高效液相色谱实验报告
高效液相色谱法，基本原理为影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。分为液固吸附色谱法，流动相为液体，固定相是固体吸附剂；液分配色谱法，固定相几乎全是化学键合硅胶，又称化学键合相色谱法等。
（二）塔板理论：
塔板理论方程式（高斯方程式）：
理论塔板式数： 理论塔板高度：
（三）速率理论： h=a+b/u+cu
影响塔板高度的因素：1、涡流扩散 2、纵向扩散 3、传质阻抗
二、气相色谱仪：
（1）色谱柱：固定相与柱管组成。 填充柱、毛细管柱； 分配柱、吸附柱
（2）紧固液：低沸点的液体，操作方式下为液态。 甲基硅油、聚乙二醇等
选择原则：按相似性、按主要差别、按麦氏差别选择。
（3）载体：化学惰性的多孔性微粒
（4）毛细管色谱柱：开管型、填充型
（5）检测器：1、浓度型检测器：热导检测器和电子捕捉检测器
2、质量型检测器：氢焰离子化检测器
中国药典对气相色谱规定：除检测器种类、紧固液品种及特定选定的色谱柱材料严禁任一修改外，其他均可适度发生改变，色谱图于30min内记录完。
第四节 高效液相色谱法
1、 基本原理：影响柱效的主要因素就是涡流蔓延和传质电阻。
分类：1、液固吸附色谱法：流动相为液体，固定相是固体吸附剂。
2、液——液分配色谱法：紧固二者几乎全系列就是化学键再分硅胶，又称化学键再分相色谱法。
按固定相和流动相的极性2又分：正相色谱法和反相色谱法 正相色谱法：流动二者极性大于紧固二者极性的色谱法。用作拆分溶有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用作所含相同官能团物质的拆分。 极性强组分先流入
反相色谱法：……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物
2、 高效率液相色谱仪：
140 7 高效液相色谱技术（HPLC）
高效液相色谱（HPLC：High Performance Liquid Chromatography ）是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。国际市场调查表明，高效液相色谱仪在分析仪器销售市场中占有最大的份额，增长速度最快。
高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。其缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。目前的发展趋势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜。
7.1 基本原理
加样
流动相
固定相 流动相
A A
B C
B C
B
A
色谱的分类及原理
分类：
1. 按分离机制分类：色谱可以根据分离机制分为液相色谱和气相色谱两大类。
2. 按固定相性质分类：液相色谱可以分为吸附色谱和分配色谱两类。气相色谱根据固定相的性质可以分为吸附色谱、气相分配色谱和离子交换色谱等。
液相色谱原理：
液相色谱是利用液相作为流动相进行分离的色谱技术。样品在固定相上以分配或吸附作用的形式进行分离。液相色谱的固定相一般是细小颗粒的填充物，例如固定相可以是液体，也可以是固体。样品溶于流动相，在流动相的作用下，根据样品成分与固定相的亲疏性差异，不同成分会以不同的速率被固定相吸附或分配，从而完成分离。
气相色谱原理：
气相色谱是利用气相作为流动相进行分离的色谱技术。样品在固定相上以吸附或分配作用的形式进行分离。气相色谱的固定相一般是覆盖在填充柱或涂布在毛细管壁上的涂层。样品被注入到气相载气中，然后通过气相载气将样品与固定相接触，不同成分会根据其与固定相的相互作用力不同，以不同的速率在固定相中进行传播和分离。
吸附色谱原理：
吸附色谱是以固定相上吸附作用为基础的分离方法。样品成分与固定相之间的吸附作用力不同，导致各成分在固定相上停留的时间不同从而实现分离。
分配色谱原理：
分配色谱是以固定相上分配作用为基础的分离方法。样品溶解在移动相中，根据样品成分与固定相的亲疏性差异，不同成分会在流动相和固定相之间进行分配，使得不同成分以不同速率移动从而实现分离。
第八章- 1 - 第八章 高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatograph)
第一节 概述（Generalization）
以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。HPLC是20世纪70年代初发展起来的一种新的色谱分离分析技术。具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）的特点，适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。
HPLC基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、或数据处理系统记录色谱信号再进行数据处理而得到分析结果。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液－液色谱法和液－固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液－液色谱）和吸附色谱法（液－固色谱）等。目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，具有固定液不易流失的特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。C18（ODS）是最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用HPLC法，在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
一、 高效液相色谱法的特点
目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。经典LC填料缺陷，通常是填料粒度大、范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻力大，谱带展宽加大。它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。HPLC填料（高效固定相）颗粒细、直径范围窄、能承受高压。达到传质阻力小，分离效率高。早期HPLC的固定相用涂渍的方法制备，液膜厚度df大，这和GC一样，会大大降低色谱柱的柱效。现代HPLC填料大多采用键合固定相，其固定相膜很薄，因而大大提高了柱效。高效固定相会带来什么新问题呢？使用高效填料带来两个新问题：一是柱流动阻力大大增大，因此需要采用高压泵输液；二是表面能很大，要采用专业的装柱技术。
