小鼠腹水型肝癌细胞系Hca 2

半边莲煎剂对肝癌的抑制作用及对P27和BCL-2表达的影响刘晓宇;张红【摘要】目的研究半边莲煎剂对肝癌H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用.方法建立肝癌H22荷瘤小鼠实体瘤模型,将24只小鼠分为3组,生理盐水组、半边莲煎剂组和5-氟脲嘧啶组,每组各8只.通过测定荷瘤小鼠的瘤重、抑瘤率观察半边莲煎剂对肿瘤生长的抑制作用,并采用免疫组化技术检测肿瘤组织中P27和BCL-2的表达情况.结果半边莲煎剂组瘤重与生理盐水组相比明显减小,差异有显著性意义(P＜0.05).半边莲有明显的抑瘤作用,其抑瘤率为39.48％.P27和BCL-2在3组中均呈阳性表达,半边莲煎剂组的P27表达增强,BCL-2表达减弱,与生理盐水组比较,差异均有显著性意义(P＜0.05);而半边莲煎剂组与5-氟脲嘧啶组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).结论半边莲煎剂具有明显的抑瘤作用,其作用机制可能与上调P27和下调BCL-2表达有关.【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2016(038)001【总页数】4页(P20-23)【关键词】半边莲;P27;BCL-2;原发性肝癌【作者】刘晓宇;张红【作者单位】大连医科大学附属第二医院中医科,辽宁大连116027;大连医科大学附属第二医院中医科,辽宁大连116027【正文语种】中文【中图分类】R273[引用本文] 刘晓宇，张红. 半边莲煎剂对肝癌的抑制作用及对P27和BCL-2表达的影响[J].大连医科大学学报，2016,38(1)：20-23.半边莲又名急解索、蛇舌草等，为桔梗科植物半边莲的全草，多在夏季采收，连根拔起后入药。

其始载于《滇南本草》，后李时珍在《本草纲目》中亦有记载，“半边莲，小草也。

生阴湿塍堑边。

就地细梗引蔓，节节而生细叶。

秋开小花，淡红紫色，止有半边，如莲花状，故名”。

其性辛、平，味甘，归心、小肠、肺经，具有清热解毒、利尿、消肿的功效。

它是临床上常见的抗肿瘤中药，可用于治疗肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌等多种肿瘤，并可辅以外敷治疗癌症[1]。

同病异证H22肝癌小鼠肿瘤组织细胞凋亡通路基因差异表达的特征王艳明1，2，方肇勤1，潘志强1，卢文丽1，刘小美1，管冬元1，梁超1（1.上海中医药大学基础医学院，上海201203；2.廊坊市妇幼保分保健中心，河北廊坊065000）摘要：目的：观察昆明种H22肝癌小鼠邪毒壅盛证与气虚证肿瘤组织细胞凋亡通路基因表达特征，探讨中医同病异证发生的物质基础。

方法：采用小鼠计量化辨证方法，筛选出瘤早期邪毒壅盛证与气虚证同病异证H22肝癌小鼠，采用Affymetrix GeneChip Mouse Exon1．0ST Array检测肿瘤组织细胞凋亡通路相关基因表达的特征。

结果：依据KEGG数据库细胞凋亡通路，筛选出芯片数据中匹配的33个基因，发现（1）TNF－α和IL－1依赖的细胞凋亡信号通路总体上不利于邪毒壅盛证小鼠肿瘤细胞的凋亡；（2）IL－3依赖的细胞凋亡信号通路总体上反似有利于邪毒壅盛证小鼠肿瘤细胞凋亡；而（3）线粒体介导的细胞凋亡信号通路，邪毒壅盛证小鼠一致表达下调，提示不利于其细胞凋亡。

结论：邪毒壅盛肝癌小鼠肿瘤细胞恶性增殖程度高，可能与线粒体介导的细胞凋亡信号通路系列相关基因表达轻度抑制有关。

关键词：肝癌；小鼠；同病异证；凋亡中图分类号：R2－03文献标识码：B文章编号：1000－1719（2012）08－1622－04Genes Different Expression in Tumor Apoptosis Pathwayof H22Liver Cancer Mice with Different SymptomsWANG Yan-ming，FANG Zhao-qin，PAN Zhi-qiang，LU Wen-li，LIU Xiao-mei，GUAN Dong-yuan，LIANG Chao （Basic Medical School，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai201203，China）Abstract：Objective：To observe genes expression in tumor cell apoptosis pathway of Kunming H22liver cancer mice of poi-sonous pathogenic factors syndrome and asthenia of qi syndrome and probe the material basis of the same disease with different symptoms．Methods：Apply measurement of the syndrome differentiation method in mice．Screen poisonous pathogenic factors syn-drome and asthenia of qi syndrome with H22liver cancer in mice and use Affymetrix GeneChip Mouse Exon1．0ST Array to de-tect tumor cells apoptosis pathway-related gene expression characteristics．Results：According to the KEGG database apoptosis pathway，the data filtered out33matched genes in the chip．（1）TNF－α-dependent and IL－1－dependent apoptosis pathway in general was not conducive to tumor cell apoptosis for poisonous pathogenic factors syndrome．（2）IL－3－dependent apoptotic pathway in general seems to be favorable for tumor cell apoptosis for poisonous pathogenic factors syndrome（3）In the mitochon-dria-mediated apoptosis signaling pathway，poisonous pathogenic factors syndrome downregulated，suggesting negative effect on their apoptosis．Conclusion The high degree of malignant proliferation with poisonous pathogenic factors syndrome may be related to the mild inhibition of gene expression in mitochondria-mediated apoptosis signaling pathway．Key words：liver cancer；mice；same disease with different symptoms；apoptosis在原发性肝癌的防治中，中医临床依据患者普遍存在的“同病异证”和“异病同证”，往往采取“同病异治”和“异病同治”。

58第15卷 第12期 2013 年 12 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 15 No. 12 Dec .，2013白毛夏枯草是唇形科植物，性寒，味苦、甘，归肺、肝经。

功效清肺止咳，利胆退黄，凉肝息风，软坚散结[1]。

临床少见其关于抗肿瘤方面的研究，我们在实验研究中发现对肝癌具有良好的抑制作用，本文通过白毛夏枯草水煎液对肝癌细胞株HepG2增殖及对小鼠移植性肝癌H 22实体瘤作用的影响，观察其对肿瘤的抑制作用。

1 实验材料1.1 实验药物白毛夏枯草水提液的制备：白毛夏枯草，取自江苏省中医院。

取白毛夏枯草150 g，用10倍蒸馏水加热回流提取2次，每次1 h，合并提取的药液，浓缩制成相当于生药浓度2.5 g/mL 的药液灭菌备用。

1.2 实验试剂1640培养基（GIBCO 公司）；胰蛋白酶粉（Sigma 公司）；PBS 粉（Sigma 公司）；小牛血清（杭州四季青生物公司）；MTT 粉剂（Biosharp 公司）；二甲基亚砜（DMSO）分析纯（上海凌峰公司）；5-FU（天津金耀氨基酸有限公司）。

1.3 细胞株人肝癌细胞株HepG2由东南大学医学院惠赠。

江苏省中医院肿瘤科实验室常规培养。

用含10%的小牛血清的1640培养基，在37 ℃、5% CO 2、完全饱和湿度条件下常规培养，取对数生长期细胞进行试验。

白毛夏枯草提取液抗肝癌体内外实验研究张星星，吴坚，李东，邹玺（南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210029）摘 要：目的：观察白毛夏枯草提取物对肝癌细胞株HepG2的体外增殖抑制作用及对小鼠移植性肝癌H 22实体瘤的体内抑制作用的影响。

方法：（1）肝癌细胞增殖抑制观察：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测药物，观察不同浓度的白毛夏枯草水提液对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用；（2）小鼠腹水瘤抑制作用观察：小鼠接种H 22腹水瘤后,造成移植性小鼠肝癌模型。

^(32)P-磷酸铬胶体局部给药在肝癌淋巴道转移小鼠的体内分布童冠圣;黄培林;刘璐【期刊名称】《现代医学》【年(卷),期】2002(30)6【摘要】目的研究3 2 P 磷酸铬胶体 (3 2 P 胶体 )局部给药在腹水型肝癌淋巴道转移小鼠的体内分布。

方法在 3 0只KM小鼠爪垫下注射H2 2腹水型肝癌细胞 ,建立淋巴道转移模型 ,动态观察3 2 P 胶体瘤体内注射后在小鼠局部、区域淋巴结和全身各器官组织内的分布情况 ,以及3 2 P 胶体在局部淋巴结内的活度与给药剂量的关系。

结果在分期处死的小鼠中观察到 ,3 2 P 胶体主要聚集在注射局部和区域淋巴结内 ,肝、脾、肺等分布活度较低。

区域淋巴结聚集的活度随给药剂量的增加而增高。

结论 3 2 P 胶体局部注射后可经淋巴道转运 ,并聚集在区域淋巴结。

【总页数】4页(P354-357)【关键词】局部给药;^32P-磷酸铬胶体;体内分布;H22腹水型肝癌;淋巴道转移;小鼠【作者】童冠圣;黄培林;刘璐【作者单位】铁道部北京铁路总医院核医学科;东南大学核医学技术研究所【正文语种】中文【中图分类】R735.7;R73－3【相关文献】1.32P-磷酸铬-聚L乳酸粒子植入肝癌H22移植瘤模型治疗淋巴道转移的潜能 [J], 高海林;刘璐;黄培林;吴清华;杨泽萱;聂琦2.胶体~(32) P-磷酸铬间质给药对犬累积损伤效应的研究 [J], 聂琦;刘璐;刘志勇;黄培林;兰兴昊;高海林;吴清华;孙晋;黄鹰3.32P胶体局部给药防治H22移植瘤淋巴道转移的实验研究 [J], 黄培林;童冠圣;刘璐;黄鹰;张丽达4.32P-磷酸铬胶体注入兔类风湿性关节炎模型关节腔后在其体内各主要组织器官的分布 [J], 高宜军;董启榕5.^(32)P-胶体局部给药治疗胰腺移植瘤及其在淋巴道的运转 [J], 刘璐;王自正;高宏;李旭东;尹其华;黄鹰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

苦碟子注射液的抗肿瘤作用周晓棉;郑洪浩;曹春阳;曹颖林【期刊名称】《沈阳药科大学学报》【年(卷),期】2007(24)2【摘要】目的探讨苦碟子注射液（Kudiezi injection，KDI）抗肿瘤作用。

方法体内实验分别采用小鼠肝癌H22、肉瘤S180和Lewis肺癌荷瘤小鼠模型，造模次日小鼠连续7d给予苦碟子注射液，每天1次。

剂量分别为5、10、20g·kg^-1。

第8天记录每组每只小鼠体质量和瘤质量，计算每组平均体质量和抑瘤率；体外实验采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测人宫颈癌Hela细胞或肝癌HepO-2细胞增殖抑制率；升白实验采用肝癌H22荷瘤小鼠模型，造模次日小鼠连续7d给予苦碟子注射液，每天1次。

剂量分别为5、10、20g·kg^-1。

第8天记录每组每只小鼠外周血中自细胞数量。

结果苦碟子注射液（5、10、20g·kg^-1）对3种荷瘤小鼠肿瘤增长有非常显著的抑制作用（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．001），同时显著升高肝癌H22小鼠外周血白细胞数量（P〈0．05）；在体外，苦碟子注射液（12．5-200g·L^-1）对人宫颈癌Hela细胞或肝癌HepG-2细胞增殖有非常显著的抑制作用。

结论苦碟子注射液体内体外均有抗肿瘤活性，在体内抑瘤的同时能显著升高肝癌H22小鼠外周血白细胞数量。

【总页数】6页(P103-108)【关键词】苦碟子注射液;抑瘤作用;细胞增殖【作者】周晓棉;郑洪浩;曹春阳;曹颖林【作者单位】沈阳药科大学药学院;沈阳市红十字会医院【正文语种】中文【中图分类】R96【相关文献】1.苦碟子注射液对氧糖剥夺损伤的C6胶质细胞凋亡与自噬调节作用 [J], 郑宏;张昕洋;鲁雨荍;曾子修;梁晓;刘雪梅2.探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用 [J], 郑造乾;骆瑾瑜;陈燕华;王小军3.榄香烯对肝癌腹水瘤细胞系Hca—F25／CL—16A3的抗肿瘤作用机理的实验研究Ⅳ．榄香烯的抗肿瘤作用及光镜、透射电镜的观察 [J], 张红;左云飞;等4.中药全蝎抗肿瘤作用初探——Ⅲ.530号粗提物的抗肿瘤作用 [J], 张甫同5.气功外气的抗肿瘤作用及增强免疫功能机理的实验研究(一)——气功外气对体内抗肿瘤转移的作用 [J], 曹雪涛;叶天星;高也陶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

２０ｌ０年第３７卷第４期　肝癌移植瘤小鼠髓样抑制细胞比例变化及亚砷酸的调节作用　１９７　图２　Ａｓ　Ｏ　对ＭＤＳＣｓ的体外作用　Ｆｉｇｕｒｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ａｓ２０３　ｏｎ　ＭＤＳＣｓ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　

３讨论　近年国外研究表明，ＭＤＳＣｓ可能发挥着重要的　免疫抑制作用，而且极易为肿瘤源性细胞因子所诱　导…。但是也有研究者发现，从荷瘤鼠分离的ＭＤＳＣｓ　与Ｔ淋巴细胞混合培养时，ＭＤＳＣｓ并未表现出明显的　抑制作用　］。因此，有关ＭＤＳＣｓ这一抑制细胞亚群是　否存在、其意义及发挥作用的机理等，尚存在着异议，　有待于进一步明确。　本研究从健康昆明鼠外周血或脾脏中分离的淋　巴细胞加入１０％肝癌腹水上清液培养时，ＭＤＳＣｓ比　例逐渐增加，说明肿瘤组织能释放一些因子诱导　ＭＤＳＣｓ增加，而这种作用可以为Ａｓ　Ｏ，所抑制。本研　究移植了肝癌细胞株的昆明鼠，随着皮下移植瘤的　生长，外周血、脾脏和骨髓中ＭＤＳＣｓ比例逐渐增加，　且长时间维持在较高水平，与慢性炎症介导的ＭＤ—　ＳＣｓ一过性升高明显不同　；而且，肿瘤质量的增加，　与外周血、脾脏中ＭＤＳＣｓ比例增加呈正相关。特别　是当用Ａｓ：Ｏ　抑制ＭＤＳＣｓ数量比例时，肿瘤生长也得　到了抑制。上述体外和动物体内结果说明，ＭＤＳＣｓ　可能与肿瘤的发生和发展有关，而且提示用Ａｓ：Ｏ，可　通过抑制ＭＤＳＣｓ成为治疗肿瘤的新机制　。但是，　ＭＤＳＣｓ究竟通过怎样的机制来促进肿瘤的发生和发　展，并不明确。本研究试图在动物体内实验时，用流　式细胞术检测淋巴细胞亚群的变化，未能得出明确　

的结果，说明ＭＤＳＣｓ作用机制的复杂性。　肿瘤可能通过释放细胞因子诱导ＭＤＳＣｓ产生并　维持其免疫负向调控作用，这些生物活性因子包括　ＶＥＧＦ、ＩＬ一６、ＩＬ一１０、ｃＭ—ＣＳＦ等…　。本研究体外实验　加入腹水瘤上清培养外周血或脾脏中的淋巴细胞，　能诱导ＭＤＳＣｓ比例增加，为上述假设提供了依据。　以上这些细胞因子作用机制均可为针对ＭＤＳＣｓ的治　疗提供新靶点。　参考文献　１曹雪涛．肿瘤生长与转移中的免疫学问题田．中国肿瘤生物治疗杂　志，２００７，Ｉ４（１）：２－＿６．　２李成刚，海春旭．不成熟髓样细胞与肿瘤免疫抑制研究进展Ⅱ］．癌变・　畸变・突变，２００４，１６（６）：３８３－－３８４．　３郑重，刘炳亚．髓系抑制性细胞与肿瘤免疫逃逸Ⅱ】．现代免疫学，　２００７，２７㈥：３４９－－－３５２．　４　Ｓｕｚｕｋｉ　Ｅ，Ｋａｐｏｏｒ　Ｖ，Ｊａｓｓａ　ＡＳ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｍｄｔａｂｉｎｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｅｌｉｍｉ－　ｎａｔｅｓ　ｓｐｌｅｎｉｃ　ｌ＋／ｃｄｌｌｂ＋ｍｙｅｌｏｉｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｉｔ。　ｍｏｔ－－ｂｅａｒｉｎｇ　ａｎｉｉｎａｌ８　ａｎｄ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　ａｎｆｉｔｕｍｏｒ　ｉｌＩｌｉｎｕｎｅ　ａｃｆｉｖｉｔｙ￣．　Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００５，１　１（１８）：６７１３－－６７２１．　５　Ｍｏｎｕ　Ｎ．Ｆｒｅｙ　ＡＢ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｘｉｍａｌ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｉｇｎａｌ－　ｉｎｇ　ａｎｄ　ｌｙｒｉｃ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ＣＤ８＋ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　Ｔ　ｃｅ１ｌｓⅡ】．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００７，６７（２３）：１１４４７－－１１４５４．　６　Ｂｕｎｔ　ＳＫ，ＹａｎｇＬ，ＳｉｈａＰ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｄｕｃｅｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｔｕｍｏｒ　ｄｅｌａｙｓ　ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｌｉｌｌｔｉｔｓ　ｔｕｍｏｒ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［１］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００７，　６７（２０）：１００１９－１００２６．　７　Ｂｕｎｔ　ＳＫ，Ｓｉｎｈａ　Ｐ，Ｃｌｅｍｅｎｔｓ　Ｖｋ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌ￣ｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｍｙ－　ｅｌｏｉｄ－－－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｔｈａｔ　ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ　ｔｕｌｌｉｏｒ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［１］．Ｊ　ｈｎｍｕｎｏｌ，２００６，１７６（１）：２８４．＿２９Ｏ．　８　Ｂｕｎｔ　ＳＫ，Ｇｌｅｍｅｎｔｓ　ＶＫ，Ｈａｎｓｏｎ　ＥＭ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌａｍｍａｄｏｎ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｃｅｌｌ　ｃｒｏｓｓｔａｌｋ　ｂｙ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｔｈｒｏｕｇｈ　Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　４１１］．Ｊ　Ｌｅｕｋ　Ｂｉｏ１．２００９．８５：ｌ一９．　９　Ｎｅｆｅｄｏｖａ　Ｙ，Ｆｉｓｈｍａｎ　Ｍ，Ｓｈｅｅｒｍａｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｌｌ－ｔｒａｍ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００７，６７（２２）：１１０２１－１１０２８．　１０　Ｖａｌｅｎｔｉ　Ｒ，Ｈｕｂｅｒ　Ｖ，Ｉｅｒｏ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｔｕｍｏｒ－－ｒｅｌｅａｓｅｄ　ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｄｅｓ　ａｓ　ｖｅｈｉｄｅｓ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ￣．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００７，６７（７）：　２９１２－－２９１５．　（２００９一ｌ１—１７收稿）　（２Ｏ１０－－Ｏｌ—ｌ２５修回）　（邢颖校对）

熊果酸抗肿瘤对小鼠肿瘤生长和肺转移作用摘要：目的：探讨熊果酸抗肿瘤对小鼠肿瘤生长和肺转移的作用。

方法：建立60只荷H22肝癌小鼠模型，并将60只实验小鼠平均分为试验1组、试验2组，给予试验1组小鼠熊果酸灌胃，给予试验2组小鼠环磷酰胺灌胃，灌药周期均为两周，末次灌药24小时后，将两种试验小鼠处死，称量小鼠肿瘤病灶质量，对小鼠肿瘤病灶进行病理学检查。

结果：经称量得出试验1组小鼠肿瘤质量明显轻于试验2组小鼠（P<0.05），病学检查结果显示试验1组小鼠的肿瘤细胞数量明显少于试验2组小鼠（P<0.05），试验1组小鼠的肿瘤肺转移发生率为10.0%，低于试验2组小鼠的30.0%。

结论：熊果酸能够抑制荷H22肝癌小鼠肿瘤生长和转移。

关键词：熊果酸；荷H22肝癌小鼠；肿瘤生长；肺转移；作用肝癌是我国临床十分常见的一种恶性肿瘤疾病，具有治疗难度大、病死率高等临床特点，严重威胁患者生命健康[1]。

现阶段手术联合术后辅助放化疗是我国治疗肝癌患者的常用方法，但较长一段时间的临床应用发现，放疗和化疗在杀死肿瘤细胞的同时，也对机体正常细胞造成了不同程度的损害。

熊果酸是一种自植物中提取出来的五环三萜类化合物，近年来大量临床研究报道该种化合物具有良好的抗癌功效，且不良反应少[2]。

为进一步明确该种化合物在恶性肿瘤疾病治疗中的应用价值，我院开展了动物实验研究，现将研究过程及结果做出以下整理汇报。

1资料与方法1.1一般资料实验动物：60只SPF级雄性昆明小鼠，体质量20～25g，周龄6～8周。

1.2研究方法将生长良好的H22肝癌小鼠在无菌条件下解剖，吸取小鼠腹水，并在腹水中加入适量生理盐水进行稀释，调整成每毫升有2x107肿瘤细胞的混悬液，染色后检查存活肿瘤细胞数，确保存活细胞率大于99%。

建立荷H22肝癌小鼠模型，具体建立方法为在每只实验小鼠的腋窝下注射0.2ml肿瘤细胞混悬液。

培养一周后，将60只实验小鼠随机分为试验1组和试验2组，给予试验1组小鼠熊果酸（白色粉末；纯度98%，溶剂：花生油）灌胃，用量为150mg （kg•d），给予试验2组小鼠环磷酰胺（国药准字H20084188；生产单位：浙江海正药业股份有限公司）灌胃，用量为25mg（kg•d）。