FC500培训手册-final
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美国贝克曼库尔特有限公司 Cytomics FC 500 MCL 中文应用培训手册 V 1.1 Cytomics FC500 MCL 中文应用培训手册 v1.1 目 录 培训日程安排 …………………………………………………………………… 1 培训所需设备及试剂 …………………………………………………………… 2 每日开机程序 …………………………………………………………………… 3 每日关机程序 …………………………………………………………………… 4 长期关机程序 …………………………………………………………………… 5 日常保养与维护 ………………………………………………………………… 6 Flow-CheckTM自动质控操作 …………………………………………………… 8 仪器QC及验证操作 …………………………………………………………… 10 双色淋巴细胞亚群获取和分析 ………………………………………………… 13 单色&多色样本获取和分析 …………………………………………………… 21 HLA-B27检测 …………………………………………………………………… 22 四色免洗淋巴细胞亚群绝对计数 ……………………………………………… 29 DNA测定 ………………………………………………………………………… 33
相关文件： 1.《Cytomics FC 500 MCL with CXP software Instructions For Use 》； 2.《FC500 tetraCXP System guide》； 3.《CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 Instructions For Use》； 4.《CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 Instructions For Use》； 5.《HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE Instructions For Use》； 6.《Coulter DNA Prep Reagents Kit Instructions For Use》；
本手册自2011年3月1日起执行 Cytomics FC500 MCL 中文应用培训手册 v1.1 1 流式细胞仪装机培训日程安排 第一天 1. 流式细胞仪基本原理; 2. 仪器结构简介; 3. 每日开机程序；
4. 操作系统介绍; 软件界面简介;
5. 仪器的QC（FlowCheck及FlowSet，并用FlowSet及四个单染管组合进行四色实验条件的建立，并以Immuno-Trol样本做四色标记做为最终验证管验证结果）;
6. 学习单色样本的获取及分析； 7. 每日关机程序； 第二天 1. 双色淋巴细胞亚群获取和分析数据; 2. HLA-B27检测; 3. 四色淋巴细胞亚群的获取和分析； 4. 第一天实验内容全部练习一遍； 第三天
1. DNA样本的制备及数据的获取 (可选用DNA试剂盒);
2. 使用MultiCycle 软件分析DNA数据;
3. 前两天内容全部练习一遍； 4. 仪器的日常维护及保养，简单故障的排除; 5. 数据备份； 6. 光盘记录； 7. 课程评估（通过用户各步骤独立上机操作确认）。 Cytomics FC500 MCL 中文应用培训手册 v1.1 2 培训所需设备及试剂 1. 普通低速离心机（实验要求为300g,相当于1000～1500rpm，可调转速调时间，能离心12x75mm的5ml试管)；
2. 固定或可调节的加样器及相应加样头若干： 20ul,50ul, 100ul, 200ul, 250ul，450ul，1ml；
3. 涡旋混匀器； 4. 烧杯，量筒或移液管，清洁的玻璃或塑料带盖试剂瓶(50-100ml)若干，1个棕色瓶，漏斗，滤纸，纱布，棉签若干；
5. 300目过滤尼龙网； 6. 可放置12x75mm的5ml试管的试管架2－3个； 7. PBS 溶液和蒸馏水：0.22μm滤膜过滤； 8. NaClO：分析纯，有效氯浓度5-10%； 9. 多聚甲醛。
附1： PBS配制方法：800ml蒸馏水中溶解NaCl 8.0g；KCl 0.2g；Na2HPO4 1.44g；KH2PO4 0.24g；调节pH 到7.2～7.4（用HCl或NaOH调节，各地蒸馏水的酸碱度不同），加蒸馏水定容至1L，0.22μm滤膜过滤后，室温保存。 附2： 多聚甲醛溶液配制方法：贮存液用PBS配制4%多聚甲醛溶液，待完全溶解后（溶解时需要不断搅拌，加热的温度小于50℃），调整PH值在7.2~7.4，并用0.22μm的滤膜过滤后置于2-8°C保存。使用时，用PBS稀释为2%浓度的应用液。应用液2-8°C存放，可使用一周。Cytomics FC500 MCL 中文应用培训手册 v1.1
3 Cytomics FC 500 每 日 开 机 程 序
1．检查鞘液桶，确认： 鞘液桶充满3/4状态 盖紧盖子 2． 检查废液桶，确认： 清空废液桶 废液桶内加入 400ml 次氯酸钠原液 盖紧盖子 管路与桶盖连接，无扭曲
3． 检查清洗液桶，确认：加满清洗液。 4． 打开电源箱开关，启动计算机。 5． 在出现的 Windows 操作系统登陆对话框内输入用户名及相应密码。 6． 点击桌面 图标，启动流式细胞仪。 注意：如流式细胞仪关机后重新启动，必须等待仪器关闭30分钟后再重新启动，以
保护激光器。
7． 打开电源箱门，检查并确认： AIR FILTER 和 VACUUM FILTER 必需干燥无水 WATER TRAP 液体不超过 1/3 VACUUM TRAP 液体不超过 1/4 检查 SYSTEM VACUUM 计量表，确认读数在 -17~-30 in.Hg 之间 检查 SYSTEM PRESURE 计量表，确认读数在 28~32 PSI 之间 注意：如 SYSTEM PRESURE 计量表计数不在上述范围内，拉出 PRESURE
ADJUSTER 钮旋转调节压力至 30±2 后，将调节钮复位。
7．执行 Prime ，并排除管路中气泡。 8．激光器预热 10-15分钟，待仪器主机面板指示灯变为，且提示“Awaiting Sample”，可以开始实验。Cytomics FC500 MCL 中文应用培训手册 v1.1 4 Cytomics FC 500 每 日 关 机 程 序
每日工作后，执行如下关机程序。 1，常规清洗： 用2ml有效氯浓度 0.5-1% 的次氯酸钠溶液（或Cleanse清洗液）做样品，置于进样盘上 1 号位置，用另外 3 个洁净的样本管每管 2ml 蒸馏水或鞘液置于进样盘上 2-4 位置。 在 Resource Explorer 状态栏中单击 PANEL 图标，选择 Cleanse.PNL 拖到
Acquisition Manager 栏中，输入 Carousel No (盘号)和 Location (试管位置)。 点击工具栏的运行键 ，运行清洗程序。
清洗完成后，打开 MCL 上盖，取下圆盘盖好 MCL 上盖。 2．清洁样本头: 取一块洁净的纱布，用有效氯浓度 0.5-1% 的次氯酸钠溶液润湿纱布，打开MCL上盖，上下来回擦拭样本头至少 10 次。 另取一块洁净的纱布，用蒸馏水润湿，上下来回擦拭样本头至少 15 次，以保证完全清除残留的次氯酸钠溶液。 3．清洗真空管路： 按 Cytometer 主界面上的键，使其处于 Idle（闲置） 状态。 将两个真空管清洗适配器内加满双蒸水，分别放在进样盘的 1、2 号位置，将进样盘置于 MCL 上，并盖好上盖。 当屏幕显示“Press Idle Mode button to Initialize”时，单击 Cytometer 主界面上的键，屏幕显示“Cleanse cycle in progress”，进行真空管路清洗循环。 当屏幕再次显示“Press Idle Mode button to Initialize”时，清洗完毕，取下进样盘，盖好 MCL 上盖。 按键使仪器恢复初始状态。 4．CLENZ 液清洗程序： 当执行完上述流程后，直接点击软件上的 Cleanse 键，此时仪器调用 Cleanse Tank 中的清洗液冲洗各个管路3-5分钟。 当屏幕显示“Press Idle Mode button to Initialize”时，清洗结束。 按键使仪器恢复初始状态。仪器自动将清洗液排入废液桶内，将鞘液充满整个管路。 5．退出 CXP 软件，关闭所有窗口，在弹出的窗口中选择或，确认是否需要保存对 Protocol 的更改。 6．单击桌面上的关闭流式细胞仪，单击选择关闭电脑，关闭显示器和打印机，关闭电源箱。
