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沉默SEMA3A基因对胶质瘤细胞U251增殖和转移的影响

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第２ｌ卷第２期　２０１５年４月　

上海戈　报（自然科学版）　

ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＨＡＮＧＨＡＩ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＮＡＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ）　Ｖｌ０１．２１　ＮＯ．２　

Ａｐｒ．２０１５　

ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７—２８６１．２０１４．０３．００７　

沉默ＳＥＭＡ３Ａ基因对胶质瘤细胞Ｕ２５１　增殖和转移的影响　

何志敏　，　马文丽　，　郑文岭　，。　（１．上海大学电子生物研究所，上海２００４４４；２．南方医科大学基因工程研究所，广州５１０５１５　３．华南基因组研究中心，广州５１０８００）　

摘要：　探讨了ＳＥＭＡ３Ａ基因在恶性胶质瘤细胞Ｕ２５１迁移和侵袭能力中的作用，及其用于　胶质瘤临床治疗的可行性．用特异识别ＳＥＭＡ３Ａ基因的短发卡ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ　ｈａｉｒｐｉｎ　ＲＮＡ，　ｓｈＲＮＡ）片段与真核表达载体ｐＦＨ　ＧＦＰ—Ｌ连接，再与辅助质粒联用来包装慢病毒．通过荧光　显微镜观察感染胶质瘤细胞Ｕ２５１的感染效率．通过实时定量ＰＣＲ技术和Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ技术　验证了Ｕ２５１细胞中ＳＥＭＡ３Ａ基因的沉默效果．通过ＭＴＴ法、ＰＩ染色法和Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室分　别检测了Ｕ２５１细胞增殖、细胞周期和运动能力的变化．结果表明，ＳＥＭＡ３Ａ　ｓｈＲＮＡ慢病毒　感染Ｕ２５１能有效拉底ＳＥＭＡ３Ａ基因的表达水平ｆＰ＜０．０１），使Ｕ２５１细胞的增殖能力、迁移　和侵袭能力明显降低（Ｐ＜０．０５），细胞大量阻滞在Ｇ２／Ｍ期，并促进了细胞凋ｔ（Ｐ＜０．０５）．　关键词：胶质瘤；ＳＥＭＡ３Ａ基因；增殖；转移　中图分类号：Ｒ　７３　文献标志码：Ａ　文章编号：１００％２８６１（２０１５）０２。０２３７—０８　

Ｅ　ｃｔ　ｏｆ　ＲＮＡ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ＳＥＭＡ３Ａ　ｏｎ　

ｏｆ　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　Ｕ２５１　

ＨＥ　Ｚｈｉ—ｍｉｎ　．ＭＡ　Ｗｅｎ—ｌｉ　，一．ＺＨＥＮＧ　Ｗｅｎ—ｌｉｎｇ　，３　（１．Ｂｉｏ—ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００４４４，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｏｕｔｈ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０５１５，Ｃｈｉｎａ　３．Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０８００，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｅｘｐｌｏｒｅｓ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ　ＳＥＭＡ３Ａ　ｇｅｎｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｖａｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　Ｕ２５１．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇｌｉｏｍａ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ．Ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｐａｃｋａｇｅｄ　ｂｙ　ａ　ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ　ｐａｃｋａｇｉｎｇ　ｖｅｃｔｏｒ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ａ　ｐＦＨ—ＧＦＰ－Ｌ　ｖｅｃｔｏｒ　ａｎｄ　ａ　ｓｈｏｒｔ　ｈａｉｒｐｉｎ　ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ＳＥＭＡ３Ａ　ｇｅｎｅ．Ｕ２５１　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ　ｖｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｓｈＲＮＡ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ＳＥＭＡ３Ａ　ｇｅｎｅ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ⅵ　ｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ＳＥＭＡ３Ａ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ＳＥＭＡ３Ａ　ｔａｒｇｅｔ　ｓｈＲＮＡ　ａｒｅ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｉｎ　ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　ＳＥＭＡ３Ａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（Ｐ＜０．０１）．Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ　ＳＥＭＡ３Ａ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　Ｕ２５１　ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，　

收稿日期：２０１４—０３—２４　通信作者：郑文岭（１９６２一），男，教授，博士生导师，博士，研究方向为基因诊断与基因治疗等　Ｅ－ｍａｉｌ：６９０８９７６１８￣ｑｑ．ｃｏｒｎ　２３８　上　天　振（自然科学版）　第２１卷　ａ　ｌａｒｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　Ｕ２５１　ｃｅｌｌｓ　ａｒｅ　ａｒｒｅｓｔｅｄ　ｉｎ　Ｇ２／Ｍ　ｐｈａｓｅ，ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ（Ｐ＜０．０５）　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｇｌｉｏｍａ；ＳＥＭＡ３Ａ　ｇｅｎｅ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　

胶质瘤是成人中常见的原发性恶性神经系统肿瘤，具有治愈率低、复发率高、综合治疗效　果差等特点．患者的５年生存率不到３％［１Ｊ１其原因主要在于肿瘤的转移能力很强．因此，抑制　肿瘤的转移能力对于治疗胶质瘤意义重大．　ＳＥＭＡ３Ａ属于Ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎｓ信号蛋白家族，是已发现的最强轴突导向分子，在神经系统的　发育过程中对神经元及胶质细胞发挥着重要的导向作用［２－４］．研究发现，ＳＥＭＡ３Ａ对调节细胞　粘附、增殖，以及在肿瘤细胞转移及血管形成过程中具有特殊地位［５＿７１．　在多数情况下，肿瘤细胞内ＳＥＭＡ３Ａ基因的表达水平较低［８】．然而，本实验室的前期　研究发现：在胶质瘤细胞Ｕ２５１中，ＳＥＭＡ３Ａ基因的表达水平明显高于正常对照组．为了研　究ＳＥＭＡ３Ａ基因在Ｕ２５１细胞中的高表达与该细胞转移能力之间的关系，本实验采用慢病毒　介导的特异性短发卡ＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ　ｈａｉｒｐｉｎ　ＲＮＡ，ｓｈＲＮＡ）ｑ：扰技术，探讨了ＳＥＭＡ３Ａ基因表达　水平下调对Ｕ２５１细胞迁移和侵袭能力的影响．　

１材料和方法　１．１　实验试剂与仪器　ＳＥＭＡ３Ａ抗体购自Ａｂｃａｍ公司；限制性内切酶、ＤＮＡ连接酶、逆转录试剂盒购自Ｔａｋａｒａ　公司；ｐＦＨ—ＧＦＰ—Ｌ慢病毒骨架质粒及包装辅助质粒购自黄离生物公司；ｓｈＲＮＡ购白吉凯　基因公司：质粒小抽试剂盒、质粒中抽试剂盒、凝胶回收试剂盒购白天根生化科技公　司；ＤＮＡ纯化试剂盒购自Ｏｍｅｇａ公司；ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ　２０００试剂、Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ提取试　剂购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；ＤＭＥＭ培养基、小牛血清购白Ｈｙｃｌｏｎｅ公司；氨苄、胰酶、青链霉　素购自Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司；细胞培养皿、培养板、冻存管购自Ｃｏｒｎｉｎｇ公司；Ｍａｔｒｉｇｅｌ基质胶购　自Ｓｉｇｍａ公司；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室购自Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司：胶质瘤细胞株Ｕ２５１购自中国科学院上海　生命科学研究院细胞资源中心；质粒、大肠杆菌ＤＨ５ｃ￣、人肾上皮细胞株２９３Ｔ为本实验室　保存：ＤＨ５ａ感受态细菌由本实验室自行制备；其余试剂均为分析纯．随机引物、特异性引　物、ＰＣＲ引物由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司合成．测序由金唯治公司完成．　另外，水平电泳仪、Ｒｅａｌ—Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ仪购自Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司；ＰＣＲ自动扩增仪购白Ｂｉｏｅｒ公　司；酶标仪购自ＢｉｏＴｅｋ公司；荧光倒置显微镜购自Ｏｌｙｍｐｕｓ公司；冷冻离心机购自Ｔｈｅｒｍｏ公　司：凝胶电泳成像系统购自Ｋｏｄａｋ公司．　１．２实验方法　１．２．１　ＳＥＭＡ３Ａ敲减慢病毒载体构建及病毒感染　靶向ＳＥＭＡ３Ａ基因的ｓｈＲＮＡ—ＳＥＭＡ３Ａ正义链序列为５＇－ＧＧＧＡＡＧＡＡＣＡＡＴＧＴＧＣＣＡＡ　ＧＧ一３　阴性对照的ｓｈＲＮＡ—ＮＣ正义链序歹０为５＇－ＧＴＴＣＴＣＣＧＡＡＣＧＴＧＴＣＡＣＧＴ一３　．两边　分别与酶切位点ＮｈｅＩ和Ｐａｄ的粘性末端相连．将合成好的ｓｈＲＮＡ正义链与反义链在退火缓　冲液中退火形成双链ＤＮＡ．反应条件如下：９０。Ｃ水浴加热１　ｍｉｎ；按照每９０　Ｓ降温１。Ｃ的速　度等梯度冷却至３０。Ｃ；之后自然冷却到室温，－２０。Ｃ保存．以ｐＦＨ—ＧＦＰ—Ｌ质粒为慢病毒骨　架质粒．该载体质粒包含ＣＭＶ启动子、Ｈ１启动子以及绿色荧光蛋白报告基因，通过与两个　辅助包装质粒ｐＨｅｌｐｅｒ　１．０和ｐＨｅｌｐｅｒ　２．０结合，可以在宿主细胞中包装成无复制能力的慢病　毒颗粒．用ＮｈｅＩ和ＰａｃＩ内切酶酶切，使载体质粒线性化，在ＤＮＡ连接酶的作用下与退火双　链ＤＮＡ连接．连接产物转化为感受态细菌ＤＨ５（￣，通过含抗生素的培养基筛选得到阳性克隆，　第２期　何志敏，等：沉默ＳＥＭＡ３Ａ基因对胶质瘤细胞Ｕ２５１增殖和转移的影响　２３９　并进行ＰＣＲ鉴定与测序．选择序列正确的克隆进行ＰＣＲ扩增，用抽提试剂盒抽提慢病毒包装　辅助质粒和扩增之后的载体质粒，并检测所提质粒的浓度．　转染前２４　ｈ，将生长状态良好、汇合度达８０％＾一９０％的２９３Ｔ细胞用胰酶消化，并进行活细　胞计数．以６×１０　个细胞／ｍＬ的密度接种在１５　ｃｍ培养皿中，并于３７。Ｃ，５％ＣＯ２细胞培养箱内　培养．２４　ｈ后，待细胞汇合度达到５０％＾一６０％时用于转染．　转染前２　ｈ，将细胞用ＰＢＳ清洗两遍，替换无血清的Ｏｐｔｉ—ＭＥＭ培养基，取若干离心管　并标记，加入所抽提的各质粒溶液：ｐＦＨ．ＧＦＰ．Ｌ载体２０　ｇｇ，ｐＨｅｌｐｅｒ　１．０质粒１５　ｇｇ，ｐＨｅｌｐｅｒ　２．０质粒１０　ｇ，并与相应体积的Ｏｐｔｉ．ＭＥＭ培养基混合均匀，稀释调整总体积为２．５　ｍＬ，室　温静置孵育５ｍｉｎ．将Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　ＴＭ　２０００摇匀后取出１００　Ｌ与２．４ｍＬ　Ｏｐｔｉ．ＭＥＭ混合，　室温静置孵育５　ｒａｉｎ．将稀释好的质粒溶液分别与Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　ＴＭ　２０００混合摇匀，室温　静置孵育２０　ｍｉｎ，充分形成质粒ＤＮＡ与Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ　２０００的转染复合物．将转染复合物加　入２９３Ｔ细胞培养液中，于３７。Ｃ，５％ＣＯ２细胞培养箱中培养．８　ｈ后，移除混合培养基，每皿　加入１０　ｍＬ的ＰＢＳ，清洗两遍后倒去．每皿细胞中加入含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养基１５　ｍＬ，　于３７。Ｃ，５％ＣＯ２细胞培养箱内继续培养．４８　ｈ后回收含有病毒颗粒的上清，于－８０。Ｃ冻存．　采用梯度稀释法测定病毒滴度．　

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PDIA4基因沉默对胶质瘤细胞凋亡的影响

PDIA4基因沉默对胶质瘤细胞凋亡的影响

基金项目：广州市科技计划项目（201803010045）作者单位：中山大学孙逸仙纪念医院神经外科，广州510120*通信作者：刘安民，Email ：******************PDIA4基因沉默对胶质瘤细胞凋亡的影响朱传华，谢琳，刘安民*［摘要］目的探讨蛋白二硫键异构酶家族成员4（PDIA4）基因在胶质瘤细胞中的表达及对细胞凋亡的影响。

方法下载并分析CGGA 数据库RNAseq 数据；收集人脑胶质瘤细胞系U251、U87和星形胶质细胞HA1800，用RT⁃qPCR 法检测细胞系中的PDIA4表达水平；用siRNA转染U251细胞，沉默PDIA4的细胞株为si#768组和si#1829组，未转染为阴性对照组，转染siNC 为空白对照组；用阿尔玛蓝（alarma blue ）法、克隆形成实验检测转染细胞的增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡率；用蛋白免疫印记实验检测细胞中的cleaved⁃caspase3、cleaved⁃caspase 7蛋白表达水平。

结果CGGA 数据库中，PDIA4在不同级别胶质瘤中的表达水平不同（P <0.05），PDIA4高表达组较低表达组生存预后较差（Log⁃rank=264.32，P <0.001）；与HA1800相比，PDIA4在U251和U87中相对表达量升高（F =58.44，P <0.05）；与空白组、阴性对照组相比，si#768组和si#1829组增殖和克隆集落形成能力受到抑制（均P <0.01），凋亡率（17.67±0.11%、19.50±9.30%vs .3.72±7.11%、6.53±0.13%，F =51.06，P <0.05）明显升高；与阴性对照组相比，si#768组和si#1829组cleaved⁃caspase 7蛋白表达分别上调218.53%与169.68%，差异具有统计学意义（F =12.61，P <0.05）。

lncRNA MLK7-AS1通过抑制miR-375的表达促进胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭

lncRNA MLK7-AS1通过抑制miR-375的表达促进胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭

【摘要】目的探讨长链非编码RNA （lncRNA ）MLK7-AS1在人脑胶质瘤组织中表达及其对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响。

方法选择2016~2017年手术切除的脑胶质瘤组织标本45例，2007版WHO 分级Ⅰ级8例，Ⅱ级15例，Ⅲ级10例，Ⅳ级12例。

另选择其中10例瘤旁正常脑组织作对照。

体外培养U251细胞和人正常星形胶质细胞（NHA ）。

U251细胞根据转染质粒分成四组：转染miR-375mimic 组、转染si-MLK7-AS1组、同时转染miR-375inhibitor 和si-MLK7-AS1组以及只转染miR-375in⁃hibitor 组。

RT-qPCR 检测MLK7-AS1和miR-375的表达水平；荧光素酶报告基因实验验证MLK7-AS1与miR-375之间的关系；CCK-8法检测U251细胞增殖活性，Transwell 实验检测U251细胞侵袭能力。

结果高级别胶质瘤组织MLK7-AS1表达水平明显高于低级别胶质瘤组织（P <0.05），而后者明显高于瘤旁正常脑组织（P <0.05）；高级别胶质瘤组织miR-375表达水平明显低于低级别胶质瘤组织（P <0.05），而后者明显低于瘤旁正常脑组织（P <0.05）。

U251细胞MLK7-AS1表达水平明显高于NHA （P <0.05），miR-375表达水平明显低于NHA （P <0.05）。

序列分析显示MLK7-AS1和miR-375存在特异性结合序列，荧光素酶报告基因实验表明U251细胞MLK7-AS1负调控miR-375表达。

沉默MLK7-AS1表达通过上调miR-375表达明显抑制U251细胞增殖和侵袭（P <0.05）。

结论lncRN AMLK7-AS1可能通过调节miR-375的表达水平在人脑胶质瘤中发挥着促癌的作用。

【关键词】胶质瘤；长链非编码RNA MLK7-AS1；miR-375；细胞增殖；细胞侵袭；U251细胞【文章编号】1009-153X （2020）07-0454-04【文献标志码】A【中国图书资料分类号】R 739.41;Q 786LncRNA MLK7-AS1promotes proliferation and invasion of glioma cells by inhibiting miR-375ZHANG Xing-ye,TIAN Bo,MAN Ming-hao,GUO Shao-chun.Department of Neurosurgery,Tangdu Hospital,Air Force Medical University,PLA,Xi'an 710038,China【Abstract 】Objective To explore the expression of lncRNA MLK7-AS1in the glioma tissues and its effect on glioma U251cellsproliferation and invasion.Methods The expression levels of lncRNA MLK7-AS1and miR-375were detected in 45glioma tissues which were obtained from 45patients with glioma underwent surgery from 2016to 2017,including 23low grade gliomas and 22high grade gliomas,and were also detected in 10normal brain tissues adjacent to the glioma (control group).U251cells and human normal astrocytes (NHA)were cultured in vitro.U251cells were divided into four groups based on transfected plasmids:miR-375mimic group,si-MLK7-AS1group,miR-375inhibitor and si-MLK7-AS1group,and miR-375inhibitor group.RT-qPCR was used to detect the expression levels of MLK7-AS1and miR-375.The luciferase reporter gene experiment was used to verify the relationship between MLK7-AS1and K-8method was used to detect the proliferation activity of U251cells,and Transwell test was used todetect the invasion ability of U251cells.Results The expression level of MLK7-AS1in high-grade glioma tissues was significantly higher than that in low-grade glioma tissues (P <0.05),which was significantly higher than that in normal brain tissues adjacent to the glioma (P <0.05).The miR-375expression level in high-grade glioma tissues was significantly lower than that of low-grade gliomatissues (P <0.05),which was significantly lower than that of normal brain tissue adjacent to the glioma (P <0.05).The expression level of MLK7-AS1in U251cells was significantly higher than that in NHA (P <0.05),while the expression level of miR-375in U251cells was significantly lower than that in NHA (P <0.05).Sequence analysis showed that MLK7-AS1and miR-375had specific binding sequences.Luciferase reporter gene experiments showed that MLK7-AS1in U251cells can negatively regulate the expression of miR-375.Silence MLK7-AS1expression significantly inhibited the proliferation and invasion of U251cells by up-regulating the expression level of miR-375(P <0.05).Conclusion The results suggest that lncRN AMLK7-AS1play a important role in promoting growth ofhuman gliomas by regulating the expression level of miR-375.【Key words 】Glioma;LncRNAMLK7-AS1;miR-375;Cel proliferation;Cell invasionlncRNA MLK7-AS1通过抑制miR-375的表达促进胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭张兴业田博满明昊郭少春●实验研究●胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤，占颅内肿瘤的50%左右[1，2]。

丙泊酚、右美托咪定和硫喷妥钠对脑胶质瘤U251细胞增殖和迁移能力的影响

丙泊酚、右美托咪定和硫喷妥钠对脑胶质瘤U251细胞增殖和迁移能力的影响

丙泊酚、右美托咪定和硫喷妥钠对脑胶质瘤U251细胞增殖和迁移能力的影响石国荣;魏秀琴;王雪芳;王志旭;张海清【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2022(44)8【摘要】目的探讨不同静脉麻醉药对人高级别脑胶质瘤(HGG)U251细胞增殖和迁移能力的影响。

方法分别采用生理盐水、4 mg·L^(-1)丙泊酚、50 nmol·L^(-1)右美托咪定及500μmol·L^(-1)硫喷妥钠处理HGG细胞U2516 h,以此将U251细胞分为对照组、丙泊酚组、右美托咪定组(右美组)及硫喷妥钠组(硫喷组)。

CCK-8实验及克隆形成实验检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞侵袭及迁移能力,实时荧光定量PCR及Western blot实验检测各组细胞原癌基因(C-MYC)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、表皮生长因子受体(EGFR)、双微体基因2(MDM2)的mRNA及蛋白表达变化。

结果相比对照组,丙泊酚组、右美组及硫喷组U251细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(P均<0.01),丙泊酚组增殖及迁移、侵袭能力又低于右美组及硫喷组(P均<0.05);与对照组比较,丙泊酚组C-MYC、PDGFR、EGFR、MDM2的mRNA及蛋白表达均降低(P均<0.01),而右美组C-MYC及EGFR的表达均降低(P均<0.01),硫喷组PDGFR及EGFR的表达均降低(P 均<0.01)。

结论丙泊酚、右美托咪定及硫喷妥钠可抑制U251细胞增殖及迁移能力,可能与抑制C-MYC、PDGFR、EGFR和MDM2的表达有关。

【总页数】6页(P757-762)【作者】石国荣;魏秀琴;王雪芳;王志旭;张海清【作者单位】武威市人民医院麻醉科;武威市人民医院肝病科;武威市人民医院产科;武威市人民医院药剂科【正文语种】中文【中图分类】R739.41【相关文献】1.右美托咪定对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响2.右美托咪定复合丙泊酚对脑胶质瘤切除术中脑组织损伤的影响3.右美托咪定与丙泊酚复合麻醉在减轻脑胶质瘤切除术患者脑损伤中的效果比较4.右美托咪定联合丙泊酚在脑功能区神经胶质瘤治疗中的应用5.右美托咪定对人肝癌Huh-7细胞增殖和迁移的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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建立iCSF1R-Cre;Nrp1L/L转基因小鼠，特异性删失TAM中 Nrp1，其他骨髓细胞中Nrp1的表达不受影响。 对照组iCSF1R-Cre;Nrp1+/+简称野生型WT，基本正常。
与常氧区的BMDM或者TAM 比较，缺氧区中的缺氧应答 基因Flt1（编码VEGFR1）上 调，而Nrp1的缺失并不影响 这种调节作用
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呈现M1型增多、M2型减少（M1表达NOS2/Cxcl9/Il-12/Cxcl10， M2表达Arg1/Ym1/Il-10/Ccl22）
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