酸枣仁粉碎前后对酸枣仁皂苷A含量和安神功效的影响

２００８年１１月第１５卷第１１期　中国中医药信息杂志　・３９・　

酸枣仁粉碎前后对酸枣仁皂苷Ａ含量和　

安神功效的影响　

李外，张雪伟，陈敏，刘萍　

（中国人民解放军总医院中药房，北京１００８５３）　

摘要：目的研究在水提取过程中酸枣仁粉碎前后其所含有效成分酸枣仁皂苷Ａ的溶出以及安神功效是否有差异。　

方法采用ＨＰＬＣ法，Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ　色谱柱（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５　），流动相：甲醇一水（６５：３５），流速１．０　ｍＬ／ｍｉｎ；蒸发光　散射检测器；漂移管温度Ｉ１　０℃；载气流速２．４　Ｌ／ｍｉｎ。采用协同睡眠、自主活动等指标，观察粉碎的酸枣仁与未粉　

碎的酸枣仁对小鼠的作用。结果未经粉碎的酸枣仁在其水提样品中未检测出酸枣仁皂苷Ａ，粉碎后的酸枣仁在其水　

提样品中的酸枣仁皂苷Ａ含量为０．００９　Ｏ％；粉碎后的酸枣仁对戊巴比妥钠有较好的协同睡眠作用　结论临床应用　酸枣仁宜粉碎。　

关键词：酸枣仁；酸枣仁皂苷Ａ；安神作用　

中图分类号：Ｒ２８４．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５．５３０４（２００８）１１－００３９．０３　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｊｕｊｕｂａｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　Ｔｒａｎｑｕｉｌｉｚｉｎｇ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　Ｓｐｉｎｏｓａｅ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　

Ｃｒｕｓｈ　ＬＩ　Ｗａｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｗｅｉ，ＣＨＥＮ　Ｍｉｎ，ｅｔ　ａｌ（Ｐｈａｒｍａｃｙ　ＴＣＭ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　

１００８５３，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｊｕｊｕｂａｓｉｄｅ　Ａ　ａｎｄ　ｔｒａｎｑｕｉｌｉｚｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｃｒｕｓｈｅｄ　

Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　Ｓｐｉｎｏｓａｅ　ｉｎ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃｒｕｓｈｅｄ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　Ｓｐｉｎｏｓａｅ　ａｎｄ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　

Ｓｐｉｎｏｓａｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｃｏｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆｊｕｊｕｂａｓｉｄｅ　Ａ　ｉｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗａｓ　ｉｎｓｐｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ　

ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｏｎ　Ａｇｉｌｅｎｔ　ｃｌ８　ｃｏｌｕｍｎ（２５０　ｍｍ　ｘ　４．６　ｍｍ，５　），ｕｓｉｎｇ　ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ（６５：　

３５ｌ　ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ａｔ　ａｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０　ｍＬｌｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒｗａｓ　ＥＬＳＤ．Ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆｄｒｉｆｔ　ｔｕｂｅ　ｆｏｒ　

ＥＬＳＤ　ｗａｓ　１１０℃ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｌｕｘ　ｏｆＮ２　ｗａｓ　２．４　Ｌ／ｒａｉｎ．Ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｇｉｖｅｎ　ｔｗｏ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｏｆ　ａｓｓｉｓｔｉｎｇ　ｓｌｅｅｐｉｎｇ　ａｎｄ　ｖｏｌｕｎｔａｒｙ　ａｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｊｕｊｕｂａｓｉｄｅ　Ａ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｆ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　Ｓｐｉｎｏｓａｅ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｊｕｊｕｂａｓｉｄｅ　Ａ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｆ　ｃｒｕｓｈｅｄ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　Ｓｐｉｎｏｓａｅ　ｗａｓ　０．００９　０％．　Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｆ　ｃｒｕｓｈｅｄ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　Ｓｐｉｎｏｓａｅ　ｃｏｕｌｄ　ａｓｓｉｓｔ　ｓｌｅｅｐｉｎｇ　ｗｅｌ１．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　

Ｓｐｉｎｏｓａｅ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ｃｒｕｓｈｅｄ　ｆｏｒ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｕｓｅ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｅｍｅｎ　Ｚｉｚｉｐｈｉ　Ｓｐｉｎｏｓａｅ；ｊｕｊｕｂａｓｉｄｅ　Ａ：ｔｒａｎｑｕｉｌｉｚａｔｉｏｎ　

酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ｚｉｚｉｐｈｕｓ　ｊｕｊｕｂａ　Ｍｉｌ１．ｖａｒ．　ｓｐｉｎｏｓａ（Ｂｕｎｇｅ）的干燥成熟种子，始载于《神农本草经》，具有　

补肝宁心、敛汗生津的作用，用于虚烦不眠、惊悸多梦、体虚　多汗、津伤口渴等证　，是临床中医常用的安神要药。现代研　

究认为，酸枣仁皂苷ｈ为酸枣仁的活性成分，具有较强的镇静、　

催眠作用　。目前，北京各大医院中药房所使用的酸枣仁有的　

是经过粉碎的，有的没有粉碎。为了研究粉碎与未粉碎的酸枣　仁在水煎煮过程中有效成分含量以及安神作用是否有差异，更　

好的指导临床合理用药，我们进行了以下试验。　

１材料　Ｉ．１试药　

酸枣仁（炒）购于北京同仁堂（毫洲）饮片有限责任公司；酸　

枣仁皂苷Ａ购自中国药品生物制品检定所（批号ｉ１０７３４—　２００４０７）。甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。　

安定，天津力生制药股份有限公司，批号０７０３００４；戊巴比妥钠，　北京化学试剂公司，批号０２０９１９。　

１．２动物　

昆明种小鼠，体重１８￣２２　ｇ，雌雄各半，中国人民解放军总　医院动物实验中心，动物合格证号：ＳＣＸＫ（京）２００４—０００１。　１．３仪器　

Ａｇｉｌｅｎｔｉ１００高效液相色谱仪，Ａ１ｌｔｅｃｈ蒸发光散射检测　器，Ｇ１３１１Ａ泵，手动进样器，ＧＩ３７９Ａ脱气泵，Ａｇｉｌｅｎｔ　ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ　

ｆｏｒ　ＬＣ工作站；ＪＺＺ９８一ＣＭ动物自主活动监测仪。　

２酸枣仁皂苷Ａ含量测定　２．１　色谱条件　

Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ。８色谱柱（２５０　ｎｌｍ×４．６　ｍｍ，５｝ａｍ），流动相为甲　

醇一水（６５：３５），流速１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，蒸发光散射检测器，漂移管　温度１１０℃，载气流速２．４　Ｌ／ｍｉｎ。　２．２对照品溶液的制备　

取酸枣仁皂苷Ａ对照品适量，精密称定，置１Ｏ　ｍＬ容量瓶中　

加甲醇溶解，定容，制成０．５２　ｍｇ／ｍＬ的酸枣仁皂苷Ａ溶液。　２．３供试品溶液的制备　

挑选颗粒饱满、大小均匀的酸枣仁（炒），用铜铳粉碎后，　过１２目筛。精密称取粉碎后的酸枣仁１００　ｇ，加蒸馏水回流提　

取３次，第１次加７倍量溶媒回流１．５　ｈ，第２次加６倍量溶媒　回流１　ｈ，第３次加５倍量溶媒回流１　ｈ。提取液过滤，合并，

　４０・　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＴＣＭ　Ｎｏｖ．２００８　Ｖｏ１．１　５　Ｎｏ．１１　

浓缩至每毫升溶液含０．２５　ｇ原药材。将浓缩液以２　０００　ｒ／ｍｉｎ　离心２０　ｍｉｎ，取上清液，上ＳＰ８２５大孔吸附树脂柱，先用４　ＢＶ　

蒸馏水洗脱，水洗脱液弃去，再用４　ＢＶ的８０％乙醇洗脱，收集　

８０％乙醇洗脱液，回收乙醇至无醇味，经冷冻干燥后，得干燥物。　精密称取干燥物适量，加甲醇溶解，定容至５　ｍＬ容量瓶中，得样　

品Ｉ，备用。　挑选颗粒饱满、大小均匀的酸枣仁（炒），不经粉碎，精密称　

取１００　ｇ，按样品Ｉ的制备过程，得样品ＩＩ，备用。　挑选颗粒饱满、大小均匀的酸枣仁（炒），经粉碎机粉碎后，　

精密称取１０　ｇ。用石油醚回流脱脂２次，石油醚弃去，药渣挥去　

石油醚至干；再用甲醇回流提取２次，第１次用８倍量溶媒回流　２　ｈ，第２次用７倍量溶媒回流１．５　ｈ。提取液过滤，合并，用旋　

转蒸发仪回收甲醇至干，再加甲醇少量多次溶解干燥提取物，　

转移至ｌ０　ｍＬ容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得样品ＩＩＩ，备用。　２．４线性关系考察　

精密吸取对照品溶液（０．５２　ｍｇ／ｍＬ）２、４、６、８、１０、１２　ｇＬ，　

按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标，以酸枣仁皂苷　Ａ进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程：Ｊ，＝１．２８８　８Ｚ＋　

５．８８９８，，＝Ｏ．９９９３。结果表明，酸枣仁皂苷Ａ在１．０４～６．２４　ｇｇ　范围内呈良好的线性关系。　

２．５精密度试验　

精密吸取对照品溶液，连续测定５次，酸枣仁皂苷Ａ色谱峰　面积的ＲＳＤ＝０．８７％，表明精密度良好。　

２．６重复性试验　

取同一批次酸枣仁药材，按照“２．３”项下样品Ｉ制备方法　制备供试品溶液５份，测定酸枣仁皂苷Ａ含量，结果平均含量为　

０．００９　０３％，ＲＳＤ＝１．５９％，表明重复性良好。　

２．７稳定性试验　

取同一供试品溶液，于０、３０、６０、１２０、２４０、４８０　ｍｉｎ　

分别进样，酸枣仁皂苷Ａ色谱峰面积的ＲＳＤ＝１．６１％，表明供试　品在８　ｈ内测定，结果稳定。　２．８加样回收率试验　

采用加样回收法，精密称取５份已知含量的样品，分别加　入一定量的对照品，按供试品溶液制备方法和色谱条件进行测　

定并计算回收率。结果见表１。　

表１　加样回收率试验结果　－５）　

２．９样品测定　

将各供试样品溶液按上述色谱条件测定并计算含量。结果　

表明，未经粉碎的酸枣仁，用水回流提取，其样品中未检测到酸　

枣仁皂苷Ａ；粉碎后的酸枣仁用水或甲醇提取，其样品中均检　测到酸枣仁皂苷Ａ，但前者的含量远低于后者。结果见表２。　表２样品中酸枣仁皂苷Ａ的含量测定结果（ｎ＝３）　

３对安神功效的影响　３．１与戊巴比妥钠协同睡眠试验　

取昆明种小鼠４０只，雌雄各半，按性别、体重随机分为４　

组，每组ｌ０只。其中空白对照组每只给予等体积的生理盐水，　阳性对照组（安定组）给予安定水溶液灌胃，两个试药组分别给　

予粉碎后的酸枣仁及未粉碎的酸枣仁提取液，连续给药１０　ｄ。　于末次给药前８　ｈ禁食，前１　ｈ禁水，末次给药３０　ｍｉｎ后，腹　

腔注射戊巴比妥钠４０　ｍｇ／ｋｇ，观察并记录各组小鼠睡眠持续　

时间。结果见表３。　

表３受试药物对小鼠戊巴比妥钠催眠作用的影响Ｏｃ＋ｓ）　

注：与阴性对照组相比，｝尸＜０．０５，　尸＜０．０１（下同）　３．２小鼠自主活动试验　

取昆明种小鼠４０只，雌雄各半，按性别、体重随机分为４　

组，每组１０只。其中空白对照组每只给予等体积的生理盐水，　安定组每只给予安定水溶液灌胃，两个试药组分别给予粉碎后　

的酸枣仁及未粉碎的酸枣仁提取液，连续给药１０　ｄ。末次给药　

３０　ｍｉｎ后，将小鼠置ＪＺＺ９８一ＣＭ动物自主活动监测仪中，使其适　应３　ｍｉｎ后，记录５　ｍｉｎ内活动次数。分别记录给药３Ｏ、９０ｍｉｎ　

后的自主活动情况。结果见表４。　

表４　受试药物对小鼠自主活动的影响Ｃ肚　

４讨论　

从含量测定结果可以看到，在水提取过程中，经过粉碎处　

理的酸枣仁可以检测到酸枣仁皂苷Ａ，未经粉碎处理的酸枣仁　未检测到酸枣仁皂苷Ａ。这可能是因为酸枣仁质地比较坚硬，　

种皮紧密，虽然经过了炒制的过程，但未经粉碎的酸枣仁有效　

成分仍很难煎煮出来。从药效实验结果来看，酸枣仁粉碎组与　酸枣仁未粉碎组均能延长戊巴比妥钠的睡眠时间，但酸枣仁未　粉碎组只是有延长睡眠时间的趋势，而酸枣仁粉碎组有较好的　

延长睡眠的作用，与对照组比较差异有统计学意义。本研究从　

化学成分和药效作用两方面证实，粉碎与未粉碎的酸枣仁在水　

煎煮过程中其有效成分的溶出和安神药效作用均有一定的差　异。因此，临床酸枣仁的应用还是宜粉碎。