《薄层色谱鉴别》课件

据流动相的 气相色谱 流动相为气体 物态不同 液相色谱 流动相为液态
超 临 界 流 流动相为液态 体色谱
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ห้องสมุดไป่ตู้
按操作
方式不 同
迎 头 将混合物溶液连续通过固定相，只有化 法 学亲和力最弱的组分以纯粹状态最先流
出，但其它各组分都不能达到分离。
利用一种化学亲和力比各被结合组分都
顶 替 强的物质来洗脱，这种物质称为顶替剂。 法 此法处理量大，且各组分分层清楚，但
（一）定性参数
1.
流比动移相值移Rf动(re距tar离da之tio比n
factor；Rf)
图示
溶质移动的距离与
Rf
原
点 原到 点组 到分 溶斑 剂点 心 前质 的 沿量 距 的中 离 距 LL0
离
Rf范围：
0< Rf <1 Rf = 0.2~0.8（常用） Rf = 0.3~0.5（最佳）next
▪ 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 20操20/10作/11 的仪器化，并实现了计算机化。
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色谱概念
色谱法（Chromatography）亦称色层法、 层析法等。
色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的 重要方法之一。
色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一 物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或 其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物 质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分 分离。
1941
Martin, Synge 提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作
为流动相（即气相色谱）。
1952
Martin,

薄层色谱鉴别介绍
61、辍学如磨刀之石，不见其损，日 有所亏 。 62、奇文共欣赞，疑义相与析。
63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠 深巷中 ，鸡鸣 桑树颠 。 64、一生复能几，倏如流电惊。 65、少无适俗韵，性本爱丘山。
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联

3.70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年 代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各 步操作的仪器化，并实现了计算机化。
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4.薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）
? 固定相和流动相
?TLC——流动相流动靠毛细作用力， 流动相选择较少受限制，固定相不用 再生。而 HPLC是在封闭的系统内， 流动相流量靠泵控制，溶剂选择受检 测器限制，固定相需再生。
? 样品处理
?TLC要求没有HPLC严格。
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? 色谱分离 TLC可同时分离多个样品 ，并可采用相同或 不同溶剂进行同向或双相 多次展开，通常采 用正相色谱，色谱后 衍生化方便 。
? HPLC一次只能分离一个样品，通常采用 反相色谱，色谱后衍生化受限制。
? 对污染物抗受力强
?TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不 可逆吸附物质均无影响。
W1 ? W2
W
4 Rf
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R ? 2L0? Rf ? L0? Rf ? n ? Rf
W1 ? W2
W
4 Rf
R 1.00 0.75 0.5 0.25 0
0.1 0.3
Rf=0.3,R 最高 Rf在0.2-0.5,R 变化不大 Rf﹤0.1或﹥ 0.7,R下降
0.5 0.7 0.9 Rf
?含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示，
并以下标注明其激发光波长。例 硅胶
HF254
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4.薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例：
? 硅胶板（粒度10～40um）
?硅胶G—将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)， 迅速研磨均匀，立即涂铺。

一、 实 验 目 的
❖ 了解薄层色谱的应用原理 ❖ 掌握薄层色谱的应用方法
二、实 验 原 理
二、实 验 原 理
应用薄层色谱检验、鉴定化合物的原理：
图1 365 nm下观察的结果
图2 硫酸乙醇显色结果
注：两边的是标准品，中间的是样品
二、实 验 原 理
➢ 固定相：硅胶，氧化铝，等。 ➢ 支持板：玻璃板，涤纶布，等。 ➢ 展开剂：根据样品的极性及溶解度选择，可采用单一溶剂，但更常用的
四、实 验 过 程
比移值（ Rf 值）的计算：
五、 注 意 事 项
1. 制作薄层所用玻璃板要平滑、干净。 研磨要充分，保证所制的薄层面应平整均匀 存放薄层板时要注意保持干燥及避免污染。
五、 注 意 事 项
2. 样品浓度（浓度为0.01-0.1%）： 太大，容易出现拖尾；
太小则会导致斑点不明显，难以观察。
五、 注 意 事 项
5. 标记斑点时：要轻轻勾画，避免铅笔将斑点处的硅胶碰掉，从而 影响后续显色结果的观察。
是混合溶剂。
三、实 验 试 剂 与 仪 器
点样样品 香草醛
间苯二酚
展开剂 石油醚 丙酮
四、实 验 过 程
薄层板 的制备
点样
展开
显色、定位
UV灯、显色剂
测定比移值
（Rf 值）
四、实 验 过 程
显色和定位 一般包括：一看、二照、三碘和四显四步。
❖ 一看：指先在自然光下观察 ❖ 二照：指分别在 254 nm 和 365 nm 下观察有无暗斑或荧光斑点 ❖ 三碘：对在自然光和紫外下均无斑点的物质可以用碘蒸汽显色 ❖ 四显：用显色剂显色 ➢ 实际操作中根据需要选择其中的两到三步。
五、 注 意 事 项