清开灵不同制剂的高效液相指纹特征比较
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收稿日期:2006208201; 修订日期:2006211220作者简介:张妙媛(19792),女(汉族),湖南益阳人,现任中南大学湘雅二医院胸外科护师,主要从事重症监护等相关工作.3通讯作者简介:姚金成(19752),男(汉族),湖南邵阳人,现任中国药科大学国家新药筛选中心执业药师,硕士学位,主要从事临床药学及分子毒理学研究工作.清开灵不同制剂的高效液相指纹特征比较张妙媛1,姚金成23,赵绪元3,胡 领3(1.中南大学湘雅二医院,湖南长沙 410011; 2.中国药科大学国家新药筛选中心,江苏南京 210038;3.中南大学湘雅二医院临床药学研究室,湖南长沙 410011)摘要:目的比较清开灵不同制剂的高效液相色谱指纹图谱。
方法选择NUDE OSI L 2C 18色谱柱(4.6mm ×250mm,5μm ),流动相(A )甲醇2(B )0.5%醋酸梯度洗脱,运行时间65m in,检测波长255n m,测定清开灵注射液的指纹图谱。
结果以黄芩苷作为参照峰,得出各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。
结论清开灵不同制剂的指纹图谱相差较大,提示不同的生产工艺可能对其成分及含量有较大的影响。
关键词:清开灵; 指纹图谱; 高效液相色谱中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:100820805(2007)022*******Com par ison of the F i n gerpr i n t Chroma togram of D i fferen t Prepara ti on s of Q i n gka ili n g by HPLCZHANG M iao 2yuan 1,Y AO J in 2cheng23,ZHAO X u 2yuan 3,HU L ing3(1.The D epart m ent of Chest Surgery,the Second X iangya Hospital of Central South U niversity,Changsha 410011,China;2.N a tional Center of N e w D rug Screening,China Phar m aceutica l U niversity,N an jing 210038,China;3.C linica l Phar m acy R esearch Institute,the Second X iangya Hospita l of Central South U niversity,Changsha 410011,China )Abstract:O bjecti ve To compare the finger p rint chr omat ogra m of different p reparati ons of Q ingkailing Compound .M ethods H 2P LC with NUDE OSI L -C 18colu mn was used,the mobile phase was (a )methanol,(b )0.5%acetate buffer and the detecti on wavelength was at 255n m.Results Peaks were indicated on the HP LC 2finger p rint of different p reparati ons of Q ingkailing Com 2pound .The relative retenti on ti m e and relative peak area were obtained with itself peak .Conclusi on The finger p rint chr omat ogram of different p reparati ons of Q ingkailing Compound are noticeably different,which indicates different manufacture technol ogy affects ingredients and contents of Q ingkailing p reparati ons .Key words:Q ingkailing Compound; Finger p rint chr omat ogra m; HP LC 清开灵组方源于中医治疗急性热病传统处方“温病三宝”中的安宫牛黄丸,由胆酸、猪去氧胆酸、水牛角粉、珍珠母粉、金银花提取物、黄芩苷、栀子、板蓝根等组成,迄今为止已经形成系列产品。
临床效果显著,应用剂型主要有注射液、胶囊、颗粒、口服液。
用于清热解毒、镇静安神、祛痰开窍。
主治上呼吸道感染、病毒性感冒、急性化脓性扁桃体炎、急性咽炎、急性气管炎、高热等症。
按国家药品监督管理局颁发的关于中药注射剂指纹图谱研究的技术要求[1],本实验建立了合适的方法对清开灵不同制剂进行了指纹图谱的测定,并用中药指纹图谱相似度计算软件对其进行相似度的计算。
1 仪器与试剂1.1 仪器岛津LC 210A 系列高效液相色谱仪(含LC 210AT VP 泵,LC 210A i 泵,SP D 2M10AVP 检测器,CT O 210A 柱温箱,Class 2vp 工作站)。
1.2 试剂和样品甲醇、乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯,水为重蒸水。
黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所,清开灵注射液、清开灵胶囊、清开灵颗粒、清开灵口服液均为市售产品。
2 方法与结果2.1 样品的制备取清开灵注射液适量,用50%甲醇稀释,通过0.45μm 微孔滤膜过滤,作为供试品溶液;取清开灵口服液适量,用50%甲醇稀释,通过0.45μm 微孔滤膜过滤,作为供试品溶液;取清开灵颗粒适量,50%甲醇溶解,超声10m in ,9000r/m in高速离心5m in,取上层清液通过0.45μm 微孔滤膜过滤,作为供试品溶液;取适量清开灵胶囊,剥开囊壳,颗粒用50%甲醇溶解,超声10m in,9000r/m in 高速离心5m in,取上层清液通过0.45μm 微孔滤膜过滤,作为供试品溶液;取黄芩苷对照品适量,加50%甲醇溶解,制成含黄芩苷100μg/m l 的溶液,作为对照品溶液。
2.2 色谱条件及分析方法色谱柱为NUDE OSI L 2C 18色谱柱(4.6mm ×250mm,5μm );流动相为(A )甲醇2(B )0.5%醋酸,梯度洗脱:0m in:10%甲醇,50m in:100%甲醇,65m in:100%甲醇;检测波长255n m;流速1.0m l ・m in -1;柱温40℃,进样量20μl 。
2.3 方法学考察2.3.1 精密度实验取同一批号供试品溶液,连续进样6次。
结果表明,指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致,其相似度均大于95%,符合指纹图谱研究技术的要求。
2.3.2 稳定性实验取同一供试品溶液,分别于0,2,4,6,12,24h 检测。
结果表明,指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致,其相似度均大于95%,符合指纹图谱研究技术的要求。
2.3.3 重复性实验取同一批号供试品6份,制备供试品溶液,分别进样检测。
结果表明,指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致,其相似度均大于95%,符合指纹图谱研究技术的要求。
2.4 样品测定分别取清开灵胶囊、清开灵颗粒、清开灵口服液、清开灵注射液各4批,按供试品的制备方法制备供试液并检测,・244・时珍国医国药2007年第18卷第2期L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESEARCH 2007VOL.18NO.2 用中药指纹图谱相似度计算软件进行了分析,以黄芩苷的色谱峰为参照物峰,其相对保留时间为41.9m in,标示了清开灵不同制剂的色谱峰,见图1(S12S4为清开灵口服液,S52S8为清开灵颗粒剂,S92S12为清开灵胶囊,S132S16为清开灵注射液),相对保留时间和相对峰面积结果见表1。
2.5 结果利用中药指纹图谱相似度计算软件,以1批清开灵注射液图谱作为对照模板,计算16批样品的相似度,结果清开灵注射液与清开灵口服液相似度均在0.90以上,而清开灵胶囊与清开灵颗粒相似度均在0.4以下,可能是因为生产工艺的不同引起不同制剂的成分和含量有较大差异。
根据16批不同制剂指纹图谱的检测结果,总结出典型的色谱峰共16个,其中峰9为黄芩苷的色谱峰;7号峰为颗粒剂的特有峰,但5,6号峰缺失;注射剂中色谱峰最多,而胶囊剂只有少数几个特征峰;14,15号峰为口服液的特有峰,但峰形较宽,或见肩峰。
表1 清开灵不同制剂指纹图谱的相对保留时间和相对峰面积峰号相对保留时间注射液相对峰面积 1 2 3 4 RSD (%)口服液相对峰面积 1 2 3 4 RSD (%)10.1420.009130.008800.007930.00880 5.950.004910.004120.004540.004257.8820.1930.08350.09060.09420.08067.180.003830.003630.003480.00363 3.9030.2650.02340.02970.02530.029711.70.002360.002670.002370.002677.0540.4230.07820.07540.07890.0759 2.240.000.000.000.000.0050.4690.004960.005890.005680.005897.860.005260.005740.005440.00587 4.9660.5250.1370.1370.1170.1178.930.06620.06810.06920.0641 3.3370.7690.000.000.000.000.000.000.000.000.000.0080.8430.000.000.000.000.000.003650.003780.00350.00380 3.799 1.00 1.00 1.00 1.00 1.000.00 1.00 1.00 1.00 1.000.0010 1.070.05380.05640.05080.0564 4.910.06970.06660.06150.0616 6.1811 1.100.1290.1320.1230.128 2.880.09440.09400.09470.09400.36512 1.110.06730.03770.03930.037731.90.003670.003450.003030.003457.8613 1.200.1640.1720.1710.162 2.920.09800.09080.09960.09084.9414 1.240.000.000.000.000.000.2150.2140.22010.209 1.9515 1.280.000.000.000.000.000.09850.1320.08480.13422.07161.530.7230.7350.7140.7482.030.4560.4810.4570.4712.55峰号颗粒相对峰面积 1 2 3 4 RSD (%)胶囊相对峰面积 1 2 3 4 RSD (%)10.004920.004160.004310.004327.630.003200.003230.00320.003230.62520.0007810.0006300.0008650.00076412.70.0004450.0006780.0005450.00067519.130.000.000.000.000.000.000.000.000.000.0040.000.000.000.000.000.000.000.000.000.0050.04230.04970.04240.04248.280.000.000.000.000.0060.007340.006650.006550.00655 5.630.003090.003220.003090.003212.2170.004780.004580.004950.004048.580.000.000.000.000.0080.004600.004250.004420.004483.320.000.000.000.000.009 1.00 1.00 1.00 1.000.00 1.00 1.00 1.00 1.000.00100.004670.004220.004750.00475 5.560.005380.005930.005380.00592 5.52110.007850.007050.007640.007634.560.004250.004430.004250.0034211.0120.001990.001270.001770.0017717.90.002300.002390.002420.0033919.4130.000.000.000.000.000.08520.08380.08520.08380.970140.000.000.000.000.000.000.000.000.000.00150.001830.001840.001760.0014311.40.0008650.0008450.0007130.0008218.36160.6740.6840.6510.6353.330.4260.4120.4380.4624.84图1 清开灵不同制剂指纹图谱图2 清开灵不同制剂样本相似度比较3 讨论[2,3]3.1 色谱条件的选择3.1.1 色谱柱的选择本实验比较了3个不同厂家的色谱柱,NUDE OSI L 2C 18柱(250mm ×4.6mm,5μm ),PHE NOME NEX 2C 18柱(250mm ×4.6mm,5μm ),SI N OCHROM ODS (200mm ×4.6・344・L I SH I Z HE N MED I C I N E AND MATER I A ME D I CA RESEARCH 2007VOL.18NO.2时珍国医国药2007年第18卷第2期mm,5μm ),SI N OCHROM ODS 色谱柱的柱效较差,大多数峰不能分开,NUDE OSI L 2C 18柱和PHE NOME NEX 2C 18柱的分离情况相近,综合考虑,选用NUDE OSI L 2C 18柱作为本实验的色谱柱。
