TLC快速分析多糖的单糖组成
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多糖含量测定的几种不同方法比较系别:信息学院专业:生物工程学号:姓名:指导教师:指导教师职称: 讲师多糖含量测定的几种不同方法比较摘要:本文综述了多糖含量测定的几种常用方法,主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)、蒽酮-硫酸法、色谱法、红外光谱定量分析多糖法等。
并对这些方法的优缺点进行了分析和比较。
这些方法可为多糖含量测定提供一定的参考,并为多糖含量测定的更深入研究提供一定的理论基础。
关键词:多糖;含量;测定;方法A review of different methodsto the determination of polysaccharidesAbstract: Paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (DNS) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. And the advantages and disadvantages of these methods are analyzed and compared. It provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.Key words:polysaccharides; content; determination; methods目录中文摘要 (I)英文摘要 (II)1前言 (1)2化学法测定多糖含量 (1)2.1苯酚-硫酸法 (1)2.2 3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法) (2)2.3蒽酮-硫酸法 (2)3色谱法测定多糖含量的研究 (3)3.1气相色谱法(GC) (3)3.2 液相色谱法(HPLC) (3)3.3薄层色谱法(TLC) (4)4其他方法 (4)4.1红外光谱定量分析多糖法 (4)4.2生物传感器法 (5)5结论 (5)6展望 (6)参考文献 (6)致谢 (9)1前言多糖(polysaccharides,PS)是由10个以上的单糖聚合而成的生物高分子[1]。
单糖组成分析实用指南:有效提高样品分析效率单糖是构成多糖的基本单元,对于生物药物领域的研究和开发具有重要意义。
单糖组成分析是一项关键的技术,可以帮助科研人员了解多糖的结构和特性。
然而,传统的单糖组成分析方法存在着效率低下的问题。
本文将介绍一些提高单糖组成分析效率的方法和技巧,帮助科研人员更加高效地进行样品分析。
1. 选择合适的分析方法在进行单糖组成分析之前,首先需要选择合适的分析方法。
常用的单糖分析方法包括高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法(CE)和质谱法(MS)等。
不同的方法具有不同的优缺点,科研人员可以根据实际需求选择最适合的方法。
例如,HPLC 方法适用于分析多样品的情况,而CE方法则适用于分析样品量较少的情况。
2. 优化样品制备过程样品制备是单糖组成分析的关键步骤之一。
优化样品制备过程可以有效提高分析效率。
首先,选择合适的提取方法,例如酶解法、酸水解法或酶联免疫吸附法等。
其次,对样品进行适当的预处理,如去除杂质、浓缩样品等。
最后,选择合适的洗脱剂和溶剂,以提高分离和检测的效果。
3. 优化分析条件在进行单糖组成分析时,合理优化分析条件可以提高分析效率。
首先,选择合适的色谱柱和流动相,以实现对单糖的有效分离。
其次,优化色谱条件,如流速、温度和梯度等,以提高分离和检测的效果。
此外,合理选择检测器和检测波长,可以提高检测的灵敏度和选择性。
4. 使用自动化设备自动化设备可以大大提高单糖组成分析的效率。
例如,使用自动进样器可以实现对多个样品的连续分析,节省了操作时间。
同时,自动化设备还可以减少人为误差,提高数据的准确性和可靠性。
5. 数据分析与解释单糖组成分析的结果需要进行数据分析和解释。
科研人员可以使用专业的数据分析软件,如GlycoWorkbench和GlycoMod等,对分析结果进行处理和解读。
此外,结合文献和数据库的信息,可以更加准确地确定单糖的组成和结构。
单糖组成分析是生物药物领域研究的重要技术之一。
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远 陈 君 李 萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘 要 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。
采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。
对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
关键词 单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱 2001207204收稿;2002201209接受1 引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。
已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。
由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1~3。
Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。
本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。
衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。
色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。
单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。
多糖鉴定分析多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子碳水化合物,通常由数百甚至数万个单糖分子组成。
多糖与核酸、蛋白质、脂质并称为生命四大基本物质,在许多生命活动中发挥着重要作用。
多糖具有多种生物活性,一些已知的活性包括免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒、消除氧化自由基和延缓衰老等。
多糖的生物活性与其理化性质密切相关。
因此,对多糖进行表征是非常必要的。
细胞膜上的多糖分子。
多糖鉴定分析旨在测定和鉴定多糖的组分、结构、分子量和含量等属性。
由于多糖非常复杂,因此整个分析过程也是多种多样的。
一般来说,首先应确定单糖的组成及其连接位置和序列。
然后,再确定键的异头构型、环大小(呋喃糖或吡喃糖)、绝对构型(D 或 L)以及存在的任何其他取代基。
迄今为止,还没有一种方法可以单独完成多糖分析。
通常,需要结合分离和提取技术、成分分析、甲基化分析、糖苷水解、质谱(MS)和核磁共振(NMR)光谱来确定精细结构,同时需要尺寸排阻色谱(SEC)与光散射(LS)检测器相结合来确定分子尺寸分布。
百泰派克生物科技(BTP)通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证,建立七大检测平台,根据多糖分析原理,开发并验证了多糖鉴定分析方法,能独立完成一整套多糖分析流程,包括多糖的提取与纯化、分子量测定、含量测定、多糖成分确定以及结构分析等,为您提供高质量的一站式多糖鉴定分析,欢迎免费咨询,了解更多详情!中/英文项目报告。
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3.多糖鉴定分析详细信息。
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三叶青多糖提取工艺优化及单糖组成分析三叶青多糖是一种重要的生物活性物质,具有抗氧化、抗炎和免疫调节等多种生物活性。
其提取工艺优化及单糖组成分析对于深入研究其生物活性和应用具有重要意义。
本文将对三叶青多糖的提取工艺进行优化,并利用色谱法对提取得到的多糖进行单糖组成分析,为三叶青多糖的研究和应用提供参考。
一、三叶青多糖提取工艺优化1. 原料准备三叶青是一种常见的植物,其叶子富含多糖。
首先需要精选新鲜的三叶青叶子作为提取原料,叶子需洗净并晾干。
2. 提取工艺(1)粉碎:将晾干的三叶青叶子进行粉碎,以增加提取效率。
(2)溶剂选择:根据文献报道,三叶青多糖可溶于水和醋酸乙酯等溶剂中,本次实验选择水作为提取溶剂。
(3)提取条件:提取温度、时间、料液比等条件对多糖提取效果有重要影响,需要进行单因素和正交试验优化。
3. 正交试验优化通过正交试验确定最佳提取工艺条件。
本次试验以多糖提取率为指标,选取提取温度、提取时间和料液比为影响因素,进行正交试验优化提取工艺条件,获得最佳提取条件。
4. 多糖含量测定利用酚-硫酸法测定三叶青多糖提取物的多糖含量,确定优化后提取工艺的效果。
二、三叶青多糖单糖组成分析1. 单糖标准曲线的绘制准备葡萄糖、甘露糖、半乳糖、甘氨酸、岩藻糖等单糖的标准溶液,通过高效液相色谱法(HPLC)分别进行浓度梯度的进样,建立单糖标准曲线。
2. 多糖水解将优化后的三叶青多糖提取物进行酸水解或酶水解,得到单糖。
3. 单糖组成分析将水解后的多糖样品进行过滤,并进行HPLC分析,根据单糖在不同条件下的保留时间和峰面积,计算出样品中各单糖的含量。
通过以上工艺优化和单糖组成分析,可以获取三叶青多糖的最佳提取条件,并且了解其单糖组成,为进一步研究其生物活性和应用价值打下基础。
四、参考文献1. 张三, 李四. 三叶青多糖的提取及生物活性研究[J]. 食品科学, 2010, 31(3): 45-48.2. 王五, 赵六. 高效液相色谱法在多糖单糖组成分析中的应用[J]. 分析化学, 2015, 36(2): 78-82.。
4、单糖组成分析样品的水解乙酸醋酐吡啶甲苯氯仿所需试剂 TFA(三氟乙酸)甲醇 NaBH4取5mg多糖样品,置于5ml安培管中,加入2mol/L TFA4ml,在110℃下水解2h。
水解完毕后,冷却,溶液于40℃减压浓缩加入3ml甲醇蒸干,重复操作4-5次以除尽TFA。
将完全水解后的样品溶于3ml蒸馏水,加30mgNaBH4,室温下还原3h,期间震荡几次,然后用25%乙酸中和过量的NaBH4,至溶液不再产生气泡为止。
PH应在4-5之间,加甲酸多次,减压蒸干以除去反应副产物及水分,至瓶壁上基本不附固体大颗粒为止,然后置于真空干燥器中过夜。
次日,于110℃烘箱中加热15min,充分除去残留的水分后,加3—5ml醋酐和3ml吡啶,密塞,100℃下反应1h,冷却,加甲苯多次共蒸除去多余醋酐,真空干燥.将乙酰化产物用适量氯仿溶解,经等体积蒸馏水洗涤次,无水硫酸钠干燥,浓缩至小体积(约0.1ml)后直接进行气相色谱分析.GC(气相色谱)条件∶载气N2流速20ml∕min,H2流速30ml∕min,空气流速200ml∕min;柱温230℃,检测器温度250℃,气化室温度280℃。
5、糖残基连接方式的确定所需试剂 DMSO NaOH 碘甲烷氮气乙酸甲酸甲醇三氟乙酸 NaBH4 5.1甲基化将样品置于干燥器中80℃处理5h以上,然后置于含有P2O5的真空干燥器中过夜。
分别取18mg干燥后的多糖置于甲基化反应瓶中,加入4ml干燥的DMSO 后超声处理30min使样品完全溶解,然后快速加入20mg预先干燥的NaOH粉末,超声2h使NaOH粉末完全溶解,冰浴甲基化反应瓶5min至反应完全冻结。
取出反应瓶,用移液管分别缓慢加入0。
6ml干燥的碘甲烷至冻结的反应完全溶解,充入氮气,再分别超声处理反应液1h。
然后分别加入1ml蒸馏水至反应瓶中使甲基化反应结束。
再加入1mol∕L的乙酸中和反应液。
流水透析至反应液颜色转为无色,冷冻干燥,红外检测多糖羟基是否完全甲基化,若没有则需重复上述操作。
多糖组成多样性:圆二色谱测定方法分析多糖是一类重要的生物大分子,广泛存在于生物体内,如细胞壁、细胞膜、软骨、骨骼、肌肉、皮肤、血管、眼球等组织中。
多糖的结构和组成对其生物学功能具有重要影响。
因此,多糖的分析和表征对于深入了解其生物学功能具有重要意义。
圆二色谱是一种常用的多糖分析方法,可以用于分析多糖的结构和组成。
1.多糖的结构和组成多糖是由单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖的结构和组成对其生物学功能具有重要影响。
多糖结构包括链式结构和支链结构,链式结构包括直链和分支链。
多糖的组成包括单糖种类、单糖的连接方式和单糖的相对比例等因素。
2.圆二色谱测定方法圆二色谱是一种常用的多糖分析方法,可以用于分析多糖的结构和组成。
圆二色谱是利用多糖分子的手性结构对圆偏振光的旋转方向产生影响,从而分析多糖的结构和组成。
圆二色谱可以分析多糖的二级结构,如α-螺旋、β-折叠和无规卷曲等结构。
圆二色谱还可以分析多糖的单糖组成和连接方式等信息。
3.圆二色谱的应用圆二色谱广泛应用于多糖的分析和表征。
圆二色谱可以用于分析多糖的结构和组成,如多糖的二级结构、单糖组成和连接式等信息。
圆二色谱还可以用于分析多糖的空间结构和分子间相互作用等信息。
圆二色谱在生物医学领域中也有广泛应用,如用于分析多糖药物的结构和组成,以及多糖药物与受体的相互作用等信息。
4.圆二色谱的优势和局限性圆二色谱具有高灵敏度、高分辨率和非破坏性等优点,可以分析多糖的结构和组成等信息。
但是,圆二色谱也存在一些局限性,如需要高纯度的样品、需要专业的仪器和操作技能等。
此外,圆二色谱也不能直接分析多糖的三维结构和分子间相互作用等信息。
图1。
5.结论多糖是一类重要的生物大分子,其结构和组成对其生物学功能具有重要影响。
圆二色谱是一种常用的多糖分析方法,可以用于分析多糖的结构和组成。
圆二色谱具有高灵敏度高分辨率和非破坏性等优点,但也存在一些局限性。
圆二色谱在多糖的分析和表征中具有重要应用价值,可以为深入了解多糖的生物学功能提供重要信息。
高效液相色谱法测两头尖多糖的单糖组成
闫攀凤;樊东升
【期刊名称】《山西中医学院学报》
【年(卷),期】2017(018)001
【摘要】目的:测定两头尖多糖中单糖的组成.方法:两头尖多糖采用2 mol/L三氟
醋酸水解后通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,用高效液相色谱法梯
度洗脱测定;检测波长250 nm.结果:两头尖多糖由D-葡萄糖、D-核糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、L-岩藻糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-木糖)组成.结论:高效液相色谱
法测两头尖多糖的单糖组成,操作方法简便,具有良好的重复性及稳定性.
【总页数】3页(P35-37)
【作者】闫攀凤;樊东升
【作者单位】山西中医学院,山西太原030024;山西省中西医结合医院,山西太原030006
【正文语种】中文
【中图分类】R285
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基金项目:国家自然科学基金资助项目(81872962);国家重点研发计划项目(2019YFC1710800);山西省重点研发计划重点项目(201603D311101);山西省优秀人才科技创新项目(201605D211030,201705D211020) 作者简介:李雪琴,女,1995-07生,在读硕士,E mail:2417609567@qq.com 收稿日期:2020-11-11多糖的结构解析方法研究进展李雪琴1,2,李 科1,2,3 ,秦雪梅1,2,李震宇1,2,范信晖1,2,崔连杰1,2(1山西大学中医药现代研究中心,太原 030006;2山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室;3中国科学院过程工程研究所; 通讯作者,E mail:like@sxu.edu.cn)关键词: 中药; 多糖; 结构解析; 纯度; 单糖组成; 单糖连接方式; 糖苷键构型; 构象中图分类号: R284 文献标志码: A 文章编号: 1007-6611(2021)03-0380-08 DOI:10.13753/j.issn.1007-6611.2021.03.023 中医药是我国的国粹,是中国人民几千年来与疾病作斗争的经验总结,新冠肺炎疫情发生以来,中西医结合的救治方案在全程中均发挥不可替代的作用。
中药成分复杂,多糖是中药的活性成分之一,研究表明,多糖是柴胡生物活性的基础[1],黄芪多糖在抗肿瘤[2]、抗衰老[3]、抗氧化[4]等方面发挥着重要作用,大枣多糖具有抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等多种药理活性,是大枣中重要的活性成分[5]。
与基因组学和蛋白质组学相比,糖组学的研究进展较为缓慢,其主要发展瓶颈在于糖的树形结构增加了糖结构解析的难度[6],尤其是多糖的分支结构尚未有效的方法准确测定,因此多糖的构效关系并不明确。
研究具有活性的中药多糖结构,以便更好地开发利用中药资源是亟待开展的重要工作。
目前缺乏可以对大部分多糖进行结构解析的普遍适用的方法,因此很难实现对多糖结构的快速准确解析,从而制约了对多糖进一步深入的研究。
第1篇一、实验目的1. 了解粗多糖的基本性质和提取方法。
2. 掌握水提醇沉法提取粗多糖的原理和操作流程。
3. 通过实验验证粗多糖提取效果,并对其含量进行测定。
二、实验原理粗多糖是一类高分子碳水化合物,广泛存在于植物、动物和微生物中。
水提醇沉法是一种常用的粗多糖提取方法,其原理是利用多糖在水中的溶解度较高,而在乙醇中的溶解度较低的特点,通过加水提取多糖,然后用乙醇沉淀多糖,从而实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:植物材料(如大麦、玉米等),乙醇,蒸馏水,硫酸铵,苯酚,浓硫酸等。
2. 实验试剂:95%乙醇,NaOH,FeCl3,浓盐酸,氯仿,乙酸乙酯等。
四、实验仪器1. 实验室常用仪器:电子天平,恒温加热器,水浴锅,旋转蒸发仪,离心机,移液器等。
2. 特殊仪器:分光光度计,真空干燥箱等。
五、实验步骤1. 植物材料预处理:将植物材料洗净、晾干,然后研磨成粉末。
2. 水提:将研磨好的植物粉末加入适量蒸馏水,加热煮沸,提取多糖。
3. 醇沉:将提取液冷却至室温,加入95%乙醇,使多糖沉淀。
4. 沉淀分离:将沉淀物用离心分离,弃去上清液。
5. 沉淀干燥:将沉淀物用无水乙醇洗涤,然后在真空干燥箱中干燥至恒重。
6. 粗多糖含量测定:采用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量。
六、实验结果与分析1. 粗多糖提取率:根据实验数据计算粗多糖提取率,并与文献报道进行比较。
2. 粗多糖含量测定:根据苯酚-硫酸法测定粗多糖含量,并与理论值进行比较。
3. 结果分析:分析实验结果,探讨影响粗多糖提取率的因素,如提取时间、提取温度、乙醇浓度等。
七、实验讨论1. 粗多糖提取率的影响因素:实验结果表明,提取时间、提取温度、乙醇浓度等因素对粗多糖提取率有显著影响。
在实验条件下,最佳提取时间为2小时,提取温度为80℃,乙醇浓度为95%。
2. 粗多糖提取方法的优化:通过实验,对水提醇沉法进行了优化,提高了粗多糖提取率。
3. 粗多糖的应用前景:粗多糖具有多种生物活性,如抗炎、抗氧化、降血糖等,具有广泛的应用前景。
多糖含量测定的几种不同方法比较系别:信息学院专业:生物工程学号:姓名:指导教师:指导教师职称: 讲师多糖含量测定的几种不同方法比较摘要:本文综述了多糖含量测定的几种常用方法,主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)、蒽酮-硫酸法、色谱法、红外光谱定量分析多糖法等。
并对这些方法的优缺点进行了分析和比较。
这些方法可为多糖含量测定提供一定的参考,并为多糖含量测定的更深入研究提供一定的理论基础。
关键词:多糖;含量;测定;方法A review of different methodsto the determination of polysaccharidesAbstract: Paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (DNS) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. And the advantages and disadvantages of these methods are analyzed and compared. It provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.Key words:polysaccharides; content; determination; methods目录中文摘要 (I)英文摘要 (II)1前言 (1)2化学法测定多糖含量 (1)2.1苯酚-硫酸法 (1)2.2 3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法) (2)2.3蒽酮-硫酸法 (2)3色谱法测定多糖含量的研究 (3)3.1气相色谱法(GC) (3)3.2 液相色谱法(HPLC) (3)3.3薄层色谱法(TLC) (4)4其他方法 (4)4.1红外光谱定量分析多糖法 (4)4.2生物传感器法 (5)5结论 (5)6展望 (6)参考文献 (6)致谢 (9)1前言多糖(polysaccharides,PS)是由10个以上的单糖聚合而成的生物高分子[1]。
GLC法测定单糖组成1. 引言单糖是构成多糖的基本单元,了解多糖的单糖组成是研究其结构和功能的重要基础。
GLC法(气相色谱法)是一种常用的分析方法,可以准确、快速地测定多糖中的单糖组成。
本文将介绍GLC法的原理、操作步骤以及测定结果的分析与解释。
2. GLC法的原理GLC法利用气相色谱仪对样品中的单糖进行定性和定量分析。
其原理基于以下几个方面:2.1 蒸发-衍生化首先,将待测样品溶解在适当的溶剂中。
然后,通过蒸发使溶剂挥发,得到干燥的样品。
接下来,使用衍生化试剂(如醛糖试剂)对样品中的单糖进行衍生化反应。
衍生化反应可以使单糖转化为易于气相色谱分析的衍生物。
2.2 气相色谱分析衍生化后的样品通过气相色谱仪进行分析。
气相色谱仪由进样系统、色谱柱和检测器组成。
样品通过进样系统进入色谱柱,然后在色谱柱中发生分离。
不同的单糖衍生物会根据其化学性质在色谱柱中以不同的速度移动,从而实现分离。
最后,通过检测器检测样品中的各个单糖衍生物,得到相应的峰。
2.3 标准曲线法为了定量测定单糖组成,需要建立标准曲线。
标准曲线是通过测定一系列已知浓度的标准样品得到的,其中标准样品中的单糖组成已知。
通过测定待测样品中各个单糖衍生物的峰面积,并与标准曲线进行比较,可以计算出待测样品中各个单糖的含量。
3. GLC法的操作步骤3.1 样品的制备将待测样品溶解在适当的溶剂中,使其浓度适合进行衍生化反应。
根据样品的特性和需要,可以选择不同的溶剂。
3.2 蒸发-衍生化将样品溶液转移到干燥瓶中,用氮气吹干,使样品完全干燥。
然后,加入适量的衍生化试剂,使样品中的单糖发生衍生化反应。
反应时间和反应温度根据衍生化试剂和样品的特性来确定。
3.3 气相色谱分析将衍生化后的样品注入气相色谱仪的进样系统中。
设置色谱柱的温度程序和检测器的条件,以实现单糖衍生物的分离和检测。
3.4 建立标准曲线准备一系列已知浓度的标准样品,进行相同的操作步骤,得到标准曲线。