鞭毛染色液(银染法)

细菌鞭毛染色及活菌运动观察一、实验目的1、学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）2、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征二、实验简介鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。

细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。

压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。

细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。

但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。

于是，便产生了鞭毛染色法。

1958年Rhodes根据Fontana 的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。

试剂分为媒染剂和银染剂。

但是试剂的稳定性低，容易变质。

2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。

该法将媒染剂分为A、B两种。

A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。

这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。

通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一，根据鞭毛的这些特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。

有了这种简易的鞭毛染色方法，对于我们的细菌研究来说就更加方便容易了。

三、实验原理细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。

Ａｂ ｔａ ｔ Ｔ ｉ ｓｕ ｙｉ ｔ ｐｉ ｅｔｅｔ ｄｔ ｎ ｌ ｉ ｅＱ ｅｔ ｔｉｉｇｍｅｈ ｄ ｙｕ ｉｇｔｎ ｉ ｎ ｅ １ ｗ ｔ ｉｈ ｒ ｓｒ ｃ ｈｓ ｔｄ ｓ ｏｏ ｔ ｈ ｒ ｉ ｏ ａ ｌ ｒ ｕ ｓ ｓａｎｎ ｔｏ ．Ｂ ｓｎ ａ ｎｎａ ｄＦ Ｃ３ ｉ ｈｇ ｅ ｍｚ ａ ｉ Ｓｖ ｈ ｍａｓｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｓｍｏｄ ｎ ｔｅｅｓ ｌｔ ｎ ｒ ｅ ａａｅｙｓ ｒｄ ｓ ｏ ｃ ｎｒｔ ｓａ ｒａ ｔ（ｈ ｓ ｏｕｉ ｓｗｅｅｓｐ ｒｔｌ ｔ ｅ ），ａｓ ｂｅａ ｄ ｃｅｒｓａｎｎ ｅｕｔ ｆ ａ ｉｕ ｏ ｏ ｏ ｔ ｌ ｎ ｌａ ｔｉｉｇｒｓｌ ｏ ｃ ｌｓ ａ Ｂ ｌ
色 时间太长 ， 且效果 不够稳 定 。不 少 生 物 、 医学 专 业 的教 师及科研 人员 对鞭毛 的染 色方 法 进行 了改
１ 材料 与方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 菌种 ． ． １ １２ 培 养基 ．．
枯 草芽 胞杆 菌 （ 实验 室保存 ） 。 牛 肉膏蛋 白胨 半 固体培 养基 ： 牛
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微 生物 学杂 志 ２０ 年 ７ ０７ 月第 ２ 卷第 ４ ７ 期 Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ ＩＲ ＢＯ Ｏ ＹＪｌ２０ ｏ ２ Ｎ ． Ｏ Ｒ Ａ ＦＭ Ｃ Ｏ ＩＬ Ｇ ｕ ７ １ ７ ｏ ｙ０ Ｖ ． ４
优 化 的细 菌鞭 毛 染 色技 术
，
关键 词 细 茵鞭 毛 ； 色 ； 染剂 ； 性 染料 染 媒 碱
中 图分 类号Ｑ３ ９ 文献标识码 Ｂ 文章 编 号 １０ ７ ２ （０ ７ Ｏ ０ ９ ０ ０ ５— ０ １ ２ ０ ） ４— ０ ４— ３
Ａｎ ｉ ｐｒ ｖ ｄ ｓ ａ ｎｉ ｅ ｈｏ ｏ ａ ｔ ｒａ ａ ｅ ｕｍ ｍ ｏ ｅ ｔ ｉ ｎｇ ｍ ｔ ｄ ｆ ｒ ｂ ｃ ｅ ｉ ｌｆ ｇ ｌ ｌ

细菌鞭毛染色及活菌运动性观察【摘要】本实验以铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌为实验菌种，先使用压滴法制片，之后用光学显微镜的油镜观察细菌的活体运动。

然后，使用鞭毛染色法（用硝酸银染液A液和B液进行染色）对其染色，之后用光学显微镜的油镜观察细菌鞭毛的形态；虽然最后并没有在显微镜下观察到染色后的鞭毛，但在实验中已大致掌握相关实验操作。

【关键词】铜绿假单胞菌；枯草芽孢杆菌；鞭毛染色法；压滴法【前言】鞭毛是生长在某些细菌体表的长丝状，波曲型的蛋白质附属物，具有运动功能。

鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。

鞭毛直径一般为10~20nm，只有用电子显微镜才能观察到。

但可以使用鞭毛染色法，使之能用普通光学显微镜观察到。

因此在本实验中，要观察细菌鞭毛形态，就要使用鞭毛染色法。

本实验使用染液的是硝酸银染液A液和B液。

而观察细菌的运动性时要使用压滴法。

本实验选用的的菌种是具周生鞭毛的枯草芽孢杆菌和具端生鞭毛的的铜绿假单胞菌，均可使用两种方法进行观察。

本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法，然后是对实验的结果与分析进行描述，最后是总结性的小结部分。

1.实验目的1.1学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征1.2巩固显微镜操作技术及无菌操作技术1.3学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）2实验原理2．1细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。

鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。

鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。

鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。

若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。

首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson 氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。

细菌鞭毛染色及活细菌运动性观察摘要本实验采用硝酸银染色法对苏云金芽孢杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在油镜下观察其菌体形态和鞭毛的形态、数量、着生位置。

并采用压滴法，用美蓝染色后观察细菌的运动性。

关键词鞭毛、硝酸银染色法、压滴法、运动性前言鞭毛是某些细菌表面细长弯曲的丝状物，是细菌的运动器官和特殊构造。

细菌鞭毛的长短、数量和生长位置是鉴别菌种的一个重要的形态学指标，也是细菌重要的抗原物质与致病因素。

根据鞭毛的特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。

细菌的鞭毛非常纤细，直径一般在20nm左右，采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。

鞭毛染色法的基本原理是在染色前先经媒染剂处理，媒染剂吸附在鞭毛上，使鞭毛加粗，然后再进行染色，便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。

常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。

鞭毛染色一直被提倡作为革兰阴性非发菌的鉴别手段之一，先后出现了Leifsen法、镀银法、Ryu氏法等多种鞭毛染色的方法。

鞭毛细长透明，其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外，所以不易观察。

如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛，同时可以观察细菌的运动性特征。

1 材料与方法1.1材料1.1.1菌种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）铜绿假单细胞菌（P.Aeruginosa）1.1.2染色液和试剂香柏油，二甲苯，硝酸银鞭毛染液，0.01%美蓝水溶液等。

1.1.3仪器及其他普通光学显微镜，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管，镊子，滴管，盖玻片，吸水纸等。

1.2方法及步骤1.2.1硝酸银染色法1.2.1.1清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片，置洗含衣粉过的水中煮沸20min。

取出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在火焰上烧去酒精。