高效液相色谱法测定玉米面馒头中着色剂柠檬黄
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６８ 化学分析计量 ２０１１年，第２Ｏ卷，第５期
高效液相色谱法测定玉米面馒头中着色剂柠檬黄
刘长勇 罗小玲 郝家勇 罗瑞峰
（农业部食品质量监督检验测试中心，石河子８３２０００）
摘要 建立了用高效液相色谱仪测定玉米馒头中柠檬黄的方法。分析柱为Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ。８（３．９ ｍｍ×１５０
ｍｍ，５ ｍ），流动相为甲醇一乙酸铵（体积比１８：７２），流速为０．６ ｍｌＭｍｉｎ，检测波长为２５４ ｎｍ，流动相直接提取样品 待测组分上机检测。该条件下柠檬黄测定结果的相对标准偏差为２．２％（ｎ＝７），回收率为９６．０％～９７．２％。该方法
满足检测要求。
关键词 高效液相色谱法 玉米面馒头 着色剂 柠檬黄
玉米面馒头是时下较为流行的粗粮食品，深受
广大消费者喜爱。据报道，一些地区不法商贩为了
牟利，在加工玉米面馒头时，非法添加合成着色剂柠
檬黄。人体食用过量的柠檬黄可造成危害ｌ１ 』。测
定柠檬黄的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相
色谱、液相色谱一质谱法、滴定法 Ｊ，在这些方法
中没有说明发酵面食制品馒头中柠檬黄的测定方
法，且国标方法中聚酰胺粉难以将柠檬黄完全吸附，
样品回收率较低 。为此笔者做了多次实验建立
了玉米面馒头中柠檬黄含量的测定方法。该方法简
便、快捷、准确，可满足检测要求。
１实验部分
１．１ 主要仪器与试剂
高效液相色谱仪：Ｗａｔｅｒｓ ２６９５型，配Ｗａｔｅｒｓ
２４８７型紫外检测器，美国Ｗａｔｅｒｓ公司；
甲醇：色谱纯；
乙酸铵溶液：０．０２ ｍｏｌ／Ｌ，称取乙酸铵０．７７０ ８
ｇ，加水定容至５００ ｍＬ，过０．４５ Ｉｘｍ微孔滤膜，再用
微波除气泡后备用；
柠檬黄标准储备液：１ ０００ ｍＩ ，准确称取干
燥的柠檬黄标准品０．１０００ ｇ，加甲醇一乙酸铵（体
积比１８：７２）使之溶解，定容至１００ ｍＬ，混匀；
柠檬黄标准使用液：２０ Ｃｇ／ｍＬ，准确吸取１ ｍＬ
柠檬黄标准储备液加流动相定容到５０ ｍＬ，混匀。
１．２色谱条件
色谱柱：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８（３．９ ｍｍ×１５０
ｍｍ，５ ｍ）；柱温：室温；流动相：甲醇一乙酸铵
（体积比１８：７２），流速为０．６ ｍＬ／ｍｉｎ；紫外检测器，
检测波长：２５４ ｎｍ。
１．３样品处理
称取制备好样品５ ｇ（准确到０．０１ ｇ）于高型烧
杯中，准确加入５０ ｍＬ流动相，匀浆均质２ ｍｉｎ，保鲜 膜封口超声萃取１０ ｍｉｎ，使色素充分溶出，静置沉
淀，取上层提取液适量离心。取离心上清液过０．４５
Ｉｘｍ滤膜。
１．４ 测定方法
柠檬黄标准溶液进样量为４、８、１２、１６、２０ Ｌ，
以柠檬黄浓度 为横坐标、峰面积ｙ为纵坐标进行
线性拟合。样品提取液进样量为２０ Ｌ。外标法保
留时问定性，峰面积定量。
２结果与讨论
２．１ 标准品溶剂、流动相比例、样品提取液的选择
样品溶液ｐＨ值过高或过低都会降低色谱柱使
用寿命并对仪器流动相通道有腐蚀作用Ｉ 。试验
证明，甲醇一乙酸铵（体积比１８：７２）对柠檬黄的溶
解性可满足实验要求，且标准品的峰型和保留时间
达到了理想的效果。选择流动相为样品提取液直接
提取目标物上机测定，达到了杂质与目标组分的良
好分离，且避免了提取液与流动相成分不同可能造
成的目标物与标准品保留时间的差异，以便更好地
定性。该法与国标方法相比更省时、便捷，提高了工
作效率。
２．２标准曲线
按１．４方法绘制标准曲线，柠檬黄标准溶液色
谱图见图１。柠檬黄的线性回归方程为Ｙ＝１．７９×
１０ Ｘ一１．６６×１０ ，相关系数ｒ ＝０．９９９ ９６４。结果表
明，柠檬黄在４～２０ ｇ／ｍＬ浓度范围内，标准点呈
良好的线性关系，不排除适量延伸后仍表现出良好
线性的可能。
２．３精密度与加标回收率
按１．２色谱条件对同一玉米面馒头样品平行测
定７次，得出测定结果平均值、标准偏差及相对标准
收稿日期：
２０１１－０６—０９ 刘长勇，等：高效液相色谱法测定玉米面馒头中着色剂柠檬黄 ６９
０ ２ ４ ６ ８ ｌ０ １２ １４ ｔ／ｍｉｎ
图１ 柠檬黄标准液色谱图 偏差，见表１。结果表明，测定结果的相对标准偏差
小于５％，满足分析化学要求。对不含目标物样品
加标，加标量分别为０．０５、０．１０、０．２０ ｇ，计算回
收率，结果见表２。由表２可见，回收率在９５％～
１００％之间。 表１精密度试验结果（ｎ＝７）
目标物 平均值／Ｉｘｇ・ｇ 标准偏差／Ｉｘｇ・ｇ ＲＳＤ／％
柠檬黄 １１０．５ ２．４ ２．２
表２回收试验结果
目标物 加标量／Ｉ．ｚｇ・ｇ 测定值／ｔｘｇ・ｇ 回收率／％ ５０ ４８．０ ９６．０ 柠檬黄 １ｏｏ ９７．２ ９７．２ ２５０ ２４２ ９６．８
２．４样品测定
标准曲线点为４、８、１２、１６、２Ｏ Ｌ时，对样品中
目标物含量在４０～２００ ｇ范围内，称样量为５ ｇ，
样品溶液测定浓度在曲线内；当样品中目标物含量
在小于４Ｏ ｇ／ｇ或大于２００ ｇ时，可增减称样
量、减增定容体积或延伸曲线。样品色谱图见图２。 ０ ２ ４ ６ ８ ｌ０ １２ １４ ｔ／ｍ１ｎ
图２样品色谱图
３ 结语
在笔者实验室条件下，通过对样品前处理、色谱
条件选择的探讨，建立了高效液相色谱测定玉米面
馒头中柠檬黄的方法。本方法简单、快速、准确，测
定结果令人满意。
参考文献
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Ｌｉｕ Ｃｈａｎｇｙｏｎｇ，Ｌｕｏ Ｘｉａｏｌｉｎｇ，Ｈａｏ Ｊｉａｙｏｎｇ，Ｌｕｏ Ｒｕｉｆｅｎｇ
（Ｓｕｐｅ￣ｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｑｕａｌｉｔｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａ ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｈｉｈｅｚｉ ８３２０００，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ ｒｒｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｒｔｒａｚｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｒｎｍｅａｌ ｓｔｅａｍｅｄ ｂｒｅａｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８（３．９ ｍｍ×１５０ ｍｍ，５ Ｉｘｍ），ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｏｌ（ｖｏｌ—
ｕｍｅ ｒａｔｉｏ ｗａｓ １ ８：７２），ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ ０．６ ｍＬ／ｍｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ ｎｍ．Ｓａｍｐｌｅｓ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ
ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｄｉｒｅｃｔｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ ＲＳＤ ｗａｓ ２．２％（ｎ＝７），ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９６．０％一９７．２％．
Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｍｅｅｔｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ． ＫＥＹＷＯＲＤＳ ＨＰＬＣ．ｃｏｒｎｍｅａｌ ｓｔｅａｍｅｄ ｂｒｅａｄ，ｃｏｌｏｒａｎｔ，ｔａｒｔｒａｚｉｎｅ
辽宁检验检疫局食品荧光纳米检测技术通过验收
辽宁检验检疫局承担的质检总局科研项目《食品中痕
量病原微生物纳米稀土荧光探针的制备及快速检测技术的 研究》顺利通过成果鉴定，填补了国内空白，达到国际先进水
平。该项目以鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌Ｏ１５７ Ｈ７、空肠弯
曲杆菌、单核细胞增生李斯特菌和甲肝病毒等为检测对象， 建立“荧光纳米颗粒”检测技术平台。其相关原理和技术可
以推广到对其它有害微生物的检测，并且随着将来研究的进 一步开展，可通过合成多色荧光纳米颗粒达到对多种有害微
生物的同时检测，最终实现快速、灵敏和高通量的检测。
该项目利用设计合成新型纳米材料，将极大提高免疫试
纸的检测灵敏度，并且实现检测的定量或半定量化。在对现 场测定的样品要求、检测时间、仪器设备、人员要求、测试费
用、安全性等诸多方面具有一般常规方法所不可比拟的优
点。 （中国国门时报） ］ ｊ］； ＿一ｌ
