纳米金磁复合微粒表面修饰及在免疫层析中的应用研究
中文摘要
免疫层析作为临床检测常用的床边诊断（POCT：Point-of-Care Test）技术，具有简
单、经济、快速等优点，受到广大医务工作者和患者的亲睐，此外这项技术还广泛应用
于家庭和海关，野外勘测等场所。然而，传统的产品仅提供定性或半定量检测结果，通
过胶体金在层析试纸条表面形成条带灰度的半定量检测使其灵敏度和准确度均受到一
定限制。近年来人们着手探索更新一代的纳米材料（如量子点或磁性纳米粒）在该领域
的应用，通过荧光信号或磁学信号不仅可保持现有产品快速的特点，还可实现高灵敏准
确定量的目的。基于新一代标记材料的免疫层析方法的建立，在心内科、急诊、食品安
全或动植物检疫的定量检测等领域具有重要意义。
纳米金磁微粒是由金组分与四氧化三铁纳米粒子组成的复合材料。四氧化三铁纳米
粒子具有超顺磁特性，而金壳层保证其具备等离子体共振吸收和高效偶联生物分子的性
能。以纳米金磁微粒替代胶体金应用于免疫层析检测，可结合其磁学、光学和免疫层析
的优势，实现快速，准确高灵敏定量检测。通过化学法原位还原制备纳米金磁微粒，以
稀盐酸处理去除样品中四氧化三铁纳米粒子，探讨巯基化试剂（SH-PEG-COOH）对纳
米金磁微粒表面的修饰效果及其在不同缓冲液中的抗团聚能力。进一步选择价格低廉的
阴离子聚电解质聚苯乙烯磺酸钠为修饰剂，探讨纳米金磁微粒修饰后材料的单分散性、
稳定性以及磁学性能等。研究了抗人绒毛膜促性腺激素（hCG）单抗和抗小分子半抗原
吗啡的单抗在其表面的固定化，基于双抗体夹心和竞争法的免疫层析原理，分别以固定
抗体的纳米金磁微粒为载体，不但实现了吗啡的定性检测，还建立了hCG目视化定性
和磁信号定量检测的方法，结果表明：
1. 纳米金磁微粒等离子体共振吸收峰在544 nm，饱和磁化强度在38.5 emu/g；1 mg
的金磁微粒可偶联130 µg的牛血清白蛋白。透射电镜表征呈球形，粒径约30 nm，体系
检验与检疫Every one is well《人人健康》
·165·2015年21期艾滋病是一种危害性极大的传染病，具有较长的潜伏期。艾滋病是由HIV病毒引起，HIV病毒能攻击人体的免疫系统，使人体的免疫功能丧失，所以人们易感染各种疾病，具有很高的病死率。目前临床没有治疗艾滋病的有效方法，降低艾滋病发病率的有效手段是预防，尽早对艾滋病患者进行诊断，也可控制患者的病情发展，主要方法是检测患者体内的抗-HIV。临床一般采用金标法或者酶联免疫法对抗-HIV进行测定，笔者就采用这两种方法对本院的2195份血液标本进行测定，比较两种方法的准确性，内容如下。1.资料与方法1.1 一般资料选取我院的血液标本2195份，血液标本的收集时间在2013年1月-2015年1月期间，血液标本均来自来我院进行健康体检﹑VCT及住院患者人群，其中男性1217例，女性969例，不详9例。最小年龄1岁，最大年龄88岁，平均年龄（38.36±2.31）岁，采血方式均为静脉采血，采集了5ml左右，且血液样本均没有被污染。1.2 方法1.2.1 金标法选用美国雅培公司试剂。在试剂上加50ul的血清，观察15min，如果试纸上有两条红线出现，则可将血液标本判定为阳性，如果试纸上出现一条红线，可将血液标本判定为阴性，记录红线出现的时间。1.2.2 酶联免疫法：人类免疫缺陷病毒抗体（HIV-1+2）及抗原（HIV-1P24）联合检测试剂盒（酶联免疫法）采用双抗原夹心法和双抗体夹心法酶联免疫吸附原理。选用北京万泰生物药业有限公司试剂，采用雷杜酶标仪、洗板机，根据说明书的要求操作，判断检测结果。阴性判定：样品A值＜临界值（CUTOFF）者为HIV抗体和HIVP24抗原阴性。阳性判定：样品A值≥临界值（CUTOFF）者为HIV抗体和HIVP24抗原阳性。对金标法及酶联免疫法首次试验判定为阳性的血液标本分别再次进行确定试验，并将确认试验中判定为阳性的血液标本做确认，采用免疫印迹法进行测定。1.3 评价指标记录金标法及酶联免疫法首次试验及确定试验的阳性结果、免疫印迹法检测的结果，并将其作为金标准，计算两种方法的准确性及假阳性率。1.4 统计学方法运用统计学软件包SPSS16.0分析处理本次研究中的所有数据，用均数±标准差表示体检者平均年龄等计量资料，用t检验组间比较，用百分比表示两种检测方法的阳性率及假阳性率等计数资料，用卡方检验组间比较，P小于0.05代表差异存在统计学意义。2.结果表1 血液标本阳性结果对比检测方法例数首次试验确定试验免疫印迹检测结果阳性例数阳性率阳性例数阳性率金标法219594743.14%94643.10%927（42.23%）酶联免疫法219595043.28%94843.19%在首次试验中，金标法的阳性率为43.14%（947/2195），酶联免疫法的阳性率为43.28%（950/2195），在确定试验中，金标法的阳性率为43.10%（946/2195），酶联免疫法的阳性率为43.19%（948/2195）。经免疫印迹法测定，2195例血液标本中，有927例为抗-HIV阳性，阳性率为42.23%，18例不确定，3例阴性。不确定中1例酶联免疫阴性，金标阳性；其余酶联免疫和金标都阳性。3例阴性患者中：酶联免疫阳性2例，金标阳性1例。金标法假阳性率为0.87%（19/2195），酶联免疫法的假阳性率为0.95%（21/2195），金标法与酶联免疫法的假阳性率无明显差异，不存在统计学意义（即P>0.05）。3.讨论血液检测是对患者血液内病变筛查的有效手段，也是发现、诊断HIV携带者有效方法，目前临床一般采用金标法及酶联免疫法进行血液抗-HIV检测。酶联免疫法在临床应用的时间较长，也较广泛地被应用。本次研究发现，酶联免疫法的检测结果假阳性率略低于金标法，但酶联免疫法需要用到酶标仪，且对操作人员的专业知识及操作技能有较高的要求，同时还对仪器使用的环境有一定要求，其灵敏度受很多因素的影响，且需要耗费一定的时间。金标法是临床研究的新型快速检测方法，在检测过程中，只需要用到金标法试剂及缓冲剂，就可完成检测。早期金标法的检测技术还没有完善和成熟，所以特异性及灵敏度均较差，所以在临床的应用并不广泛。但随着临床对金标法不断改进和完善，金标法检测灵敏度有很大的提升。本次研究结果也显示，金标法检测的假阳性率与酶联免疫法无明显差异，不存在统计学意义（即P>0.05）。综上所述，酶联免疫法及金标法都是检测血液标本抗-HIV的有效方法，临床检测时可根据实际情况选择合适的检测方法。参考文献[1]王辉，陈荣美.金标法与酶联免疫法在抗-HIV测定中的应用比较[J].中国社区医师，2014，29（30）：126-126，128【摘 要】目的研究金标法与酶联免疫法测定抗-HIV的效果。方法选取我院的血液标本2195份，血液标本的收集时间在2013年1月-2015年1月期间，采用金标法与酶联免疫法对2195份血液标本进行抗-HIV检测，比较金标法与酶联免疫法测定抗-HIV的准确性。结果在确定试验中，金标法的阳性率为43.10%（946/2195），酶联免疫法的阳性率为43.19%（948/2195），经免疫印迹法测定，2195例血液标本中，有927例为抗-HIV阳性，阳性率为42.23%。金标法与酶联免疫法的假阳性率无明显差异，不存在统计学意义（即P>0.05）。结论金标法与酶联免疫法均是检测抗-HIV的有效检测方法，临床可根据实际情况选择合适的检测方法。【关键词】金标法；酶联免疫法；抗-HIV；测定；比较【中图分类号】R446.6 【文献标识码】B 【文章编号】1004-597X（2015）21-0165-01金标法与酶联免疫法测定抗-HIV的效果研究张桂仙1 张 米2 张 念2（云南省传染病专科医院检验科 云南 昆明 650301）
四代金标法是一种用于检测人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体的方法。与传统的酶联免疫法相比，金标法采用了金黄色金属标记的抗体，而非传统的酶标记。这使得金标法在灵敏度、特异性和操作简便性方面具有优势。
四代金标法可以检测HIV抗原和抗体，因此能够更早地检测出感染。相比之下，三代金标法则只能检测抗体，因此需要在感染后数周才能检测到。四代金标法通常可以在感染后2周内检测到抗原和抗体，因此可以缩短检测窗口期，为感染者提供更早的诊断。
此外，四代金标法的特异性也较高，可以减少假阳性的可能性。由于金标法的灵敏度高，它可以检测到更低浓度的抗原和抗体，从而提高了检测的准确性。同时，四代金标法的操作简便快速，不需要特殊的仪器设备，只需将样本滴加到试剂板上，等待一定时间即可得出结果。
然而，需要注意的是，四代金标法也有其局限性。例如，它不能区分感染的种类和病毒载量，也不能用于检测药物的耐药性。因此，对于需要更深入了解感染情况的患者，仍需要进行其他检测。
总之，四代金标法是一种灵敏度高、特异性强、操作简便的HIV检测方法。它可以缩短检测窗口期，为感染者提供更早的诊断。但同时，也需要了解其局限性，并根据具体情况选择合适的检测方法。
荧光标记纳米金
荧光标记纳米金是一种常用的生物标记技术，可以用于生物分子检测、成像和药物输送等领域。纳米金是一种由纳米级别的金颗粒组成的材料，由于其表面等离子体共振效应（SPR）的存在，具有很高的荧光猝灭能力，因此在荧光标记中被广泛应用。
制备荧光标记纳米金的方法有多种，其中最常用的是通过表面修饰来实现。通常，纳米金表面会被修饰一层聚合物，例如聚乙二醇（PEG）或聚乙烯醇（PVA）等。然后，将荧光染料分子通过化学键或物理吸附的方式固定在聚合物表面上，形成荧光标记纳米金。
荧光标记纳米金的优点是具有高的荧光强度和稳定性，同时由于金颗粒的表面等离子体共振效应，可以增强荧光信号的强度和特异性。此外，纳米金的表面等离子体共振效应还可以用于荧光成像和光谱分析等领域。
在生物分子检测方面，荧光标记纳米金可以用于检测蛋白质、核酸和细胞等生物分子。在成像方面，荧光标记纳米金可以用于荧光成像和光谱成像等技术，如荧光共振能量转移（FRET）和表面增强拉曼光谱（SERS）等。在药物输送方面，荧光标记纳米金可以用于药物输送和治疗，例如肿瘤治疗和炎症治疗等。 总之，荧光标记纳米金是一种非常有用的生物标记技术，可以用于多种生物分子检测、成像和药物输送等领域，具有很高的应用价值和发展前景。
