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微生物菌体大小及菌群数量的测定

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山东大学实验报告
2012年 11 月 13日

姓名 系年级 2011级生科2班 组别 四 同组者
科目 微生物学实验 题目 霉菌的形态观察 学号

1
霉菌的形态观察

一．实验目的
1．掌握配制合成马铃薯培养基的一般方法。
2．学习并掌握观察霉菌形态观察法——小室培养。
3．了解并掌握青霉、根霉、毛霉、黑曲霉四种霉菌的形态结构。
二．实验器材
1．菌种：青霉、根霉、毛霉、黑曲霉 。
2．试剂：马铃薯、葡萄糖、琼脂、水、 氢氧化钠、盐酸、蒸馏水、
20%甘油
3．仪器或其他用具：显微镜、载玻片、酒精灯、接种环、盖玻片、平皿、
U型管、滤纸、解剖刀、吸管、镊子
三．实验原理
1.霉菌：霉菌是形成分枝菌丝的真菌的统称，在固体基质上生长时，部分
菌丝深入基质吸收养料，称为基质菌丝或营养菌丝；向空中伸展
的称气生菌丝，可进一步发育为繁殖菌丝，产生孢子。大量菌丝
交织成绒毛状、絮状或网状等，称为菌丝体。菌丝体常呈白色、
褐色、灰色，或呈鲜艳的颜色（菌落为白色毛状的是毛霉，绿色
的为青霉,黄色的为黄曲霉），有的可产生色素使基质着色。
2.根霉：根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，
匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝
的包囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢
山东大学实验报告
2012年 11 月 13日

姓名 系年级 2011级生科2班 组别 四 同组者
科目 微生物学实验 题目 霉菌的形态观察 学号

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子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。
根霉除了有无性生殖外还有有性生殖，即产生接合孢子进行接合
生殖。
3.毛霉：菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能广泛蔓延，无假根或匍
匐菌丝。不产生定形淡黄色菌落。菌丝体上直接生出单生、总
状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，
内有形状各异的囊轴，但无囊托。囊内产大量球形、椭圆形、
壁薄、光滑的孢囊孢子。孢子成熟后孢子囊即破裂并释放孢子。
有性生殖借异宗配合或同宗配合，形成一个接合孢子。某些种
产生厚垣孢子。毛霉菌丝初期白色，后灰白色至黑色，这说明
孢子囊大量成熟。
4.黑曲霉：菌落呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子为球形，呈黑、
黑褐色，平滑或粗糙。菌丝发达，多分枝，有隔，有多核的多细
胞真菌。分生孢子梗由特化了的厚壁而膨大的菌丝细胞（足细胞）
上垂直生出，顶端膨大成球状，在其表面可辐射状生出一层或二
层分生小梗，小梗顶端一串串分生孢子，分生孢子头状如“菊花”。
黑曲霉的菌丝、孢子头常呈现各种颜色，如：黑、棕、绿、黄、
橙、褐等，菌种不同，颜色也不同。
5.青霉：青霉菌属多细胞，营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有
横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端
不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称
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或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆
形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产
生闭囊壳，内形成子囊和子囊孢子，亦有少数菌种产生菌核。
6.霉菌的菌丝比细菌及放线菌粗几倍至几十倍，可以采用直接制片法或
透明胶带法或载玻片培养观察法来观察霉菌，通过无菌操作将薄层
培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖
玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可
观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征
变化。
四．实验步骤
1. 培养小室的准备：在平皿底铺一张圆形滤纸片，再放一Ｕ型管，其上
放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，准备四套上述平皿，再准
备两套空平皿，把这六套平皿包扎在一起，再用牛皮纸包扎两个2ml
的吸管，在100ml锥形瓶中盛放30ml20%的甘油，用牛皮纸包扎，
然后将平皿、吸管和甘油放于高压灭菌锅内，于110℃灭菌20～30
分钟。
2．配置马铃薯培养基100ml:按照马铃薯培养基的配方取适量的（即20g
已去皮的马铃薯，切成块煮沸20min,然后先用一层纱布过滤，再用六
层纱布过滤，再加糖和琼脂，溶化后补水至100ml,121℃灭菌30min.
3 .琼脂薄片的制作：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基约5ml 注入已灭菌
的培养皿中，使之凝固成薄层。事先用记号笔在平皿底部划分好1cm x
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1cm的方块，把解剖刀在酒精灯中浸泡后灼烧，在酒精灯下用解剖刀
切成1cm x 1cm的琼脂块，在无菌操作台上将其移至上述培养室中的
载玻片上（每片放两块 )。
4．接种 ： 在无菌操作台上，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的菌
种，接种于培养小室中琼脂块的某一边缘上，并在培养皿的外侧贴好
标签，标签上注明菌名、组别和接种日期。
5.加盖玻片：用已灭菌的镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。
6倒保湿剂 ：每个培养皿中倒2mL 20%的无菌甘油，使皿内的滤纸完全润
湿，以保持皿内湿度，盖上培养皿皿盖 。
7.培养：将平板倒置，于27℃培养一星期。
8.镜检： 取出载玻片置低倍镜下观察，注意观察菌丝有无隔膜，有无假根、
足细胞等特殊形态的菌丝。注意其无性繁殖器官的形状和构造，孢子着
生 的方式和孢子的形态、大小等。
五、实验结果
项目 菌种 特征 代表
特征

根霉 菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至数
根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊。囊
的基部有囊托，中间有球形或半球形囊
轴。囊内产大量孢囊孢子。

有假根
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毛霉 菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，无囊托。 无假根、 顶端有球形孢囊

黑曲霉 营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小
梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子
梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌
丝相连。

有足细胞

青霉 菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。小梗顶端有孢子。 顶端不膨大、帚状分生小梗
四种霉菌的形态结构观察图如下：
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六．注意事项
1.小室培养时注意无菌操作，接种量要少并尽可能将分散孢子接种在琼脂块
边缘，避免培养后菌丝过于密集影响观察。
2.观察时注意观察菌丝有无隔膜，有无假根、足细胞等特殊形态的菌丝。注
意其无性繁殖器官的形状和构造，孢子着生的方式和孢子的形态、大小等。
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3.载玻片湿室培养时，盖玻片不能紧贴载玻片，要彼此有极小缝隙，一是为
了通气；二是使各部分结构平行排列，易于观察。
七．思考题
1．什么叫载玻片湿室培养?它适用于观察怎样的微生物，有何优点?
答：也叫小室培养：用无菌操作讲培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖
上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。
培养一段时间后，将载玻片的培养物置于显微镜下观察。最适用于观察霉菌 ，
也适用于黏菌的观察，小室培养既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不
同发育期的培养物。

2．湿室培养时为何用20%甘油作保湿剂？
答：霉菌喜欢在潮湿的环境中生长，用甘油做保湿剂以保持皿内湿度，避免
霉菌因不适应环境而死亡

3.你是用哪些特征来区分这四种霉菌的？
答：根霉有假根，菌丝无隔，有匍匐菌丝，孢囊梗顶端膨大成孢囊。毛霉
菌丝无隔，无假根，孢囊梗顶端有球形孢囊。黑曲霉有足细胞，菌丝有
隔，分生小梗顶端有成串的分生孢子。青霉菌丝有隔，分生孢子梗不膨
大，分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫
帚。
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附：马铃薯培养基配方
项目 量
马铃薯 200g
蔗糖（或葡萄糖） 20g
琼脂 15-20g
水 1000ml
pH 自然

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微生物大小的测定及显微镜直接计数法

微生物大小的测定及显微镜直接计数法

微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数生32 程雨婧 2013012406一、实验目的1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。

2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。

3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、实验原理1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。

镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。

用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。

2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)图一:测微尺的校正3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。

中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

计数区由400个小方格组成。

每个大方格边长为1mm，其面2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。

使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。

设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5图二:血细胞计数室构造三、实验器材1. 菌种:啤酒酵母2. 器材:普通光学显微镜、目镜测微尺镜头、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、试管、无菌水、血细胞计数板、计数器、吸管、生理盐水、移液器。

微生物学实验四、微生物大小的测定、显微镜直接计数法

微生物学实验四、微生物大小的测定、显微镜直接计数法

1.明确血细胞球计数板计数的原理。 2.掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
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基本原理
• 血球计数板的构造 • 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构 成3个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两 半，每一边的平台上各有一个方格网。每个方格网 共分9个大方格，中间的大方格即为计数室。 • 计数室的刻度有两种规格：一种是一个大方格分成 16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另 一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格 又分成16个小方格。但无论哪种规格，每个大方格 都由400个小方格组成。 • 每个大方格边长为1mm，则每个大方格的面积为 1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高 度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
‹# ›
实验步骤
• 安装目镜测微尺
• 校正目镜测微尺
• 将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。
• 分别在低、高倍镜、油镜下用镜台测微尺校正目镜测 微尺
• 计算
• 镜台测微尺：将1mm等分为100小格，每小格长 0.01mm（即10μm）。
• 目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测 微尺格数×10）/两重合线间目镜测微尺格数
尺格数 尺格数
长度 /um
高倍镜
油镜
‹# ›
2）将啤酒酵母测定结果填入下表
测定 次数
目镜测微 尺每格代 表的长度 /um
宽
目镜测微 宽度/um 尺格数
1
2
3
4
5
6
7
8
9
１０
平均 值
‹# ›
长
目镜测微 尺格数
长度 /um
菌体大 小/um
本节内容结束
微生物大小的测定实验报告

微生物大小的测定实验报告

微生物大小的测定实验报告微生物大小的测定实验报告引言：微生物是一类极小的生物体，其大小对于研究和认识微生物的生物学特性具有重要意义。

本实验旨在通过测定不同微生物的大小，探索微生物的形态特征以及对环境的适应能力。

实验方法：1. 实验材料准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片、显微镜目镜和物镜、移液管、无菌培养基、不同种类的微生物培养物。

2. 实验步骤a) 将一滴无菌培养基滴在载玻片上。

b) 用无菌的移液管取一小滴微生物培养物，滴在培养基上。

c) 用无菌的盖玻片轻轻压在载玻片上，使培养物均匀分布。

d) 将载玻片放在显微镜上，调节镜头和物镜，观察微生物的形态特征。

e) 选择合适的视野，用显微镜目镜测量微生物的大小。

实验结果：通过实验观察和测量，得到了不同微生物的大小数据。

以下是实验结果的描述。

1. 细菌观察到细菌的形态多样，有球状、杆状、螺旋状等。

测量发现，球状细菌的直径约为0.5-5微米，杆状细菌的长度约为1-10微米，螺旋状细菌的长度约为5-50微米。

2. 真菌真菌是一类单细胞或多细胞的微生物，其大小也有一定的差异。

观察到真菌的形态为菌丝状或孢子状。

测量发现，真菌的直径约为5-100微米，长度约为10-1000微米。

3. 病毒病毒是一种非细胞性的微生物，其大小相对较小。

观察到病毒的形态为球状或棒状。

测量发现，病毒的直径约为20-300纳米，长度约为50-1000纳米。

讨论：通过实验结果可以看出，微生物的大小差异较大，不同种类的微生物在形态特征和大小上存在明显的差异。

这与微生物的生物学特性和适应环境的能力密切相关。

细菌的大小差异可能与其形态和功能有关。

球状细菌通常较小，可能与其对环境的适应能力有关，可以更好地在水体中生存。

杆状细菌和螺旋状细菌较大，可能与其生物学功能和运动能力有关。

真菌的大小差异可能与其生活方式和营养需求有关。

菌丝状真菌通常较小，可能与其在有机物分解和吸收过程中的适应能力有关。

孢子状真菌较大，可能与其繁殖和传播能力有关。

实验二 微生物的大小测定与显微计数

实验二 微生物的大小测定与显微计数

实验二 微生物的大小测定与显微计数一、实验目的1. 学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。

2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。

3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二 实验原理1. 酵母菌大小测定在显微镜下，测微尺可完成对微生物大小的测定。

测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块放入目镜中的圆形玻片，在玻片中央把10mm 的长度刻成100等分，用于测量经显微镜放大后的细胞图像。

测量前，需先用镜台测微尺校正。

镜台测微尺是专门用来校正目镜测微尺的。

2. 微生物数量的测定血细胞计数板（图一）是一块特制的载玻片，薄片上有4条槽构成3个平台，中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每一边平台各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。

计数室（图二）的刻度有两种：一种大方格分为16个中方格，每个中方格分成25个小方格；一种大方格分成25个中方格，中方格分成16个小方格。

每个大方格都是400个小方格，边长为1mm ，面积1mm 2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm ，所以计数室的容积为0.1mm 3。

三 实验仪器、材料和用具1. 实验用具：载玻片、盖片、200µ l 移液器及tip 、擦镜纸、 装有蒸馏水的洗瓶。

2. 实验仪器：普通生物显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、手动计数器;3. 菌种 ：酿酒酵母（200rpm ，28℃，24h ，稀释20倍）四 实验步骤1． 酵母菌大小测定 （1） 目镜测微尺的校正图一 血细胞计数板构造图二 血细胞计数室构造（16×25）在100倍镜下，使目镜测微尺的目镜和镜台测微尺某一个区域内两线完全重合。

计数两重合刻度之间目镜测微尺和镜台测微尺的格数（格数必须是整数）。

（2） 细胞大小的测定1） 将稀释40倍的少量的酵母培养液涂在载玻片上，用盖玻片推开，放在载物台上。

2） 用100倍镜观察，用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长、宽各占几格。