2第二章培养基及其制备

干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料 上保藏。 如砂土管保藏法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真 菌保藏，保藏时间几至几十年。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称 斜面低温保藏法 石蜡油封存法 主要特点 传代培养，4℃保藏 石蜡油隔绝空气，室温或 4℃保藏 沙土管作载体，干燥器中抽 真空，室温或4℃保藏 适用范围 各种微生物的短期保藏。 各种微生物的中短期保藏， 不适用某些能分解烃类的菌 种。 产孢子微生物和芽孢细菌的 长期保藏，不适用对干燥敏 感的微生物 保藏期 1-6个月 1-2年
微生物学
第二章 微生物的纯培养和显微技术
基本概念
1、微生物的纯种分离：
将多种混杂的微生物，经某种技术或方法分离 或纯化的过程。
2、微生物的培养物（culture)：
在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物 群体。 纯培养物（pure culture)：在人为规定的条件下 培养、繁殖得到的只有一种微生物的培养物。
方
法
1、传代培养保藏方法
①斜面低温保藏法
方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 低温可减缓生长速度，单细胞仍有一定的活动条
件，一般4～6个月必须传代一次。
优点：方便，不受条件限制，各类微生物均可。 缺点：时间短、传代多、易退化。
②石蜡油低温保藏法：
原理：在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡， 达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态， 同时石蜡油还防止水分蒸发，
第一节 微生物的分离和纯培养
一、无菌技术（aseptic technique）
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他
微生物污染，其自身也不污染操作环境的技术被称为

培养基制备一、概述培养基是生物实验中必不可缺的基础设施，它为微生物、细胞等生物种群的繁殖和生长提供了必要的营养物质。

本文将介绍常用的培养基配方和制备方法，以及如何根据中国国情进行优化。

二、常用培养基1.大肠杆菌培养基（LB）配方：10克蛋白胨、5克酵母提取物、10克氯化钠、加水至1L。

特点：优点是制备方便、易于培养，多数菌株生长良好。

缺点是含有大量营养物质，若用于长期贮存菌株，容易导致突变风险增加。

2.液体麦康凯发酵培养基（BHI）配方：将500克肉汤蛋白胨培养基、10克氯化钠、2克二氢磷酸氢二钠、2克葡萄糖溶解在1L蒸馏水中。

特点：适合多种微生物的生长，包括厌氧微生物。

BHI较LB富含营养物质，可提供较好的生长环境，适合繁殖菌株。

3.青霉素酸糖盐地衣芽孢杆菌培养基（PDA）配方：20克琼脂、4克葡萄糖、0.75克潮霉素、0.125克青霉素钾盐、0.05克维生素B1、加水至1L。

特点：适用于分离和培养种类繁多的真菌、放线菌等微生物，能有效地防止杂菌的污染。

三、优化培养基由于中国的气候、温度等环境条件与西方国家有所不同，因此需要进行针对性的优化，以满足不同微生物的生长需求。

1.调整pH值许多微生物生存和生长所需的pH值范围在7.0-7.5之间。

但是，我们在制备培养基时应从当地水质的酸碱性入手，适当调整pH值，以便营养物质的有效吸收。

2.添加一些特殊成分在中国有些地区，水质有问题，例如含有高浓度的重金属和有机物污染，这些都会影响微生物的生长和繁殖。

因此，在制备培养基时，要添加些许抗菌剂和抗氧化剂，保证培养环境的纯净度和稳定性。

3.注意制备温度对于不同的菌株，其适宜的生长温度也有所不同。

在制备培养基时，应根据菌株的特点，以及所处的生态环境，调整制备温度，将传统的37度下的浸渍式消毒改为高温滤器灭菌法，避免纳米材料产生自拍。

四、结论在国内微生物学、生物医学和生物工程研究领域中，培养基是至关重要的实验基础设施。

第二节 微生物制药工艺技术基础
一、菌种的分离与筛选
1．含菌样品收集 2. 富集培养：“投其所好”，“取其所抗” 3. 菌种纯化：（1）平板划线法 （2）稀释平板法 4. 性能测定（菌种复筛）
（1）平板划线法
是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀 释而达到分离的目的。固体培养基四区划法接种法步骤：
二、菌种的选育与保藏
1．自然选育
依据自发突变原理，通过不断分离、筛选，除去 衰变菌落，从中选择维持原有生产水平的菌株或高产 突变株，达到纯化、复壮、稳定生产目的。
单孢子菌悬液的制备→分离→单菌落培养→筛选
2．诱变育种
指有意识地将生物体暴露于物理的、化学的或生物的一种 或多种诱变因子，促使生物体发生突变，进而从突变体中 筛选具有优良性状的突变株的过程。
优点是生产规模大、蒸发温度低、速度快， 目的是除去挥发性溶剂，保持物料生物活性， 加速蒸发原理是使液体形成薄膜，增加气化表面
积。
世界上最大的具有80m2蒸发面 积的薄膜蒸发器。
实验室常用真空旋转蒸发仪。
薄膜蒸发器
2.干燥
使物质从固体或半固体状经除去存在的水分或它种 溶剂，从而获得干燥物品的过程。
第二章 生物制药工艺技术基础
Basis of biopharmaceutical technology
生化制药工艺技术基础 微生物制药工艺技术基础 生物技术制药工艺技术基础 生物制药中试放大工艺设计 生物药物的研究与新药申报
本章学习目标
掌握：生化活性物质的提取、分离和纯化； 微生物菌种选育和培养。
②pH；
③盐；
④表面活性剂。
四、生化活性物质浓缩与干燥
1.浓缩方法： 生化活性物质的热不稳定性 ①盐析，中性盐硫酸铵沉淀蛋白（酶）； ②有机溶剂沉淀，生物大分子溶液

培养基制备的流程
培养基制备的流程主要包括以下几个步骤：
1.计算配方：根据所需培养基的种类和实验需求，计算各成分的比例和用量。

2.称量：准确称取各种成分，如蛋白胨、牛肉膏、琼脂等。

3.溶解：将称取的成分放入适量的水中，搅拌均匀，使其充分溶解。

对于一些
不易溶解的物质，如琼脂，可能需要加热辅助溶解。

4.调pH：根据微生物的生长需求，调整培养基的pH值。

一般而言，细菌培养
基的pH值范围在6.5-7.5，真菌培养基的pH值范围在4.8-5.8。

5.过滤：将溶解好的培养基通过过滤器过滤，以去除可能存在的杂质。

6.分装：将过滤后的培养基倒入无菌的培养皿或瓶子中，注意留出适当的空隙，
以利于蒸汽的排出。

7.灭菌：将分装好的培养基进行灭菌处理，常用的方法有高压蒸汽灭菌和干热
灭菌。

灭菌过程中要注意保持培养基内部的温度和压力，确保微生物被有效杀灭。

8.检验：对制备好的培养基进行质量检验，如观察培养基的外观、透明度、pH
值等，确保符合实验要求。

9.储存：将检验合格的培养基在适当的条件下储存，如4℃冰箱或阴凉干燥处。

在使用前，如需再次检验，可进行细菌或真菌的接种试验。

需要注意的是，在培养基制备过程中要严格遵循无菌操作规程，避免微生物污染。

同时，根据实验需求选择合适的培养基类型和配方，以满足不同微生物的生长需求。