南瓜属植物的分子系统发育及分子钟研究

南瓜生长环境
南瓜是喜温作物，耐高温、低湍的能力较强。

种子发芽适温为25-30℃，生长发育的适温为18-32℃，开花和果实生长要求温度高于15℃，果实发育的适温为22-27℃，在低温条件下有利于雌花的形成。

南瓜是喜光植物，光照充足，生长良好，果实生长发育快
南瓜是喜温作物，耐高温、低湍的能力较强。

种子发芽适温为25-30℃，生长发育的适温为18-32℃，开花和果实生长要求温度高于15℃，果实发育的适温为22-27℃，在低温条件下有利于雌花的形成。

南瓜是喜光植物，光照充足，生长良好，果实生长发育快而且品质好；阴雨天多，光照不足容易化瓜，也容易发生病害。

南瓜根系发达，吸水能力强，抗旱能力强，但不耐涝，因此，遇雨涝天必须及时排水。

南瓜对土壤肥力的要求也不严格，适量地施肥能促进茎叶生长，过量将引起徒长。

1。

拟南芥根系发育的分子机制研究拟南芥（Arabidopsis thaliana）是一种广泛应用于植物生物学研究的模式植物，由于其遗传特性和组织结构的简单性，已成为深入了解植物基本生命过程的最佳模型。

其中，拟南芥根系是研究植物发育的重要组成部分。

近年来，对拟南芥根系的发育分子机制研究取得了一系列重要成果。

本文将详细介绍拟南芥根系发育的分子机制研究进展。

1. 根系发育及其调控机制植物的根系对其生存及生长至关重要，同时也是植物与外界交互的重要器官。

根系发育的过程中，由干细胞不断分化成为不同类型的细胞，例如表皮细胞、皮层细胞、髓层细胞、内向样木质部细胞等。

在根系发育过程中，一系列发育调控因子参与其中，包括激素、转录因子、非编码RNA等，调节根系发育的方向、速度和程度。

2. 拟南芥根系的结构特征拟南芥的根系是一种典型的顶生根系，由根尖、伸长区、分化区、茎轴区和侧根组成。

其中，根尖是根系的终端部分，具有不断生长的能力，防止根部伤害和提供营养物质吸收的位置。

伸长区由细胞不断分裂产生，与根尖一起负责根部的向下生长。

分化区是根系的中央部分，包括表皮细胞、皮层细胞、髓层细胞等。

茎轴区是进一步生长和分化的区域，侧根则是侧生的活动分支。

3. 分子调控机制的研究进展3.1 激素调控机制拟南芥根系的发育过程中受到多种激素的调控，例如生长素（IAA）、脱落酸（ABA）、赤霉素（GA）、细胞分裂素（CK）等。

其中，IAA是根系生长的基础激素，CK对根系分裂和伸长的影响比较明显。

ABA通常是在干旱和盐碱环境下诱导的激素，降低其浓度可以促进根系的生长。

3.2 转录因子调控机制转录因子是调控根系分化和细胞分裂的关键因子，例如AUX/IAA、ARF、RAM、SCR等。

其中，AUX/IAA 转录因子家族作为生长素响应基因，参与根系重力响应、根毛生长和根冠发育。

ARF转录因子家族则通过控制生长素诱导基因的表达，调节根系的细胞分裂和生长。

RAM1/2/3是一个至关重要的调控因子，在根系发育中起着极其重要的作用。

里白科植物的系统发育和分歧时间估计——基于叶绿体三个基因序列的证据古生物,49(1):64—72(2010年3月)ActaPaiaeont010gicaSinica,49(1):64—72(March,2010)里白科植物的系统发育和分歧时间估计基于叶绿体三个基因序列的证据李春香D陆树月4马俊业u杨群"1)现代古生物学和地层学国家重点实验室,中国科学院南京地质古生物研究所,南京210008,**************.ell2)云南大学生态学与地植物学研究所,昆明650091提要里白科(Gleicheniaceae)是古老的真蕨类植物,最早的化石记录可追溯到石炭纪.现存类群的属级分类和系统演化关系一直存在很大的分歧,为了进一步探讨该类群的起源演化,文中运用最大简约法和贝叶斯演绎方法对18种代表现存里白科植物全部6属(包括新测的12种)的叶绿体3个编码基因序列(atpB,rbcL和rps4)进行分析,探讨其主要分类群(属级)的系统演化关系.结果显示,里白科植物为一个单系群,由3个分支构成:里白属(DiplopterygiumNakai)和Gleicheniajaponica构成一个分支;芒萁属(DicranopterisBernh.)和Gleichenellapec—tinata构成另一个分支;假芒萁属(SticherusC.Pres1)与单种属StromatopterisMettenius及Gleicheniadicarpa构成第三个分支.用宽松分子钟方法推测里白科主要类群的起源时间为:现代里白科植物起源于早白垩世(111--140Ma),其主要分支类群随后发生多样性分化,里白属和芒萁属的快速辐射演化均发生在古近纪(4O一64Ma,36—50Ma).起源时间的估算结果暗示化石种三叠里白Dz0声fPrg","triassica不应归入现代里白属,其归属需要重新考虑.关键词里自科叶绿体基因系统发育起源时间化石记录现代里白科(Gleicheniaceae)主要分布于热带及亚热带地区,多数种类为多年生的藤本植物.该科植物的系统演化关系一直存在很大的分歧.首先,关于新卡里多尼亚(NewCaledonia)的单种属StromatopterisMettenius的系统位置存在争议, PichiSermolli(1977),Tryon和Tryon(1982)将其单独列立一科,而Nakai(1950),Holttum(1959), Bierhorst(1968),Kramer和Gteen(1990)都将其置于里白科内.植物化学(Wallaceeta1.,1983)和分子系统学研究(Pryereta1.,2004;Schiettpelz andPryer,2007)支持将其置于里白科内.其次,该科在属级分类上一直存在很大分歧,在很长的一段历史内曾经被认为是单属科,即全部种类都置于GleicheniaJ.E.Simth下(吴兆洪,秦仁昌,1991);后来不同的学者才将其划为不同的属,但属的划分却存在很大分歧(见表I).目前,PIatyzomaR.Brown已经被置于凤尾蕨科Pteridaceae(Tryon andTryon,1982;KramerandGreen,1990);Hic—riopterisC.Presl(Chin,1940;秦仁昌,1959)应为DiplopterygiumNakai(Holttum,1959;Zhang,2004),这里采用Diplopterygium(SmithetZ.,2006);而CalymellaPresl—Gleichenia; GleicheniastrumPresl=Gleichenia(Kramerand Green,199O).目前,多数学者承认Dicranopteris Bernh.,DiplopterygiumNakai,GleicheniaJ.E.Simth,SticherusC.Presl和StromatopterisMettenius,但对GleichenellaChing还存在争议.Gleichenella由秦仁昌(1940)建立,后来被置于芒萁属(Holttum,1973;TryonandTryon,1982;KramerandGreen,1990).近来的研究又将其作为单独的属对待(Pryereta1.,2004;Smitheta1.,2006;SchiettpelzandPryer,2007).本文受采样的限制主要考虑中国的里白科植物(吴兆洪,秦仁昌,1991),同时参照Kramer和Green(1990)及最收稿日期:2009—06—05中国科学院知识创新工程重要方向项目(KZCX2一YwJClO4,KZCX2一Yw一155),国家自然科学基金(40972001),现代古生物学与地层学国家重点实验室项目和中国科学院国家外专局国际伙伴合作计划联合资助.第1期李春香等:里白科植物的系统发育和分歧时间估计～—基于叶绿体三个基因序列的证据65新分类系统(Smitheta1.,2006)中的里白科概念(表I),并结合现有Gleichenellapectinata和Gleic'henia的序列资料(Pryereta1.,2004)进行分子系统学分析.Pryer等(2004),Schiettpelz和Pryer(2007)的研究为进一步探讨里白科的系统发育提供了重要线索和基础,他们的研究已经包括最新分类系统们所分析的每一属只有一种(后者包括两种假芒萁Sticherus),因此对属级的系统演化问题难以回答.由此有必要通过增加分类群的方法来研究这一类群的系统演化问题.另外,由于化石种三叠里白(Hi—criopteristriassicaDuanPfChen,这里采用Di一lopterygiumtriassica)的系统位置存在争议(杨小菊,2002),我们尝试用分子钟估测方法对其起源时(Smithet.,2006)中里白科的所有6属,但是他问进行推测,为其归属提供参考.表I里白科的属级分类GenericClassificationofGIeicheniaceae1材料与方法1.1实验材料材料为新鲜叶片,采集后迅速在硅胶中干燥,带回实验室进行DNA提取及序列分析.凭证标本保存在云南大学标本馆(PYU)和在实验室.标本信息详见表Ⅱ.1.2序列测定总DNA提取总DNA提取采用改进CTAB方法(Doyleand Doyle,1987;施苏华等,1996).引物的设计依据Pryer等(2004)的研究,我们选取叶绿体基因组的3段基因序列(atpB,rbcL和rps4):扩增rbcL基因所用引物根据Iittle和Barrington(2003) 设计,但其序列略作修改,具体序列见Li等(2004) 的文章;扩增rps4基因序列的引物参照Hennequin 等(2003)设计,但其序列改为F:5'ATGTCCCGT TATCGAGGACC3';R:5'GGAA TGA TA CTCGACGACTAG3';扩增atpB基因序列的引物参照Pryer等(2004)设计,但其序列调整为F:5' AGCTTCATCGA TGI2rACC3;R:5'GTT GGTGAAACTACTCTTGG3'.PCR扩增扩增反应在PerkinElmerGeneAmpPCRSys—tern9600上进行.反应体积为50ffl,成分为:2ffl DNA模板(约2ng,由GelDoc图像分析仪测得), 2.5mmol/LMgCl2,0.2mmol/LdNTPs,1Xbuff—er,0.25ffmol/L引物,1ffg/fflBSA,5%DMSO.3个基因片段扩增程序中的预变性和最后延伸步骤均为94℃,5min和72.C,7rain.扩增3个DNA片段均进行4O次循环,其中变性温度及时间均为94℃, 0.5min,但退火和延伸的温度及时间各不相同,分别为42|c,1rain;72.C,1.5min(rbcL片段);56.C,1min;72℃,0.5min(rps4片段);52C,lmin;72℃,1.2min(atpB片段).扩增产物经0.8%琼脂糖电泳后用GelDoc图像分析仪观察.对于PCR反应特异性高,无明显非特异反应条带的扩增产物,用WizardPCRDNAPurificationSystem(Promega)直接纯化;对于有明显非特异反应的PCR产物,先以低熔点琼脂糖凝胶电泳分离并割取目标片段,再用上述纯化系统进行纯化,均按照其说明书上的步骤进行操作.序列测定66古生物第49卷序列用ABI377DNA自动测序仪(AppliedBi—osystems,USA)测定,分别用扩增引物从3'一5和5'一3'进行测序,对于rbcL片段,除了扩增引物外, 内部引物424F和940R(LittleandBarrington, 2003)也用于测序.序列数据已输入美国生物信息中心(NCBI)的基因库中(GenBank),序号见表Ⅱ. 1.3序列分析用CLUSTALX软件(Thompsonet口.,1997)进行对位排列.对位排列后的序列分别用PAUP4.0bl0(Swofford,2003)中的最大简约法(MaximumParsimony,MP)和MrBayesv3.1.2 (RonquistandHuelsenbeck,2003)中的贝叶斯演绎法(BayesianInference,BI)构建系统树.MP采用启发式搜索方法(Heuristicsearch),1000次随机序列加入,TBR(TreeBisectionReconnection)枝长交换,MULPARES和ACCTRAN优化,所有核苷酸等权,空位(gap)作为缺失(missing)状态分析.采用500次抽样自展(bootstrap)分析评估系统树各分支的支持率.在用BI构建系统树之前,先用MrModeltest2.0(Nylander,2004)软件获得最适合本研究序列矩阵的核苷酸替代模型及相关参数. BI采用MCMCMC(Metropolis—coupledMarkov ChainMonteCarlo)算法,以随机树为起始树,运行1000000代,每100代取样1次,开始的5000个样本作为老化样本(burn—insamples)舍弃.采用分划同质性检验(partitionhomogeneitytest)(Farriset az.,1995)评价序列联合分析的可靠性.在构建系统树时,根据Pryer等(2004)和Hasebe等(1994, 1995)构建的系统树,以Matoniapectinata,Chei—ropleuriabicuspis和Dipterisconjugata作为外类群.1.4分歧时间的估算首先采用PAUP4.0bl0对各基因序列进行独立和联合的似然值比率检验(LikelihoodRatio Test,LRT,Felsenstein,1988),即用MrModehest2.0(Nylander,2004)软件获得最适合各个序列矩阵的核苷酸替代模型及相关参数,将使用和不使用分子钟假设所得到的最大似然值(Loglikelihood)之差乘以2,用方差分析检验其显着性(y检验).由于数据不符合分子钟假设,用MuLTIDIVTIME中的宽松分子钟(Relaxedclockmolecular)方法进行分歧时间估算(ThorneandKishino,2002).用MULTIDIVTIME方法进行分歧时间的估测包括3 个步骤.首先,用PAML3.15中的baseml程序(Y ang,1997)对数据进行替代模型的检验,获得替代模型系数(F84+G,5个速率分布模型).其次,根据每个数据所获得的系统树拓扑结构,用MUL- TIDIVTIME中的estbranches程序估测数据的分支长度以及它们的方差一协方差矩阵.最后,我们利用MULTIDIVTIME程序进行各个类群分歧时间估算.MULTIDIVTIME需要用化石记录作为限制点或控制点(constraint),我们以Stromatop—teris作为控制点(插图1,R节点,化石记录为89 MA)(Pryereta1.,2004).MULTIDIVTIME中的Markov链运行10代,每100代取样一次,产生总共10000个树,Markov链第一次取样前的1000 个树为老化(burn—in)样品舍弃.2结果2.1系统发育关系新测定的12种里白科植物的叶绿体atpB,rbcI和rps4基因序列的GenBank收录号见表Ⅱ.结合已经发表的里白科植物及其近缘类群的相应基因序列(表Ⅲ)进行分析.在对位排列矩阵中,3个基因片段的序列长度,可变位点及所占比例,信息位点及所占比例的情况见表Ⅳ.分别以Matoniapectinata或者DipterisCOn—ugata+Cheiropleuriabicuspis为外类群构建系统树,显示MP和BI系统树的拓扑结构完全一致,只在分支支持率上存在差异.本文只显示以Matonia pectinata为外类群所构建的系统树.其中用MP方法所获得系统树的数目(Numberoftrees),树长(Treelength),一致性指数(Consistencyindex,CI)和存留指数(Retentionindex,RI)见表Ⅳ.系统发育分析支持里白科为一个单系群,无论是MP的抽样白展值(Bootstrapvalue,BS值),还是贝叶斯分析的后验概率(PosteriorProbabilityvalues,PP值)均为100.这里所分析的里自科所有种类构成3个支系:较早分化出来的支系由假芒萁(Sticherus),单种属Stromatopteris和一种Gleichenia(G.di—carpa)构成(这里称SSClade,插图1);所有的里白种类(Diplopterygiurn)和另一种Gleichenia(G.japonica)聚成一支系(这里称DiplopterygiumClade,插图1);所有芒萁种类(Dicranopteris)和Gleichenelliapectinata聚成另一支系(这里为Di-第1期李春香等:里白科植物的系统发育和分歧时间估计——基于叶绿体三个基因序列的证据67cranopterisClade,插图1).其中后两个支系的支持率(无论BS值,还是PP值)均较高,达到9O%以上.对于SSClade而言,用联合序列数据构建的系统树的BS值和PP值均为100,但单独的序列分析中除了r6cL和rps4贝叶斯分析的PP值较高(100%)外,其他单独的序列分析的统计支持率均较低.表Ⅱ本文用于序列测定的样品及相关信息Sampletaxausedinsequenceanalysisandtheirinformation2.2速率检验和分歧时间推测LRT结果显示里白科植物的atpB,rbcL,rps4和3个基因片段联合序列的演化速率均拒绝分子假设(表Ⅳ).因此.我们用宽松条件下的分子钟估测分歧时间.结果显示:现代里白科植物起源于早白垩世(表,1和插图1,Gleicheniaceae.节点E1,111140Ma).其主要分支类群随后发生多样性分化(表,1和插图1,节点E2,84—113Ma);里白属(表,和插图1,Diplopterygium,节点E3,40—64Ma)和芒萁属(表Y和插图1,Dfr&Prs,节点E4,36—5OMa)的快速辐射演化均发生在古近纪.3讨论3.1里白科植物的系统演化关系系统发育分析结果显示里白科为一自然类群,里白科应包括产于新卡里多尼亚的单种属Stroma-68古生物第49卷表Ⅲ从基因库下载用于本文系统发育分析的分类群及其DNA序列信息GenBankaccessionnumbersofdownloadedDNAsequencesusedinthisstudy基因库序列号基因库序列号物种GenBankAccessi.nN..物种GenBankAccessionN..SpeciesSpeciesrbcLatpBrps4rbcLatpBrps4c^.p￡"6"户uO5607AY612692AY61264GleicheniadicarpaAF313584AF313550AF313559(BI.)C.PreslR.Br.DploYg"聊".ft赶一AY612695AY612657Gf^".,.P.uO5624一一(Hook.)A.R.Sm.Spreng.DicranopterislinearisMatoniapectinataU18626AY612694——UO5634AY6l2704AY612666(Burm.)Underw.R.Br.SticheFHSpalmatusDipterisconjugataReinw.U05620AY612696AY612658AY612684AY216711AY61267 1(Underw.)Cope1.GleichenellapectinataStromatopterisAY612677AY612697AY612659AY612685AY216712AY612674(Willd.)Chingmonili,0rmisMett.E1atoBE29957lOOI.........一100R62■一1O01O0-DipIopterygiumchinensis'DipIopteo'giumsimulans.D.pIopterygiuntblotianq.,JieIopteo'giumglaucum-Dlopteryglumlaevissima.DIopterygiumglaucoides.DfpIopterygiumrH-DipIopterygiumbarteroj?if.Dictattopterisg喈atttea-Diclattopteri,spedataDicranopterisampla.DicranopterislinearisQ7Dicranoptelislinearis~31eichenellapeetinata"SoomatoptetismoniliforntisGleicheniadjcnrPn'SticheruspahnatusSticheru~laevlatusCheiropleuriabicuspisDipterisConiugataMntaniape~'tittata插图1分别基于atpB,rbcL,rps4和3个基因片段联合数据构建的里白科植物系统发育树.分支上方数字为贝叶斯演绎法的后验概率值(×ioo),分支下方数字为简约法1000次重抽样分析自展值,El5,R为分歧时间估算时的估算点和参照点. ThephylogenetictreesofGleicheniaceaeconstructedbasedonatpB,rbcL,rps4,andcombine ddata.Posteriorprobabilityva1ues(×100) ofBayesianinferenceanalysisareshownabovebranches,bootstrapvaluesof1000maximu mparsimonyahalysisreplicatesareshownbelowbranches,El一5,Rarethenodesofmolecularageestimatesandfossilageconstraint.基'I一'''.r一盎∞rr.薯ku一0口一一U∞∞k鱼譬≈kQBlU∞∞第1期李春香等:里白科植物的系统发育和分歧时间估计——基于叶绿体三个基因序列的证据69分子钟假设的似然值比率检验(LRT) LikelihoodratiotestofrateCOnstancytopteris在内.但是系统发育分析结果和传统的属级分类间存在明显的分歧.虽然里白属(Dop￡Prg",")的种类形成统计支持率很高的支系,但是其范围需要重新界定.由于Gleicheniajaponica落入Diplopterygium支系内,因此里白属应包含Gleichenia的部分种类;Gleic'henelliapectinata与芒萁属构成一个支系,与芒萁属具有较近的亲缘关系,可以将其置于芒萁属(Holttum.1973;TryonandTryon,1982;KramerandGreen,1990).Gleichenia是多系发生的,所分析的两种Gleichenia并没有聚在一起,而是分别落在两个不同的支系中,这一结果暗示Gleichenia可能不是一个自然的类群,但这只是根据现有资料进行的初步分析,还需要尽量将归入Gleichenia种类进行分析,才能得出结论.另外,假芒萁属(Sticherus)在其形体及分枝图式上与芒萁属(Dieranopteris)极其相似,而系统发生分析的结果显示假芒萁与芒其的关系较远,而与单种属Strom—atopteris和部分Gleichenia种类具有一定的亲缘关系,但是单个基因序列分析的统计支持率并不是很高,还需要进一步研究.系统发育分析和分歧时间估算的结果也暗示里白科生态地理分布上的演化意义.假芒萁,单种属Stromatopteris和Gleicheniadicarpa构成的SS支系均属旧大陆热带分布的种类,属典型的热带属种; 而芒萁(这里包括部分的Gleic'henella)和里白属主要分布于亚热带及热带山地,其起源时间明显晚于SS支系;芒萁属分布的最高海拔达2250in,而里白属的分布的最高海拔达3400m,其起源时间又明显早于芒萁属,由此我们可以推测里白科植物是旧大陆热带起源的一个古老类群.有可能从热带地区扩散到亚热带地区,从高海拔地区扩散到低海拔地区.3.2里白科植物主要分支类群起源时间与化石记录相比较古植物学资料显示里白科是非常古老的植物类群,具有悠久的演化历史,最早的化石记录追溯到石炭纪,在北半球石炭纪和二叠纪地层中常被发现的稀囊蕨(Oligocarpia),我国二叠纪特有的晋囊蕨(C伽s厶ca),根据孢子囊结构及其组成囊群的特点,一般认为是里白科在古生代的代表植物(Tryon andTryon,1982;TaylorandTaylor,1993;Tid—wellandAsh,1994;Wangeta1.,2009).中生代的里白科植物,除了孢子囊及囊群与现代里白科植物一致外,连叶轴那种独具一格的假二歧式分枝的70古生物第49卷特点也都具备,其中最具代表性的为似里白(Gleichenites)(TaylorandTaylor,l993).Wang等(2009)详细地描述了中国从石炭纪到白垩纪和第三纪的里白科植物(27种),但是目前在里白科植物化石中,只有三叠里白(Diplopterygiumtriassica)被归入现代里白属,其化石见于四川的晚三叠世地层(陈哗等,1979,1987),囊群圆形,无柄,无囊群盖,具有4—6个孢子囊,与Gleichenites的囊群构造一致.作者将其归人现代属Dpz0r.yg"m,主要依据羽叶形态,脉序及孢子囊形态特征.由于缺乏更有说服力的解剖学和生殖构造及原位孢子证据, 故对其准确的归属尚有疑问(杨小菊,2002).本文的分歧时间显示,现存里白科的起源时问为1l1 140Ma,即早白垩世晚期,因此可以从分子系统学方面对Diplopterygiumtriassica的归属提供旁证,即分子系统学的证据不支持将该化石种归人现生属, 因为分歧时间的估计显示,现代里白科的起源时间不早于早白垩世晚期,而该化石种的地层记录为晚三叠世.化石纪录表明里白科植物在白垩纪达到繁盛高峰,特别是似里白植物非常发育,在南北半球均有广泛分布(Skog,2001),但是除了有存疑的化石种(Diplopterygiumtriassica)外,未见现代里白属在白垩纪之前出现.本文的分歧时间估计显示现代里白科植物的主要分支的多样性分化繁盛均发生于白垩纪以后,或更晚(里白属和芒萁属的快速辐射演化发生在中新世和渐新世),这与化石记录基本相吻合.致谢中山大学施苏华教授,黄椰林和周仁超博士提供诸多技术和学术意见,中国科学院南京地质古生物研究所王永栋研究员和杨小菊博士提供部分参考文献资料,谨表谢忱.参考文献(References)BierhorstDW,1968.OntheStromatopteridaceae(Faro.nov.)and onthePsilotaeeae.Phytomorphology,18(2):232—268.ChenY e(陈晔),DuanShu—ying(段淑英),ZhangYucheng(张玉成),1979.NewSpeciesoftheLateTriassicPlantsfromY anbian,Siehuan,I.JournalofIntegrativePlantBiology(植物),21(1):57—62(inChinesewithEnglishabstract).ChenY e(陈晔),DuanShu—ying(段淑英),ZhangYucheng(张玉成),teTriassicQinghefloraofSichuan.Botanical Researeh(植物学集刊),2:83158(inChinesewithEnglish abstract).ChingRen-chang,1940.OnthegenusGleicheniaSmith.Sunyatse nia,5(4):269288.ChingRen—chang(秦仁昌),1959.Gleieheniaceae.In:ChienSung—shu(钱崇澍),ChunWoon—yong(陈焕镛)(eds),FloraReipu—blicaePopularisSinicae,2.Beijing:SciencePress.116一l32 (inChinese).ChingRen—chang(秦仁昌),1978.TheChinesefernfamiliesand genera:systematicarrangementandhistoricalorigin.ActaPhy—totaxonomicaSinica(植物分类),16:1—19,16—37(in ChinesewithEnglishabstract).ChristensenC,l938.Filicinae.In:V erdoornF(ed.),Manualof Pteridology.Hague:NijhoffPublishers.522—55O. CopelandEB,1947.GeneraFilicum.WalthamMass:ChronicaBo—tanicCompany.1—247.DoyleJJ,DoyleJL,l987.ArapidDNAisolationprocedurefor smallquantitiesoffreshleaftissue.PhytochemiealBulletin,19:11—15.FarrisJS,KallersjoM,KlugeAG,BultC,1995.Testingsignifi—canceofincongruence.Cladisties,10:315—319. FelsensteinJ,1988.Phylogeniesfrommolecularsequences:infer—encesandreliability.Annua1ReviewofGenetics,22:521—565.HasebeM,OrnoriT,NakazawaM,SanoT,KatoM,1watsukiK, 1994.rbcLgenesequencesprovideevidencefortheevolutionary lineagesofleptosp.rangiateferns.ProceedingsofNationalA—cademyofSciencesUSA,91:573O一5734.HasebeM,W0lfPG,PryerKM,UedaK,SanoMR,GastonyGJ,Y okoyamaJ,ManhartJR,MurakamN,CraneEH,Hau—tierCH,HaukWD,1995.FernphylogenybasedonrbcLnu—eleotidesequences.AmericanFernJournal,85:134一l81. HolttumRE,19j9.G1eicheniaceae.FloraMalesianaII,1:1—36. HolttumRE,l973.Posingtheproblem.In:JermyAC,CrabbeJA,ThomasBA(eds),ThePhylogenyandClassificationofthe Ferns.BotanicalJournaloftheLinneanSociety,67(Supp1.1):l284.KramerKU,GreenPS,1990.Pteridophytesandgymnosperms.:KubitzkiK(ed.),TheFamiliesandGeneraofV ascularPlants.Heidelberg:Springer—V erlag.1～277. LiChun—xiang,LuShugang,Y angQun,noriginfor Polystichum(Dry.pteridaceae)basedonrbcLsequences.Chi—neseScienceBulletin,49:1146—115O.LittleDP,BarringtonDS,2003.Majorevolutionaryeventsinthe originanddiversificationoftheferngenusPolystichum(Dry.pteridaceae).AmericanJourna1ofBotany,90:5O8—514.NakaiT,195O.AnewclassmcationofGleiehenialses.Bulletinof theNationalMuseum(Tokyo),31:1—71.NylanderJAA,2004.MrModehest2.0.Programdistributedbytheauthor.EvolutionaryBiologyCentre,UppsalaUniversity.PichiSermolliREG.1977.TentamenPteridophytorumgenerain taxonomicumordinemredigendi.Webbia,31:313—512.PryerKM,SehuettpelzE,WolfPG,SchneiderH,SmithAR.CranfillR,2004.Phylogenyandevolutionofferns(monilo—第1期李舂香等:里白科植物的系统发育和分歧时间估计——基于叶绿体三个基因序列的证据71phytes)withafocusontheearly】eptosporangIacedivergences. AmericanFernJournal,91(10):lj821598.RonquistF.HuelsenbeckJP,2003.MrBayes3:Bayesianphyloge neticinferenceundermixedmodels.Bioinformatics,19:1572一l574.SchiettpelzE.PryerKM,2007.Fernphylogenyinferredfrom400leI)tosporangiatespeciesandthreeplastidgenes.Taxon.56:897906.ShiShu—hua(施苏华).ZhangQun(章群),ChenYue—qin(陈月琴),TangShaoqin(唐绍清),QuLiang—hu(屈良鹄),l996. AsimplemethodforisolationoftotalRNAandI)NAfromsili cageldriedandfreshleavesofplants.ActaScientiarumNatura—liumlJniversitatisSunyatseni(中山大学).35:1O3105 (inChinesewithEnglishabstract).SkogJE,2001.BiogeographyofMesozoiclept0sp.rangiateferns relatedtuextantferns.Brittonia.53.236269.SmithAR,PryerKM-SchuettpelzE.KorallP,SchneiderH,WolfPG.2006.Aclassif1can0nforextantferns.Taxon,55:70731.SwoffordDI,2003.PAUP.Phylogeneticanalysisusingparsimo ny(andothermethods)version4(computerprogram).Si nauer,Sunderland.MA.TaylorTN,TaylorEI,1993.TheBiologyandEvolutionofFossil Plants.EnglewoodCliffs:PrenticeHal1.1—982. ThompsonJD.GibsonTJ,PlewniakF,JeanmouginF,HigginsD G.1997.The('lustaXwindowsinterface:flexiblestrategiesfor multiplesequencesalignmentaidedbyqualityanalysistools. NuclearAcidsResearch,24:4876～4882.ThorneJI,KishinoH,2002.Divergencetimeandevolutionary rateestimationwithmultilocusdata.SystematicBiology,51: 689702.TidwellWD,AshSR,l994.AreviewofselectedTriassictoEarly Cretaceousferns.JournalofPlantResearch,107:4J7442. TryonRM,TryonAF,1982.FernsandAlliedPlants,withSpe cialReferencetoTropicalAmerica.Heidelberg:Springer.83—97.WallaceJW,PoznerRS,OomezID,1983.Aphytochemiealap—proachtotheGleicheniaceae.AmericanJournalofBota?。

收稿日期:2023-02-12基金项目:国家自然科学基金(31572142,31000907);宁波市公益类科技计划(2021S016,202002N3001);公益性行业(农业)科研专项(201403032)作者简介:宋慧(1979 ),女,甘肃兰州人,副研究员,博士,主要从事瓜菜分子育种与生物技术研究,E-mail:975281674@㊂文献著录格式:宋慧,古斌权,李林章,等.中印南瓜自交系田间耐热特性鉴定研究[J].浙江农业科学,2023,64(5):1050-1054.DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.20221253中印南瓜自交系田间耐热特性鉴定研究宋慧,古斌权,李林章,黄芸萍,张香琴(宁波市农业科学研究院蔬菜研究所宁波市瓜菜育种重点实验室,浙江宁波㊀315040)㊀㊀摘㊀要:随着我国平均气温逐年的升高,高温发生时间前移,持续时间延长,南瓜定植之后极易遭受高温胁迫㊂建立南瓜田间早期耐热性鉴定方法,对品种进行耐热性评价筛选,是缓解高温热害胁迫经济有效的措施㊂本试验以中国南瓜ˑ印度南瓜自交系为试验材料,在自然高温环境下,通过比较植株两叶一心期㊁五叶一心期㊁团棵期和伸蔓期4个时期的单株叶片萎蔫程度,计算株系热害指数,经过多重比较,确定南瓜热胁迫的敏感时期,建立南瓜田间早期耐热鉴定方法㊂利用供试材料的单瓜种子数目,检验田间评价的准确性㊂结果表明,南瓜团棵期的热害指数变异系数最大,是南瓜植株对高温胁迫的敏感时期㊂利用田间热害指数和单瓜种子数目2个指标可综合判断中印南瓜自交系的耐热特性㊂关键词:中国南瓜;印度南瓜;远缘杂交;耐热性;单瓜种子数中图分类号:S642.1㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:0528-9017(2023)05-1050-05㊀㊀南瓜是全世界普遍种植的大众化优良蔬菜㊂中国南瓜和印度南瓜是我国目前主要种植的南瓜栽培种㊂印度南瓜口味甜香粉面,深受消费者喜爱,但耐高温特性差㊂随着全球气候变暖,选育耐热的印度南瓜新品种,是南瓜产业健康发展的新需求㊂中国南瓜蕴含丰富的耐热基因,课题组通过中国南瓜ˑ印度南瓜远缘杂交和胚胎拯救技术,获得中印南瓜远缘杂交种E0[1];并利用实验室苗期耐热性鉴定方法[2]筛选到耐热株系㊂这些株系的耐热特性还需经过田间鉴定㊂作物在田间不同发育时期对高温的敏感程度不同㊂周伟辉等[3]通过比较水稻不同生育期蛋白表达差异,选择变异幅度最大的抽穗期作为水稻对高温的敏感期㊂朱亚迪等[4]研究发现,玉米的大喇叭口期正值夏玉米雌㊁雄穗分化的关键时期,对温度敏感,此期遭遇高温胁迫将导致产量显著下降㊂随着我国平均气温逐年增加,高温发生时间前移,持续时间延长,导致南瓜定植之后,极易遭受高温胁迫㊂为了明确南瓜生长早期耐热特性的田间表现规律,确定南瓜热胁迫的敏感时期,本研究在2020年秋季的高温期间,针对南瓜定植后的两叶一心期㊁五叶一心期㊁团棵期和伸蔓期4个时期,进行田间耐热特性调查㊂统计单瓜种子数目,验证田间耐热特性鉴定结果,为定向选育中印南瓜耐热优良自交系提供材料和鉴定依据㊂1　材料与方法1.1㊀试验材料㊀㊀首先使用11份南瓜材料,确定南瓜田间热胁迫的敏感时期㊂11份材料包括宁波市农业科学研究院蔬菜研究所自主选育的中印南瓜自交系20F1㊁20F2㊁20F3㊁20F4㊁20F5㊁20F6㊁20F7㊁20F8和20F9,以及搜集引进的2份印度南瓜商品种20F10(贝贝南瓜)和20F11(贵族南瓜)㊂再调查11份材料的单瓜种子数目,验证田间耐热性鉴定的结果㊂最后对2019年通过苗期电导率鉴定筛选获得的10份中印南瓜远缘杂交后代[2]进行田间耐热性鉴定,结合单瓜种子数筛选耐热南瓜材料㊂1.2㊀试验方法㊀㊀据‘2020年中国气候公报“分析[5],2020年全国平均气温(10.25ħ)较常年偏高0.7ħ;浙江㊁江西㊁广东和福建4省为1961年以来历史最高㊂本研究试验园区恰位于浙江省宁波市(120ʎ55ᶄ~122ʎ16ᶄE,28ʎ51ᶄ~30ʎ33ᶄN),2020年7 8月大棚内最高温长期超过40ħ,南瓜在此高温期间,从两叶一心期生长至伸蔓期㊂随即调查11份南瓜植株的两叶一心期㊁五叶一心期㊁团棵期和伸蔓期4个时期的耐热特性㊂先以株系内每个单株每片叶子的萎蔫程度为测量单位,根据公式计算每株的热害指数=ð(各级萎蔫叶片数ˑ该萎蔫级值)/(调查总叶片数ˑ最高级值);再计算株系的热害植株均值㊂热害指数显著较低的材料确定为耐热南瓜,热害指数显著较高的材料确定为不耐热南瓜㊂叶片萎蔫分级标准为:0级,无萎蔫症状;1级,叶片边缘萎蔫;2级,叶片沿着中心叶脉两侧萎蔫;3级,叶片沿着掌状叶脉呈五爪状萎蔫;4级,叶片五爪状萎蔫严重;5级,生长点萎蔫(图1)㊂数据通过SPSS软件ANOVA和多重比较分析,株系间差异显著的时期,是植株热胁迫的敏感时期,该时期是南瓜耐热特性田间表型鉴定的最佳时期㊂统计2019年通过苗期电导率鉴定筛选的10份耐热中印南瓜远缘杂交后代[2]及对照材料在团棵期的热害指数,热害指数显著较低的材料确定为耐热南瓜㊂此外,选择2份耐热表现有差异的株系(20F5和20F7),进行畦面覆盖稻草和畦面不覆盖稻草2种处理的比较,调查两叶一心期㊁五叶一心期㊁团棵期和伸蔓期4个时期的热害指数,比较覆盖稻草对降低南瓜高温胁迫的作用㊂图1㊀南瓜田间耐热特性评价指标㊀㊀供试材料在采收之后统计单瓜饱满种子数㊂数据使用SPSS软件ANOVA和多重比较分析,比较材料间饱满种子数目的差异㊂单瓜种子数目多,表明受热胁迫伤害小,植株表现耐热;反之,种子数目少,表明受热胁迫伤害大,植株表现不耐热㊂2　结果与分析2.1㊀南瓜在热胁迫条件下的热害指数变化规律㊀㊀由表1可以看出,11个南瓜株系在热胁迫条件下的热害指数变化趋势基本相同㊂即在两叶一心期时热害指数最低,表现为对热胁迫不敏感;随着植株长大,热害指数升高,植株对热胁迫产生抵御反应;植株在团棵期的时候,热害指数达到最大,到伸蔓期的时候,热害指数开始下降㊂表1㊀11份南瓜株系在4个时期的热害指数多重比较材料热害指数两叶一心期五叶一心期团棵期伸蔓期20F10.09ʃ0.01a0.40ʃ0.00bc0.58ʃ0.01def0.46ʃ0.00cd 20F20.02ʃ0.02a0.45ʃ0.14c0.62ʃ0.01efg0.49ʃ0.01d 20F30.02ʃ0.01a0.40ʃ0.01bc0.39ʃ0.04b0.29ʃ0.01a 20F40.10ʃ0.04a0.44ʃ0.03c0.52ʃ0.01de0.42ʃ0.01c 20F50.08ʃ0.02a0.32ʃ0.01b0.26ʃ0.03a0.36ʃ0.02b 20F60.17ʃ0.09a0.22ʃ0.07a0.46ʃ0.04bcd0.37ʃ0.05b 20F70.26ʃ0.03a0.37ʃ0.02bc0.34ʃ0.02b0.55ʃ0.03e 20F80.36ʃ0.03b0.43ʃ0.03c0.64ʃ0.01efg0.32ʃ0.00ab 20F90.02ʃ0.01a0.31ʃ0.00b0.59ʃ0.03def0.36ʃ0.01b 20F100.07ʃ0.01a0.60ʃ0.02d0.74ʃ0.03g0.49ʃ0.00d 20F110.01ʃ0.00a0.46ʃ0.02c0.72ʃ0.01fg0.68ʃ0.02f ㊀㊀注:同列数据后无相同小写字母表示不同材料间差异达显著水平(P<0.05)㊂表2~3同㊂2.2㊀南瓜田间热胁迫的敏感时期和耐热材料田间筛选㊀㊀11份南瓜株系材料在4个时期的热害指数显示,团棵期的变异系数变异幅度最大,表明该时期的南瓜植株对温度敏感(表1)㊂利用团棵期的热害指数能够最大范围地区分材料的耐热特性,是田间耐热性鉴定的最佳时期,也是田间管理最佳的遮光补水降温时期㊂最终确定南瓜早期耐热特性田间鉴定方法,在南瓜植株进入团棵期,如遇高温天气,可统计株系单株叶片萎蔫程度,通过计算热害指数和多重比较,判断株系耐热特性,热害指数显著低的材料确定为耐热南瓜㊂供试的11份南瓜材料中,20F3㊁20F5㊁20F6和20F9的热害指数显著较高,确定为耐热南瓜;20F11的热害指数显著较低,确定为不耐热南瓜㊂2.3㊀11份材料的平均单瓜种子数比较㊀㊀11份材料的平均单瓜种子数多重比较见表1和图2㊂材料之间的单瓜种子数差异显著,单瓜种子数显著高的材料确定为耐热南瓜,故筛选出20F3㊁20F5㊁20F6和20F1为耐热南瓜,以及20F9㊁20F10和20F11为不耐热南瓜㊂通过田间耐热性鉴定和单瓜种子数2种方法共同筛选到的耐热材料是20F3㊁20F5和20F6,不耐热材料是20F11㊂比较有争议的材料是20F9,田间鉴定判断20F9为耐热材料,但是它的单瓜种子数仅为16.22,显著低于其他材料㊂2.4㊀覆盖稻草对提高南瓜耐热特性的作用㊀㊀由表2可以看出,稻草覆盖可以显著降低高温胁迫对南瓜植株的伤害,特别是在团棵期和伸蔓期,降低伤害的效果更显著㊂比较20F5和20F7覆盖稻草和不覆盖稻草最后的单瓜种子数(表2和图3),可以看出,覆盖稻草的20F5和20F7种子数比不覆盖稻草的20F5和20F7单瓜种子数多,但㊀㊀柱上无相同小写字母表示不同材料间差异达显著水平(P< 0.05)㊂图4~5同㊂图2㊀11份南瓜材料单瓜种子数多重比较是20F5的2种处理,单瓜种子数差异不显著, 20F7的2种处理差异显著,表明耐热的材料即使不覆盖稻草也有自身的耐热特性保护,而不耐热的品种需要额外的降温保护㊂表2㊀20F5和20F7在不同处理下的热害指数多重比较材料及处理热害指数两叶一心期五叶一心期团棵期伸蔓期20F5-无稻草0.03ʃ0.07a0.32ʃ0.01c0.54ʃ0.10d0.16ʃ0.01a 20F5-稻草0.10ʃ0.14a0.14ʃ0.08a0.05ʃ0.11a0.50ʃ0.01c 20F7-无稻草0.00ʃ0.15a0.32ʃ0.02c0.47ʃ0.02c0.36ʃ0.00bc 20F7-稻草0.37ʃ0.00b0.18ʃ0.16b0.18ʃ0.04b0.26ʃ0.05ab图3㊀耐热材料20F5和不耐热材料20F7在不同处理下的单瓜种子数比较2.5㊀利用田间表型鉴定和单瓜种子数目二次鉴定耐热株系的耐热性㊀㊀由表3和图4可以看出,10份利用实验室苗期耐热性鉴定筛选到的耐热株系,在田间团棵期的热害指数分布在0.09~0.33,普遍表现耐热㊂其中第5㊁6㊁7号材料热害指数较小,耐热性更强㊂10份耐热材料的单瓜种子数目也较多,为165~277粒,表明10份材料在高温胁迫之后,结实正常,表现为耐热㊂其中第5和9号材料的单瓜种子数更多,判断为耐热㊂最终选择第5和9号材料进一步纯化,得到中印南瓜自交系耐热核心种质㊂表3㊀10份耐热材料的团棵期热害指数多重比较材料编号团棵期热害指数10.31ʃ0.02c20.33ʃ0.01c30.17ʃ0.02ab40.33ʃ0.05c50.10ʃ0.02a60.11ʃ0.03a70.09ʃ0.00a80.29ʃ0.01c90.30ʃ0.02c100.20ʃ0.04ab图4㊀10份前期鉴定为耐热南瓜材料的单瓜种子数多重比较3　讨论3.1㊀单一使用结实率鉴定南瓜的耐热特性存在片面性㊀㊀高温胁迫对植物整个生长发育进程都有影响,这使得作物的耐热机制非常复杂,且多为数量性状[6]㊂在植株生长早期,高温胁迫破坏叶片光合结构,降低光合色素含量和酶活性,使光合速率下降,阻碍植株叶片生长,导致干物质积累不足,造成玉米籽粒产量下降㊂在植株花芽分化期和开花期遭遇高温,会影响植物的配子形成㊁花粉发育或者导致细胞质雄性不育[7-9],使水稻[10]㊁玉米[11]等作物的结实率大幅度下降,严重减产,甚至颗粒无收㊂因此,结实率已经被广泛用于水稻[12-13]㊁玉米[14]㊁大豆[15]等作物耐热特性研究的鉴定指标㊂然而,作物的耐逆特性是一种综合性状,是众多因素与机制共同作用,最终通过各指标在不同生育时期的一系列变化表现出来,因此,单一使用结实率鉴定作物的耐热特性存在片面性㊂本研究中,利用田间早期耐热性鉴定和单瓜种子数目2种方法评价20F9的耐热性,结果存在矛盾㊂20F9田间表现耐热,但是它的单瓜种子数目显著降低㊂通过观察20F9的雌雄花,我们发现,在正常条件下,20F9的花粉多㊁散粉好,但是雌蕊黏附花粉的能力较弱,20F9本身结实能力弱㊂因此,高温条件下20F9单瓜种子数目低,是其种性的表现,与高温胁迫无关,判断20F9的耐热特性需要考虑田间鉴定结果㊂作物的耐热特性是一种综合性状,建立多时期㊁多维度㊁多指标的耐热性评价体系,能够全面系统地评价作物的耐热特性,解析耐热机制㊂杨杰等[16]在自然高温环境,以玉米果穗结实率为主要评价指标,结合玉米空秆率等表型,鉴定玉米骨干亲本耐热性,并依照新疆当地高温干旱的气候特点,建立了一套玉米田间耐热鉴定体系㊂本研究利用田间早期耐热性鉴定和单瓜种子数目2个鉴定指标,针对2019年课题组通过实验室苗期电导率检测,筛选到的10份耐热中印南瓜自交系,进行二次鉴定,鉴定结果与实验室鉴定结果吻合,表明田间和实验室鉴定结果的可靠性㊂3.2㊀南瓜田间早期耐热性鉴定指标的可靠性㊀㊀南瓜耐热性鉴定研究比较集中在实验室两叶一心期的酶活性[17]㊁电导率[2]等,田间耐热性鉴定指标和方法涉及较少㊂然而,作物在不同发育时期对高温都存在敏感反应㊂郭小红等[18]以1124份大豆育种材料为研究对象,选择种子萌发期,在25ħ和38ħ温度处理下测定种子的发芽率,以38ħ/25ħ的相对发芽率评价大豆种质的耐热性㊂廖江林等[19]公开了一项在水稻灌浆期,利用大田自然高温鉴定种质耐热性的量化方法㊂刘怡辰等[20]在抽穗扬花期进行高温处理,研究面粉品质等指标,综合判断小麦的耐热性㊂陈中钐等[21]研究高温胁迫下苦瓜幼苗的酶活㊁叶绿素含量等生理生化指标,建立耐热性评价数学模型㊂为此,本研究以南瓜定植后叶片萎蔫的田间表型为调查指标,通过计算热害指数,建立了南瓜团棵期田间早期耐热性鉴定的量化方法㊂经过单瓜种子数目结果的验证,田间鉴定结果具有可靠性㊂参考文献:[1]㊀宋慧,王迎儿,黄芸萍.中国南瓜(Cucurbita moschata)ˑ印度南瓜(C.maxima)种间杂交幼胚培养和杂种真实性鉴定[J].植物遗传资源学报,2019,20(6):1486-1493.[2]㊀宋慧,王迎儿,古斌权,等.中印南瓜远缘杂交种自交系耐热性评价[J].植物遗传资源学报,2020,21(6):1577-1585.[3]㊀周伟辉,薛大伟,张国平.高温胁迫下水稻叶片的蛋白响应及其基因型和生育期差异[J].作物学报,2011,37(5):820-831.[4]㊀朱亚迪,王慧琴,王洪章,等.不同夏玉米品种大喇叭口期耐热性评价和鉴定指标筛选[J].作物学报,2022,48(12):3130-3143.[5]㊀董文杰.中国气候公报[M].北京:气象出版社,2007.[6]㊀陶磊.水稻开花期耐高温QTL分析及精细定位[D].雅安:四川农业大学,2020:58-60.[7]㊀GUL I S,HULPIAU P,SAEYS Y,et al.Metazoan evolution ofthe armadillo repeat superfamily[J].Cellular and MolecularLife Sciences,2017,74(3):525-541.[8]㊀ZHU J G,YUAN S J,WEI G,et al.Annexin5Is Essential forPollen Development in Arabidopsis[J].Molecular Plant,2014(4):751-754.[9]㊀HRUBÁP,HONYS D,TWELL D,et al.Expression ofβ-galactosidase andβ-xylosidase genes during microspore andpollen development[J].Planta,2005,220(6):931-940.[10]㊀潘孝武,黎用朝,刘文强,等.水稻资源开花期耐热性的全基因组关联分析[J].植物遗传资源学报,2021,22(2):407-415.[11]㊀李淑君,张丕辉,付忠军,等.玉米花期不同种质资源耐热性鉴定与分析[J].玉米科学,2019,27(4):22-31. [12]㊀李培德,周雷,李珍连,等.耐热水稻种质资源的筛选与初步评价[J].湖北农业科学,2019,58(24):20-22,26.[13]㊀刘友权,王威.新审杂交水稻品种耐热性评价[J].安徽农业科学,2022,50(2):42-44,108.[14]㊀文章,王芳,谢刘勇,等.玉米自交系花期耐热能力的评价[J].玉米科学,2019,27(6):31-38.[15]㊀靳路真.大豆品种(系)耐热性鉴定及其生理机制研究[D].沈阳:沈阳农业大学,2016:102-105.[16]㊀杨杰,韩登旭,阿布来提㊃阿布拉,等.新疆自然高温环境下玉米自交系开花期耐热性鉴定与评价[J].西北植物学报,2021,41(8):1380-1390.[17]㊀智海英,岳青,陈敏克,等.南瓜属4个种及种间杂种耐热性比较[J].山西农业科学,2020,48(3):327-329,376.[18]㊀郭小红,韦清源,汤复跃,等.萌发期耐高温大豆种质资源筛选及耐热指标评价[J].大豆科学,2022,41(5):513-519.[19]㊀廖江林,黄英金.一种评比不同基因型水稻种质灌浆期耐热性的量化方法:CN111802192A[P].2020-10-23. [20]㊀刘怡辰,仵妮平,TOKTAPO B H,等.不同小麦品种面粉品质性状对花期高温响应及耐热性评价[J].新疆农业科学,2022,59(3):541-550.[21]㊀陈中钐,杜文丽,许端祥,等.苦瓜苗期耐热性综合评价及其鉴定指标的筛选[J].江西农业学报,2022,34(3):1-7.(责任编辑:王新芳)。