酸沉淀法提取黄芩苷

收稿日期 : 2008-10 -17
作者简介 : 田帅华 ( 1984- ) , 男 , 硕士研究生 , 研究方向 : 中药质量评价与新药开发。 * 通讯作者 : 李 钦 ( 1965- ), 男 , 教授 , 博士 , 硕士生导师 , 研究方向 : 中药质量评价。 T e:l ( 0378 ) 3880589, E-m ai: l liq in@ henu. edu . cn
F
图 1 不同提取方法灯盏细辛 HPLC 色谱图
A. 对照品溶液 B. 浸渍提取样品 C. 超声提取样品 F. 回流提取样品 D. 组织破碎提取样品 E. 碱水提取样品
表 1
不同方法提取 野黄芩苷的转移率 ( n = 3)
提取方法 浸泡提取法 超声提取法 组织破碎提取法 碱水提取法 回流提取法 转移率 /% 21. 46 12. 26 24. 97 7. 59 65. 02
水平 乙醇浓 度 A /% 45 60 75
因素水平
溶剂量 B /倍 6 8 10 提取时间 C /m in 30 60 90 提取次 数 D /次 1 2 3
B 1 2 3
表 3
试验号 C 1 2 3 4 5 6 7 D 8 9 A 1 1 1 2 2 2 3 3 3 36. 77 35. 56 K1 K2 K3 R E 42. 03 12. 26 11. 85 14. 01 2. 16
关键词 : 灯盏细辛 ; 野黄芩苷 ; 提取 ; 纯 化 中图分类号 : R 284. 1 文献标识码 : B 文章编号 : 1001 -1528( 2010) 01-0124-04 样 , 按上述色谱条件测定。以进样量 X ( g ) 为横坐标 , 峰面 积值 Y 为纵坐 标 , 绘制 工作 曲 线 , 得回 归 方程 为 Y = 4 271 661 611. 66 X - 193 253 . 90, r = 0 . 999 9 , 线 性范 围 0. 436 ~ 6. 54 g 。 2. 1. 4 精密度试验 精密吸取对照品 溶液 10 L, 重 复进 样 6 次 , 测定 野黄 芩苷的峰面积 , 计算 RSD 为 0. 27% 。 2. 1. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液 , 分别在 0、 1、 2、 4 、6 、8 h 进样 10 测定野黄芩苷的峰面积 , 计算 R SD 为 0 . 38 %。 2. 1. 6 重复性试验 同一批号灯盏细辛药材 6 份 , 按 2. 2. 5 项下方 法制备供 试品溶液 , 测定野黄芩 苷的峰面积 , 计算 R SD 为 2 . 21% 。 2. 1. 7 回收率试验 精密称取同一批号灯盏 细辛 药材 , 共 6 份 , 精密 加入对 照品适量 , 按 2. 2. 5 项下方法平行制备 , 测定 , 计算 平均回收 率为 99. 72% , RSD = 1. 46 %。 2. 2 供试液制备 2. 2. 1 浸渍法 取灯盏细辛 30 g , 精密 称定 , 加 60 % 乙醇 1 000 mL浸泡 10 d, 滤过 , 滤液浓缩至无醇味 , 醋酸乙 酯脱脂 , 水相浓 缩 , 烘 干 , 精密称取相 当于 1 g 原药 材的 浸膏 , 用甲 醇溶 解并 转移 至 50 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即得。 2. 2. 2 超声提取法 取灯盏细辛 30 g , 精密称定 , 于烧杯中 , 加入 60% 乙 醇 1 4. 6 mm, 5 m ), 85 000 mL, 超声处理 ( 功率 225W, 频率 45 kH z) 30 m in, 滤过 , 滤液浓缩至无醇味 , 醋酸乙 酯脱脂 , 水 相浓缩 , 烘 干 , 精密称 取相当于 1 g 原药材的浸膏 , 用甲 醇溶解并转 移至 50 mL 量 瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即得。 2. 2. 3 组织破碎提取法 取灯盏细辛 30 g , 精密称定 , 加 60% 乙醇 1 000 mL, 用闪 式提取器提取 3 次 , 每次 1 m in, 滤过 , 滤液浓缩至无醇 味 , 醋 酸乙酯脱脂 , 水相浓缩 , 烘干 , 精 密称取相当 于 1 g原 药材的 浸膏 , 用甲醇溶解并转移至 50 mL 量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即 g取率最高的是 回流提取法 , 故选择回流提 取法。 2. 5 回流提取工艺参数优化 2. 5. 1 提取工艺的正交试验考察

标 准 曲线 的绘 制方 法 。精 确称 取 黄芩 苷 标 准 品 ５ ０毫克 ， 用５ ０ ％的 乙醇 溶 解 ， 并定容于 １ ０ ０毫 升容 量 瓶， 配制 ０ ． ５毫 克 ／ 毫升黄芩苷标液 ， 分 别 吸 取标 液
０ ． ５ 、 １ ． ０ 、 １ ． ５ 、 ２ ． ０ 、 ２ ． ５ 、 ３ ， ０ 、 ３ ． ５ 、 ４ ． ０毫 升 于 １ ０ ０毫 升 容
样 品含 量 的测定 。用 医用 电子天 平精 确 称取 ５ ０
毫克黄芩苷粗品 ， 用５ ０ ％的乙醇溶解 ， 并定容于 １ ０ ０ 毫升容量瓶 中。用干燥 的滤纸过滤 ， 弃去初滤液 ， 再
置于 １ ０ ０毫升 容量瓶 中 ， 再用 ５ ０ ％的 乙醇定 容 。另 取 ５ ０ ％的 乙醇作 为空 白对 照 ， 于２ ７ ８ 纳 米波 长 处测 吸 光 度， 由方程 式计 算 出对 应 样 品浓度 。 不 同 的提取 方 法对 董
综 合 各方 面 因素 ， 在 保证 提 取 效率 的同 时 ， 避免 黄 芩 苷损失最 少情 况下 ， 以７ ５ ℃保 温较适 宜 。
不同 ｐ Ｈ值对黄芩苷水溶液稳定性的影 响。 吸取 黄 芩苷 水溶液 ，用氢氧 化钠 溶液 和盐 酸调 节制 成 Ｄ Ｈ
值为 ２ 、 ３ 、 ４ 、 ５ 、 ６的溶液 。 以上溶 液至 ｌ Ｏ ０ ｃ Ｉ ＝ 加热 １ 小 时 ，然 后 冷 却 ，测 得 黄 芩 苷 得 率 分 别 为 １ ５ ． ５ ４ ％、
哼 研 究 与 综 述
黄 芩 中 黄 芩 苷 提 取 工 艺 影 响 因 素 的 研 究
张 伍林 孟 繁娇 高丽 红 ２
（ １ ． 大庆志 飞 生物化 工有 限公 司 黑龙 江 大庆 １ ６ ３ ４ １ １ ， ２ ． 大庆华科 股份 有 限公 司 黑龙 江 大庆 １ ６ ３ ３ １ ６） 黄芩 为 唇形 科 植物 ， 具 有 凉血 安 胎 ， 清 热燥 湿 以 及解 毒 的功效 ， 在 中 国医药 当 中常 常 以根 人 药 。黄芩 苷 是从 黄芩 根 中提 取 分 离 出来 的 ， 具有抗炎 、 利尿、

１．２ 溶 剂 提取法 本 法是 根据 黄芩 苷 的溶 解性 ，选 用 合适的溶剂和方法提取。林秀英等 对黄芩苷的溶 出 效率 用薄 层扫 描法 考 察 溶 剂 发 现 ：溶 出效 率 与溶 剂 的 极性之 间 有 明显的关 联 ，极 性 大 的溶 剂 溶 出效率 高 ，极
黄芩 苷 的提 取 方 法 主 要 有 沉 淀 法 、溶 剂 法 、超 声 法 、微 波 法 、超 临界 流体 萃取 法 、超 滤 法等 。 １．１ 沉淀 提取 法 本法 依据 黄芩 苷 溶 于水 、化 学结 构 中有 葡 糖醛 酸 、显 弱酸 性 、在 碱 性 溶 液 中溶 解 、在 酸性 溶液 中析 出的特 性 设 计 。其 一 般 流 程 为 ：黄芩 药 材粗 粉水 煎 煮 （２次 ）一 酸 调 ｐＨ １～２（７０～８０￣Ｃ保 温 ）一 静
黄芩 药材来源 为唇 形科植物 黄芩 Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａ— 置 １２～２４ ｈ。使 用 酸碱 溶 剂 时 ，要 注意 酸性 或 碱 性 的
ｉｃａｌｅｎｓｉｓ Ｇｅｏｒｇｉａ野生 品种 的 干 燥 根 ，对 其 质 量 评 价 通 强 度 、与黄芩 苷接 触 的时 间 ，避免 黄芩 苷 水解 导 致收 率
Ａ ｂｓｔｒａｃｔ Ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍ ｅｄｉｃｉｎａｌ ｍ ａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ． Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｓｕｍｍａｒｉｅｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｅ— ｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｂａｉｅａｌｉｎ ｆｒｏｍ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ Ｂａｉｅａｌｅｎｓｉｓ，ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ＳＯ ａｓ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｄａｔａ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｑｕａｌｉｔｙ ｓｔａｎｄａｒｄ ｆ ｏ ｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂａｉｅａｌｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ Ｗ ｏｒｄｓ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ；Ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ；Ｂａｉｃａｌｉｎ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｕｒｖｅｙ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１６７３—７２０２．２０１３．０４．０４２

一、实验目的1. 掌握黄芩药材的性状特征。

2. 熟悉黄芩苷的提取、鉴定方法。

3. 提高对中药药材鉴别实验的操作技能。

二、实验原理黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）为唇形科植物，其干燥根茎具有清热燥湿、泻火解毒、凉血止血等功效。

黄芩苷（Baicalin）是黄芩的主要有效成分，具有显著的抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性。

本实验通过观察黄芩药材的性状特征，提取并鉴定黄芩苷，以鉴别黄芩的真伪。

三、实验材料与仪器材料：1. 黄芩药材（正品、伪品）2. 甲醇3. 乙醇4. 硫酸5. 水合氯醛6. 氯仿7. 碘化铋钾溶液8. 香草醛-硫酸溶液仪器：1. 超声波清洗器2. 热水浴锅3. 蒸发皿4. 滴定管5. 移液管6. 烧杯7. 试管8. 漏斗9. 滤纸10. 显微镜四、实验方法与步骤1. 性状鉴别：- 观察正品和伪品黄芩药材的形状、颜色、断面等特征。

- 正品黄芩药材呈长圆锥形，表面棕黄色或棕褐色，有纵皱纹，断面呈黄色，味苦。

- 伪品黄芩药材表面颜色较浅，无纵皱纹，断面呈白色或淡黄色，味微苦。

2. 黄芩苷提取：- 称取黄芩药材粉末2.0g，加入50ml甲醇，超声提取30分钟。

- 提取液过滤，滤液蒸发至干，残渣用少量甲醇溶解。

- 取上清液，加入等体积的氯仿，振荡、静置，分取氯仿层。

- 氯仿层蒸干，残渣用少量甲醇溶解，待鉴定。

3. 黄芩苷鉴定：- 取少量甲醇溶液，加入碘化铋钾溶液，观察是否产生橘红色沉淀。

- 取少量甲醇溶液，加入香草醛-硫酸溶液，观察是否产生蓝紫色沉淀。

- 取少量甲醇溶液，加入硫酸，观察是否产生黄色沉淀。

五、实验结果与分析1. 性状鉴别：- 正品黄芩药材符合性状特征，伪品黄芩药材与正品差异较大。

2. 黄芩苷提取：- 提取液经处理后，得到黄芩苷粗品。

3. 黄芩苷鉴定：- 加入碘化铋钾溶液，出现橘红色沉淀，证明含有黄芩苷。

- 加入香草醛-硫酸溶液，出现蓝紫色沉淀，进一步证实为黄芩苷。