细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
在显微镜下不同的细胞有不同的形态。
利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。
培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。
生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。
完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。
②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。
血清的分类最常用的是胎牛血清。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。
细胞冻存液配制方法细胞冻存液可是细胞保存的重要法宝呢！要想配制出完美的细胞冻存液，那可得有点小窍门哦。
咱先来说说需要准备的东西。
就像做饭要有食材一样，细胞冻存液也有它特定的“食材”。
那就是培养基、血清和 DMSO。
这三样东西就像是细胞冻存液的“铁三角”，少了谁都不行。
先说培养基，这可是细胞的“美食大餐”呀，能给细胞提供各种营养。
血清呢，就像是细胞的“滋补品”，能让细胞活力满满。
而 DMSO 就厉害了，它就像是细胞的“保护神”，能在低温下保护细胞不受伤害。
那怎么把它们配制成冻存液呢？嘿嘿，这可讲究着呢！先把培养基和血清按照一定的比例混合起来，就像是调鸡尾酒一样，要恰到好处。
然后呢，再小心翼翼地加入 DMSO，可不能加太多，也不能加太少，这就考验你的手艺啦！你想想，要是比例没调好，那不就像是给细胞吃了“黑暗料理”，细胞能乐意吗？它们肯定会闹脾气的，说不定就“死给你看”呢！所以呀，一定要认真对待这个配制过程。
有人可能会问啦，为啥一定要用这几种东西来配制呢？哎呀，这就好比盖房子要用砖头、水泥和钢筋一样，它们各有各的作用呀！培养基提供营养，血清增强活力，DMSO 提供保护，缺了谁都不行。
在配制的过程中，可千万要注意卫生哦！不能让细菌啊、杂质啊混进去，不然细胞可就遭罪啦！就像你吃饭不想吃到沙子一样，细胞也不想“吃”到不干净的东西呀。
还有哦，配制好的细胞冻存液要尽快使用，可不能放太久。
你想想，饭菜放久了都会变质，何况是细胞冻存液呢！总之呢，配制细胞冻存液虽然不复杂，但是也需要细心和耐心。
就像照顾小婴儿一样，要无微不至地关心它们。
只有这样，才能让细胞在冻存之后还能“活蹦乱跳”地复苏过来。
所以呀，大家在配制细胞冻存液的时候，一定要认真对待，可别马虎哦！不然你的细胞可就要“哭鼻子”啦！希望大家都能配制出完美的细胞冻存液，让细胞们在低温的世界里也能安心“睡觉”，等需要它们的时候再活力满满地“醒来”！这多棒呀，不是吗？。
幻灯片1细胞培养基本技术幻灯片2细胞培养的甚本概念●传代：●细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。
●原代培养●取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。
幻灯片3●细胞培养：使用单个细胞悬液●组织培养：使用组织块（O.5～1立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米）●器官培养：使用器官原基或器官的一部分或整个器宫幻灯片4原代培养细胞的生命归宿●原代培养期●传代期●衰退期幻灯片5幻灯片6●有限细胞系，无限细胞系●细胞系 cell line●细胞株 cell strain幻灯片7培养细胞的分类根据形态大致的不同，主要2类：上皮样成纤维细胞样其它，不定型幻灯片8上皮样细胞型名称：仅形态上似体内来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物消化道，乳腺，肺泡上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核幻灯片9生长特点易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状幻灯片10幻灯片11幻灯片12成纤维细胞样细胞名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核幻灯片13生长特点排列成放射状并不紧靠连成片，常有几个伸长的细胞突起幻灯片14幻灯片15培养细胞的特性●培养细胞的生长方式●贴附生长：●必须贴附于支持物表面才能生长。
见于各种实体瘤细胞●悬浮生长：●于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面。
见于各种造血系统肿瘤细胞幻灯片16每代贴附生长细胞的生长过程●游离期●贴壁期●潜伏期●对数生长期●停止期（平台期）幻灯片17●游离期：●细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。
此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。
● 10分钟一4小时幻灯片18●贴壁期：●细胞附着于底物上，游离期结束。
细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。
细胞冻存液配制方法一、细胞冻存液的重要性1.1 细胞冻存液就像是细胞的“保护神”。
咱们做细胞研究或者相关工作的，都知道细胞很脆弱，就像娇嫩的花朵。
在冻存细胞的时候，如果没有合适的冻存液，细胞就很容易在低温下受到损伤，那之前的努力就可能白费了。
1.2 好的细胞冻存液能让细胞在低温环境下“安然无恙”，等到需要的时候再复苏，细胞还能保持活力，就像睡了一觉醒来一样精神抖擞。
二、细胞冻存液的基本成分2.1 基础培养基是必不可少的。
这就好比是细胞的“家”，为细胞提供基本的营养物质，让细胞能维持基本的生存状态。
基础培养基的种类很多，要根据细胞的类型来选择合适的。
比如说，养肿瘤细胞和养正常细胞可能就需要不同的基础培养基，这就叫“对症下药”。
2.2 血清也是细胞冻存液的重要组成部分。
血清就像是细胞的“滋补品”，里面含有丰富的生长因子、激素等营养成分。
一般来说，胎牛血清是比较常用的，质量也比较好。
但是血清的质量参差不齐，可不能“滥竽充数”，得挑选质量可靠的。
2.3 最后就是冷冻保护剂了。
这可是细胞冻存液的“秘密武器”。
常用的冷冻保护剂有二甲基亚砜（DMSO）等。
DMSO就像给细胞穿上了一层“防寒服”，能够降低细胞在冻存过程中的冰晶形成，减少对细胞的损伤。
DMSO有一定的毒性，所以使用的时候要掌握好浓度，不能“贪多”。
三、细胞冻存液的配制步骤3.1 先准备好需要的试剂和器材。
试剂就是前面说的基础培养基、血清和冷冻保护剂，器材呢，像移液枪、离心管这些都得准备好，这就叫“磨刀不误砍柴工”。
3.2 根据细胞的类型和冻存的需求来确定各成分的比例。
一般来说，基础培养基、血清和DMSO的比例大概是7∶2∶1。
但是这也不是一成不变的，不同的细胞可能需要调整。
这就需要我们根据经验和实验结果来灵活掌握，不能“墨守成规”。
把各成分按照比例混合均匀，就像调一杯特制的饮料一样，要搅拌得充分，这样细胞冻存液就配制好啦。
四、注意事项4.1 在配制细胞冻存液的时候，要保证操作环境的清洁和无菌。
