当前位置：文档之家 › 胶质瘤Caspase_3表达与细胞凋亡和增殖的关系

胶质瘤Caspase_3表达与细胞凋亡和增殖的关系

  • 格式：pdf
  • 大小：541.41 KB
  • 文档页数：3

文章编号:1674-6309(2009)06-0768-02・经验交流・胶质瘤Ca spa se -3表达与细胞凋亡和增殖的关系买正军,　孙　涛,　夏玉成(宁夏医科大学附属医院神经外科,银川　750004)摘要:为探讨Caspase -3在人胶质瘤中的作用及其与肿瘤恶性程度、细胞增殖和凋亡的关系,用免疫组化法测定在61例不同级别星形细胞瘤以及10例正常脑组织和瘤旁组织中的Caspase -3蛋白表达。

61例胶质瘤中,Caspase -3在肿瘤细胞的阳性率为60.07%,肿瘤细胞Caspase -3蛋白表达与肿瘤组织病理学分级呈负相关(r =-0.565,P <0.01)。

Caspase -3可能参与了胶质瘤细胞的凋亡调节机制,在胶质瘤的恶性进展中起着重要作用。

关键词:胶质瘤;Caspase -3;凋亡中图分类号:R651 文献标识码:B收稿日期:2009-07-09作者简介:买正军(1970-),男,宁夏人,主治医师,硕士,从事神经肿瘤研究工作。

胶质瘤是颅内常见的原发肿瘤,而星形细胞瘤又是胶质瘤中最常见的肿瘤[1]。

大多数肿瘤呈浸润性生长,表现出其恶性生物学行为,肿瘤细胞的增殖是首先考虑的问题。

然而机体细胞存在着不同于坏死的另一种死亡形式———凋亡。

肿瘤细胞凋亡及其调控机制的研究成为肿瘤研究的主要课题之一,而凋亡的发生与凋亡机制中的关键蛋白酶Caspase -3备受关注。

本文用免疫组方法检测Caspase -3蛋白在胶质瘤中的表达,以明确它们在胶质瘤凋亡中的作用机制。

1　材料和方法1.1　材料1.1.1　标本来源　①收集1996年至2000年宁夏医科大学附属医院手术切除的脑胶质瘤标本61份,男38例,女23例,病人术前均未行放疗或化疗。

肿瘤标本包括61例星形细胞瘤,根据WH O 标准进行分级和分类,其中I 级14例(毛细胞性星形细胞瘤8例,室管膜下巨细胞性星形细胞瘤6例),II 级13例(纤维性星形细胞瘤5例,原浆性星形细胞瘤5例,多形性黄色星形细胞瘤3例),III 级22例(间变性星形细胞瘤),I V 级12例(胶质母细胞瘤)。

②收集10例取自尸检的非精神和神经性疾病的正常脑组织作为对照。

③收集星形细胞瘤的瘤旁组织10例。

所取标本均经4%福尔马林固定,石蜡包埋,4～5μm 连续切片,HE 染色行病理组织学诊断。

1.1.2　抗体　小鼠抗人Caspase -3单克隆抗体,NE O 2M ARKERS 公司产品。

1.2　方法 采用S -P 法(链霉素亲生物素-过氧化物酶连接法);用慢性扁桃体炎及淋巴结炎为阳性对照,阴性对照用P BS 液作为一抗。

用装有目镜网格测微尺400倍视野计数8个网格中Caspase -3和bcl -2阳性肿瘤细胞数和阴性肿瘤细胞数,取其均值以百分数表示,根据阳性肿瘤细胞所占百分比分为4级:<5%为-,5%～25%为+,26%～49%为++,≥50%为+++。

1.3　统计学方法　组间比较用χ2检验,确切概率法,等级相关分析用S pearman 相关分析。

2　结果 Caspase -3蛋白在星形细胞瘤系胞浆着色(图1,见封2)。

在10例正常脑组织中,Caspase -3蛋白表达均为阴性,而在10例瘤旁组织均可见到明显的Caspase -3蛋白在神经元的表达(图2,见封2),两者差异有统计学意义(P <0101)。

61例星形细胞瘤中,有37例(60.56%)肿瘤细胞不同程度表达Caspase -3蛋白,经等级相关分析检验证实,肿瘤细胞Caspase -3阳性等级构成与肿瘤病理分级成相反相关(r =-0.565,P <0101)。

Caspase -3阳性率随肿瘤病理分级升高而相应减少(表1)。

在肿瘤组织中,Caspase -3阳性染色亦可见于多核瘤巨细胞(图1,见封2)。

瘤旁组织与肿瘤细胞Caspase -3阳性表达差异有统计学意义,瘤旁组织Caspase -3阳性率高于肿瘤细胞(P <0101),见表2。

Caspase -3除了在肿瘤细胞有表达外,并可在肿瘤血管有阳性表达(图3,见封2),而在对照组正常脑组织中并未见到Caspase -3蛋白在血管表达。

表1　Ca spa se -3蛋白在不同级别胶质瘤组间表达情况病理分级Caspase -3表达-++++++阳性数阳性率(%)I23451285.71II33431076.92III98501359.09IV 10200216.67　r =-0.565,P <0.01・867・宁夏医科大学学报Journal of Ningxia Medical University 第31卷　6期　2009年12月表2　Ca spa se -3蛋白在胶质瘤与瘤旁组织表达阳性率比较分组n Caspase -3表达阳性例数阳性率(%)肿瘤细胞613760.56瘤旁组织1010100.00　χ2=5.943,P <0.053　讨论 肿瘤的发生是多种基因综合作用结果,这些基因作用在肿瘤细胞增殖和凋亡的不同环节,互相作用,平衡失调,或凋亡抑制,导致肿瘤细胞过度增殖,从而肿瘤细胞表现出其无限蓄积的恶性行为[2]。

在胶质瘤研究中,发现随着胶质瘤病理分级的增加,增殖细胞核抗原(Proliferating cell nu 2clear antigen ,PC NA )阳性表达也随之增高,说明星形细胞瘤随着恶性程度增加,表现出肿瘤细胞增殖旺盛的生物学行为[3]。

本研究证实,凋亡蛋白Caspase -3其肿瘤细胞阳性等级构成与病理分级呈负相关,表现出凋亡减少。

说明在星形细胞瘤中,肿瘤细胞除了有较强的增殖活性,也存在着抗凋亡蛋白的过度表达,另一方面凋亡蛋白也在胶质瘤细胞有表达。

在增殖、凋亡、抗凋亡的相互作用过程中,随着增殖及凋亡抑制活性的增加,肿瘤细胞凋亡的减少,肿瘤生物学行为表现出恶性进展的过程,从而引起肿瘤细胞的蓄积,表现出恶性生物学行为[4]。

在实验中发现瘤旁组织神经元表现出过度表达Cas 2pase -3蛋白,Caspase -3在瘤旁组织表达活性较正常脑组织和肿瘤细胞高。

瘤旁组织表现出很高的凋亡活性。

肿瘤对周围正常组织的侵袭有局部压迫,局部破坏或干扰正常器官的功能,而侵袭是肿瘤生长所必需的早期过程。

研究认为胶质瘤的侵袭有多因素参与[5]。

本研究中肿瘤旁组织神经元的凋亡活性增高,考虑与胶质瘤的侵袭有关。

可以肯定,肿瘤周围神经元的凋亡,必然会影响正常神经功能。

神经元的凋亡可以在Parkins on ’s 、Alzheimer 病等神经变性性疾病中观察到[6]。

瘤旁神经元的凋亡,一方面是肿瘤侵袭的结果,同时神经元的凋亡又有助于肿瘤的侵袭性生长。

参考文献:[1]　王忠诚.神经外科学[M].2版1武汉:武汉科学技术出版社,1998:378-450.[2]　Martin S J ,G reen DR.Apoptosis and cancer :the failure of controls on cell death and cell survival [J ].Crit Rev Oncol Hematol ,1995,18:137-153.[3]　伍建明,蔡晓东,傅友增,等.星形细胞瘤恶性进展过程中PC NA 表达的研究[J ].中华神经外科杂志,2000,16(3):187-189.[4]　K ohn EC ,Liotta LA.M olecular insights into cancer inva 2sion :strategies for prevention and intervention [J ].Cancer Res ,1995,51:1865-1862.[5]　Wild -Bobe C ,Weller M ,Wick W.M olecular determi 2nants of glioma cell migration and invasion [J ].J Neuro 2surg ,2001,94(6):978-984.[6]　Su J H ,K esslak J P ,Head E ,et al.Caspase -cleaved amy 2loid precurs or protein and activated Caspase -3are co -lo 2calized in the granules of granulovacuolar degeneration inAlzheimer ’s disease and D own ’s syndrome brain [J ].ActaNeuro Pathol ,2002,104:1-6.(责任编辑:任义芳)文章编号:1674-6309(2009)06-0769-03・经验交流・780例甲状腺病手术并发症分析余生林,　贾　磊(宁夏回族自治区人民医院肿瘤外科,银川　750021)摘要:为探讨甲状腺手术并发症与原发症、手术方式之间的关系,对1990-2007年7月间手术治疗780例甲状腺肿块进行回顾分析。

结果,发生7种并发症计32例,占4.1%。

喉返神经损伤11例,甲状旁腺损伤5例,术后出血2例、切口感染2例,喉上神经损伤9例,呼吸困难及甲状腺危象各1例,死亡1例。

预防甲状腺手术并发症关键在于能熟练掌握术中的操作技巧。

关键词:甲状腺疾病;手术并发症中图分类号:R736.2 文献标识码:B收稿日期:2009-06-15作者简介:余生林(1968-),男,宁夏人副主任医师,学士,主要从事甲状腺乳腺肿瘤临床研究工作。

甲状腺手术并发症发生率因病变的性质(良、恶性)和严重程度,是否再次手术而有差异。

1990年2月-2007年7月,我院对780例甲状腺病人施行手术治疗,以下就并发症的预防进行分析。

1　临床资料1.1　一般资料　本组男121例,女659例,年龄15～72岁,平均41.5岁。

结节性甲状腺肿483例,甲状腺腺瘤187例,甲状腺机能亢进症32例,甲状腺癌43例,亚急性甲状腺炎・967・第31卷　6期　2009年12月宁夏医科大学学报Journal of Ningxia Medical University。

合集下载

caspase-3

caspase-3

(一)caspase家族Caspases是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶，它们的一个重要共同点是特异地断开天冬氨酸残基后的肽键。

Caspase一词是从Cysteine aspartic acid specific protease 的字头缩写衍生而来，就反映了这个特征，而这种高度的特异性，在蛋白酶中是很少见的。

由于这种特异性，使caspase能够高度选择性地切割某些蛋白质，这种切割只发生在少数（通常只有1个）位点上，主要是在结构域间的位点上，切割的结果或是活化某种蛋白，或使某种蛋白失活，但从不完全降解一种蛋白质。

Caspase的研究源于线虫（C. elegans）细胞程序化死亡的研究。

线虫在发育过程中，有131个细胞将进入程序化死亡；研究发现有11个基因与PCD 有关，其中ced3和ced4基因是决定细胞凋亡所必需的，ced9基因抑制PCD。

线虫细胞程序化死亡的研究促进了其他动物特别是哺乳类动物中细胞凋亡的研究。

人们发现哺乳类细胞中存在着Ced3的同源物ICE（interleukin-1b converting enzyme），它催化白介素-1b的活化，即从其前体上将IL-1b 切割下来。

在大鼠成纤维细胞中过量表达ICE和Ced3都会引起细胞凋亡，表明了ICE和Ced3在结构和功能上的相似性；然而敲除ICE基因的小鼠其表现型正常，并未发现细胞凋亡发生明显改变。

进一步的研究发现，另一个ICE成员，后来被称为apopain，CPP32或Yama的半胱氨酸蛋白酶，催化poly（ADP-ribose）Polymerase（PARP），即聚（ADP-核糖）聚合酶的裂解，结果导致细胞的凋亡，因而认为apopain执行着与线虫中的ced3相同的功能。

Apopain被称为是“死亡酶”，而PARP被认为是“死亡底物”。

Apopain/CPP32/Yama是在1995年由两个实验室分别同时报导，时间上只有两周之差。

YAP和Caspase在恶性肿瘤中的作用机制及其关联的研究进展

YAP和Caspase在恶性肿瘤中的作用机制及其关联的研究进展

YAP和Caspase在恶性肿瘤中的作用机制及其关联的研究进展德乐黑巴特尔;达林泰;赵诚【摘要】正常情况下细胞增殖与凋亡之间保持着动态平衡,维持着机体的生理状态,细胞异常增殖或凋亡抑制时细胞过度增殖组织异常生长导致肿瘤的发生.Hippo通路是最近发现的一条细胞信号传导通路,主要功能有调控器官体积、保持细胞增殖凋亡平衡、细胞接触性抑制的调节等.YAP是Hippo通路上的重要因子,YAP表达异常可导致Hippo通路不能正常发挥作用而细胞异常增殖导致肿瘤的发生.Caspase是与细胞凋亡密切相关的蛋白水解酶家族,一般以酶原形式存在,在凋亡信号的作用下激活启动型Caspase引发Caspase级联反应导致细胞凋亡,其功能异常导致各种相关疾病的发生.本文将介绍Hippo通路的主要组成及其作用机制,YAP和Caspase基因的作用机制及其与肿瘤发生发展的相关性.【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2012(044)005【总页数】5页(P575-579)【关键词】Hippo通路;YAP;Caspase;恶性肿瘤【作者】德乐黑巴特尔;达林泰;赵诚【作者单位】内蒙古医学院附属医院口腔科,内蒙古呼和浩特010050;内蒙古医学院附属医院口腔科,内蒙古呼和浩特010050;内蒙古医学院附属医院口腔科,内蒙古呼和浩特010050【正文语种】中文【中图分类】R739.85肿瘤的发生发展是一个多因素、多步骤、多阶段的复杂过程,与细胞的增殖、基因改变和凋亡调节等密切相关。

正常情况下,细胞增生与凋亡之间的动态平衡维持着组织器官正常大小和机体内环境的稳态,而肿瘤的发生发展往往关联于细胞发生异常增殖或凋亡抑制。

目前致癌基因的研究由单一基因发展到对多个基因协同作用和相互调节机制的研究。

细胞凋亡是有核细胞在一定条件下通过启动内部死亡机制,按特定的基因程序自行结束生命的过程,在机体生命活动中具有积极意义。

细胞凋亡存在多个作用通路涉及到多个基因并且互相影响的复杂过程。

Caspase与细胞凋亡

Caspase与细胞凋亡

Caspase与细胞凋亡Caspase与细胞凋亡沈阳市第一人民医院神经内科（110041）李莉摘要：细胞凋亡，又称程序性细胞死亡（Programmed cell death, PCD）是机体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡过程。

是细胞内由基因编码调控的按严格程序执行的细胞自杀过程。

细胞凋亡是细胞生长发育过程的重要生命现象，是目前生物医学领域中的一个重要研究课题。

阐明细胞凋亡的分子机制可对一些疾病的防治（如肿瘤，神经退行性疾病等）产生积极影响。

许多实验提示细胞凋亡涉及一个瀑布式（Cascade）基因表达过程。

半胱氨酸蛋白酶（Caspase）在细胞凋亡中发挥始动和效应作用。

本文就其生物学特性及其在凋亡中的作用机制作一综述。

关键词：Caspase；细胞凋亡细胞凋亡的原词Apoptosis由两个拉丁字组成。

Apo指离开，ptosis是落下，意思是细胞凋亡有如秋天落叶，到一定时候即失去生命力，遂即脱落，细胞凋亡，又称程序性细胞死亡（Programmed cell death，PCD）是机体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡过程，是细胞内由基因编码调控的，按严格程序执行的细胞自杀过程。

通常需要30到60分钟，细胞凋亡形态学上的变化主要有DNA破碎，染色质凝集，细胞皱缩，线粒体肿胀和凋亡小体形成，而整个过程的结束以凋亡小体被吞噬为标志。

多数类型细胞在凋亡的最后阶段发生细胞核DNA的降解：DNA降解成180-200bp或其倍数的片段，因此在琼脂糖凝胶电泳上可见到有特征性的梯形图谱。

目前对凋亡的研究深入到分子水平，发现多种半胱氨酸蛋白酶（Cysteine aspartase）在细胞凋亡之中发挥着重要作用。

1、什么是Caspase通过对美丽线虫（nematode caenorhabditis elegans）的细胞死亡机制的研究发现，至少有3个基因直接参与了细胞凋亡的调节。

ced-3、ced-4直接介导细胞死亡，为促凋亡基因，其编码的蛋白分别为CED-3、CED-4、ced-3在细胞中起关键作用，称为线虫自杀基因，CED-3则称为死亡蛋白酶；ced-9则拮抗其作用，为抗凋亡基因，其编码的蛋白质为CED-9。

细胞凋亡中Caspase-3活性的检测

细胞凋亡中Caspase-3活性的检测

细胞凋亡中Caspase-3活性的检测关键词：细胞凋亡活性检测执行分子 2012-09-27 18:04 来源：互联网点击次数：5249Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。

Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。

但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。

1 Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。

方法：收集细胞→PBS洗涤→抽提细胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE电泳→硝酸纤维素膜或PVDF膜转移→5%脱脂奶粉封闭，室温1.5~2h或4°C过夜→Caspase-3多抗或单抗室温反应1~2h或4°C过夜→TBS-T（含0.05% Tween 20的TBS）洗3次，5~10min/次→H RP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1~2h→ TBS-T洗3次， 5~10min/次?→ECL显影或NBT/BCIP显色。

结果如下图2 荧光分光光度计分析原理：活化的Caspase-3能够特异切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。

根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。

在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。

根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。

方法：收获细胞正常或凋亡细胞?PBS洗涤?制备细胞裂解液?加Ac-DEVD-AMC （caspase-3四肽荧光底物）?37°C反应1h?荧光分光光度计（Polarstar）分析荧光强度（激发光波长380nm，发射光波长为430-460nm）。