [J], 侯素云;王宗权;贾继明3.高效液相色谱法测定黄芪注射液中的黄芪甲苷含量 [J], 金昕;姚令4.用HPLC法测定女士养阴栓中黄芪甲苷的含量测定 [J], 卢迎春5.黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究 [J], 陈晓勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量
段亚丽
【期刊名称】《广西畜牧兽医》
【年(卷),期】2004(20)6
【摘要】采用高效液相色谱法对四黄解毒片中黄芪的黄芪甲苷进行定量分析,使用C18柱(Waters3.9×150mm),乙腈-水(1:2)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长201nm.结果加样回收平均率为97.22%(n=6),黄芪甲苷在0.059～7.6μg/ml范围内线性关系良好,Y=5.836×105X-1.625,r=0.9995.该方法操作简便,分离效果好,结果准确.
【总页数】3页(P248-250)
【作者】段亚丽
【作者单位】广西兽药监察所,南宁,530001
【正文语种】中文
【中图分类】S859.2
【相关文献】
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2017年28期科技创新与应用Technology Innovation and Application方法创新HPLC测定不同生长年限蒙古黄芪中黄芪甲苷含量*闫晋晋1，姚妙1，杨薪正1，王信隆2,廖国珍3(1.西安医学高等专科学校，陕西西安710309;.西安交通大学医学部，陕西西安710061;.西安市第二人民医院，陕西西安710003)摘要：目的:探讨蒙古黄芪（AstragalusRadix)中黄芪甲苷的含量与生长年限的关系，为确定其最佳采收年限、保证药材质量控制、种质资源的评价及为了进一步明确其功效提供参考依据。

方法：采用H P L C法测定不同生长年限的蒙古黄芪中黄芪甲苷的有效含量。

色谱柱为A g i l e n t Z O R B A X S B-C18柱(4.6m m x150m m，5滋m)，流动相经过预实验确定为乙腈-水（35:65)，最佳流速为1.0ml/min，最佳柱温为30益。

结果：不同生长年限的蒙古黄芪中黄芪甲苷含量发生明显变化，随着生长年限的增长，药材中黄芪甲苷含量基本呈上升趋势，该成分在1、年生蒙古黄芪中含量较低，且2年生含量略微高于1年生的含量;3、年生蒙古黄芪中含量出现明显升高的趋势，尤其是4年生含量急剧上升，幅度最大。

5、年生药材中其含量变化不大，且有微弱的下降趋势。

结论:不同的生长年限蒙古黄芪中黄芪甲苷含量差异较大，应根据不同需求选择合适的采收时间。

关键词：蒙古黄芪；高效液相色谱法;黄芪甲苷;含量比较;不同生长年限中图分类号:Q94 文献标志码:A文章编号院2095-2945 (2017) 28-0085-03黄芪系豆科植物膜英黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.或 家古黄芪 Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongho-licus (Bge.)Hsiao.的干燥根茎[1]。

为《中国药典》收录的常用中药材 之一，较膜荚黄芪根部在生长过程中形态易产生鸡爪根的特 点[2]，蒙古黄芪则相对稳定，近年来商品黄芪中多为蒙古黄芪。