免疫性不孕症患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞、叉头状转录因子3、
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・妇幼医学・ 中国医药导报2015年2月第12卷第4期
、
叉头状转录因子3、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的
水平研究
马兴璇 孙一帆t 生淑亭 韦丽丽。 刘春明 张红雨 吴玉芬。 王林春 龙康 1.广西壮族自治区柳州市中医院检验科,广西柳州545001;2.广西壮族自治区柳州市中医院妇科,
广西柳州545001;3.广西壮族自治区 ̄P4+I市中医院中心实验室,广西柳州545001
【摘要】目的探讨外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4 CD25 Treg)、叉头状转录因子3(Foxp3)、细胞毒性T淋 巴细胞相关抗原4(CTLA一4)与免疫性不孕的关系,为免疫性不孕的诊断和治疗提供依据。方法用流式细胞仪 检测60例免疫性不孕妇女(研究组)和60例正常妊娠的育龄妇女(对照组)外周血中CD4 CD25 Treg、Foxp3、 CTLA一4水平。并对检测结果进行统计学分析。结果研究组外周血中CD4 CD25 Treg、Foxp3、CTLA一4水平值分
别为:(3.66 ̄0.59)%、(2.97_+0.63)%、(3.17 ̄0.36)%,均低于对照组【(8.17-+0.63)%、(7.17-+0.53)%、(8.21_+0.56)%】,两 组比较差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。结论免疫性不孕症患者外周血中CD4 CD25 Treg、Foxp3、CTLA一4 的表达水平比正常妊娠的育龄妇女少,CD4 ̄CD25 Treg、Foxp3、CTLA-4表达的降低可能是免疫性不孕的重要原因。
【关键词】CD4 CD25 调节性T细胞;免疫性不孕;细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4;叉头状转录因子3 【中图分类号】R714.21 【文献标识码】A 【文章编号】1673—7210(2015)02(a)-0088-04
Research on relationship between frequency of circulating CD4 CD25
Treg,Foxp3,CTLA一4 and immunological infertility
MA Xingxuan SUN y SHENG Shmin ̄ WEI Lili LIU Chunminf ZHANG Hongyu . y ∥ WANG Linchun LONG K帆g 1.Department of Chinical Laboratory,the Hospital of Traditional Chinese Medicinal of Liuzhou City,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Liuzhou 545001,China;2.Department of Gynaecology,the Hospital of Traditional Chinese Medicinal of Liuzhou City,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Liuzhou 54500 1,China;3.Department of Central Laboratory,the Hospital of Traditional Chinese Medicinal of Liuzhou City,Guangxi Zhuang Autonomous Region,Li—
uzhou 545001,China [Abstract]Objective To investigate the relationship between the frequency of circulating CD4 CD25 Treg,Foxp3, CTLA一4 and immunological infertility.and to provide the basis for the diagnosis and treatment of immunological infer— tility.Methods The levels of the circulating CD4 CD25 Treg,Foxp3,CTLA-4 were detected by flow eytometry(FCM) in 60 cases of immunological infertility women(study group)and 60 cases of health gestation age women(control group). and the results were analyzed with statistics.Results The levels of the CD4 CD25 Treg,Foxp3,CTLA一4 in peripheral blood of the study group were(3.66 ̄0.59)%,(2.97+_0.63)%,(3.17+_0_36)%,which were lower than those of the control group【(8.17 ̄0.63)%,(7.17 ̄0.53)%,(8.21 ̄0.56)%1,the differences between the two groups had statistical significances (all P<0.01).Conclusion The levels of the CD4 CD25 Treg,Foxp3,CTLA-4 in immunological infertility women have significantly decreased,which suggestes that the reduce of the gestation CD4 CD25 Treg,Foxp3,CTLA-4 may play an important role in female immunological infertility. [Key words]CD4 ̄CD25 regulatory T cells;Immunological infertility;Cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4:Foxp3
目前免疫性不孕的诊断标准是:夫妇双方同居一
年以上,其他检查结果均正常,而由女方血清抗精子
【基金项目】广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(编 号Z2014443)。
CHINA MEDICAL HERALD Vo1.1 2 No.4 Februa ̄201 5 抗体(ASAb)和(或)抗卵透明带抗体(ZPAb)阳性引起
的不孕【ll,它是妇科的常见病之一。据统计,已婚妇女
中约20%患有不孕症,其中20%.-40%属于免疫性不孕,
由于多种因素的影响。近年来发病率有上升的趋势[2-3]。
中国医药导报2015年2月第12卷第4期
但长期以来免疫性不孕的病因不明确,特别是分子和
细胞水平的研究几乎空白,评价诊断和治疗效果缺乏
量化的指标。研究表明,CD4+CD25 调节性T细胞
(CO4 CD25 Treg)与免疫性疾病密切相关。其数量和
功能异常是免疫性疾病的病因之一。为了探明外周血
中CD4+CD25 Treg与免疫陛不孕的关系,笔者对60例
免疫性不孕妇女外周血中的CD4 CD25 Treg、叉头
状转录因子3(Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4
(CTLA一4)进行了对照研究,现报道如下:
1资料与方法 1.1标本来源
研究组:收集2014年6~lO月在广西壮族自治区
柳州市中医院(以下简称“我院”)妇科门诊就诊并经
过检查确诊的免疫性不孕妇女60例,年龄24~41岁,
平均(32 ̄6)岁。对照组:收集2014年6-9月在我院妇
科门诊做人工流产术的健康育龄妇女60例,年龄
16~43岁,平均(28 ̄7)岁。研究组和对照组平均年龄
等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有
可比性
1.2方法
1.2.1试剂与仪器
1.2.1.1主要试剂藻红蛋白(PE)结合的CD4一PE单
抗和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD25一FITC单
抗、PE藻青蛋白标记(APC)标记的鼠抗人CTLA一4抗
体、APC Foxp3单抗及配套染色试剂均购自美国BD
公司。 1.2.1.2仪器美国BD公司生产的FACS Calibur型流
式细胞仪。
1.2.2检测方法 清晨空腹采集2 mL静脉血,EDTA一2K抗凝,以
淋巴细胞分离液获得单个核细胞,计数,调整细胞悬
液浓度为l ̄107/mL,取样100 tzL,分别加人10 IxL CD4、
CD25、CTLA一4、Foxp3抗体,室温下避光10 min,加溶
血素2 mL后再避光15 min,根据红细胞的裂解状态,
以1500 r/min离心5 min.弃去上清液,加磷酸盐缓冲
溶液(PBS)洗涤1次,再加300/xL PBS液混匀,上流式
细胞仪进行检测。
1.3统计学方法 采用统计软件SPSS 16.0对实验数据进行分析,
计量资料数据以均数±标准差(H ̄s)表示,采用t检
验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
研究组外周血中CD4 CD25 Treg、Foxp3、CTLA_4 水平均低于对照组,两组比较差异均有高度统计学意 义(P<0.01)。见表1。 ・妇幼医学・
表1 两组外周血中的CD4 CD25 Treg、Foxp3、 CTLA一4水平比较(%, ±s)
注:CD4 CD25 Treg:CD4 CD25 调节性T细胞;Foxp3:叉头状转录 因子3:CTLA一4:细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4
3讨论 与免疫性不孕相关的免疫性抗体的研究报道很
多,包括ASAb、ZPAb、抗子宫内膜抗体(EmAb)、抗心 磷脂抗体(AcAb)、抗卵巢抗体(AoAb)等,但目前只有
ASAb、ZPAb已通过动物实验得到证实 。ASAb可从
多个环节影响不孕『5 :①干扰精子获能、顶体反应及
受孕:宫颈黏液中含有抗凝血酶和蛋白酶抑制剂。可
抑制精子顶体酶系的活性,影响精子获得能量。表面
带的免疫球蛋白的精子.在通过宫颈黏液时,可与黏
液中受体片段结合,发挥作用,从而阻碍精卵结合。②清
除女陛生殖道精子:通过补体介导.ASAb激活巨噬细
胞发挥对精子的吞噬作用,加速清除女性生殖道内精
子,降低精子密度,影响受精。透明带(ZP)Ab可通过
以下机制导致不孕[10 4】:由于ZPAb结合在zP上,即
使卵子与精子能够结合成为受精卵,受精卵也会受
到一定的损伤,因此导致不孕:由于ZPAb能与zP结
合 干扰不透明带上的精子受体,使卵子与精子不能
相互发现而结合成为受精卵:由于卵巢的损伤,使卵巢
分泌与妊娠相关的激素减少,导致子宫内膜分泌女性
激素不足或分泌减少,造成不孕;由于卵巢的在ZPAb 的作用下,容易发生炎症等.使卵泡发育不是很好或
者导致排卵困难或不能排卵。同时ASAb和(或)
ZPAb的检测结果只能定性,不能定量,并且检测的结
果影响因素很多.特异性低,很多妇科疾病都会引起