ELISA检测乙肝抗体 PPT

由于乙肝病毒容易发生变异，再加上乙肝定性检 测方法的局限性，会出现假阴性结果，导致不能 及时发现乙肝的感染，也就不能得到及时的治疗， 对医护人员和其他患者也存在着被感染的威胁。 乙肝五项定量应用目前最先进的化学发光法检测， 避免了假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对 乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是检验发展 的趋势。
定量检测意义
监测疾病发展
评估药物疗效 指导疫苗接种
国内疫苗评价标准
无应答者:无抗体产生 (5%) ---- 加强计量复种 低应答者:<10 IU/L (10%) ---- 加强计量复种 中应答者:10-100 IU/L (65%) ---- 无须复种 高应答者:>100 IU/L (20%) ---- 无须复种
ELISA检测灵敏低的原因及局限
ELISA法受其自身敏感性和特异性的限制; HBV S和前C基因区出现位点突变导致HBsAg和 HBeAg表达缺陷。 影响因素多,如加样时间,试剂平衡时间,样本溶 血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结 果,使弱阳性样本漏检。 急性感染的窗口期; HBsAg检测方法灵敏度不足; 血清亚型的漏检等。
慢性乙肝一些患者由于机体常缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg 表达较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况，而定量检 测则可避免这些情况的出现，为正确判断病情提供依据。
灵敏度如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA测不出抗原，而定 量检测具有极高的灵敏度，可发现极有可能同时检测出HBsAg和 HBsAb，血清中HBsAg含量与病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而 肝功能改变则与此种细胞免疫成正比。定量HBsAg是反映这一关系 的唯一手段。可发现低浓度的HBsAg携带者，特别是一些群体如医 务工作者及病人家属等。

乙肝五项
李成静
乙肝五项（酶联免疫法ELISA)
两对半：
表面抗原HBsAg ① 表面抗体HBsAb ② e抗原HBeAg ③ e抗体HBeAb ④ 核心抗体HBcAb ⑤

检验原理
表面抗原HBsAg 表面抗体HBsAb e抗原HBeAg e抗体HBeAb 核心抗体HBcAb

夹心法
竞争法
双抗体夹心法
乙肝表面抗原检验原理

采用抗体包被反应板，加入待测样本， 经孵育后，加入酶标抗体，当样本中存 在抗原时，该抗原与包被抗体结合并与 酶标抗体结合形成抗体抗原酶标抗体复 合物，加入底物产生显色反应，反之则 无显色反应。
乙肝e抗体检验原理（竞争法）

采用抗原包被反应板，加入待测样本， 同时加入酶标抗体，与抗原形成竞争结 合，如待测样本中抗体含量高，则酶标 抗体与抗原结合少，加入底物时显色淡， 反之显色深。
检验方法

表面抗原（两步法）
1.配置洗液（25倍稀释）。 2.根据标本数排板，多加两孔作为阳性对照。 3.加75ul待测样本和阳性对照于反应孔中。 4.封板，置37℃加速仪温育40min。 5.取出反应板，不洗，每孔各加酶50ul（即一滴）。 6.封板置37℃加速仪温育20min。 7.取出反应板，洗液洗5次，清水冲洗，吸水纸上拍干。 8.每孔各加显色液A和B各一滴，混匀。 9.显色蓝色为阳性，无色为阴性。

谢谢Βιβλιοθήκη 后四项（一步法）1.根据标本数排板，加阳性对照一孔。 2.加入血清50ul和阳性对照于反应孔中，加酶一 滴。 3.封板，加速仪温育20min。 4.取出反应板，用洗液洗5次，清水冲洗，板拍 干。 5.每孔各加显色液A和B各一滴，混匀。

目的：通过室内质控，可以及时发现检 测过程中可能存在的问题，并采取相应 的措施加以纠正，从而提高检测结果的 准确性和可靠性
实施：实验室应建立完善的室内质控体系， 并定期对检测过程进行质控，以确保检测 结果的准确性和可靠性
室间质评计划：制定并执行统一的质评计划，确保各实验室之间的质评活动相互协调
室间质评样品：由权威机构制备和分发统一的质评样品，各实验室使用相同的质评样品进行 检测
试剂质量不稳定：选择高质量的试剂，确保试剂在有效期内使用 试剂盒灵敏度低：调整试剂盒的灵敏度，提高检测的准确性 试剂盒特异性差：选择特异性好的试剂盒，避免交叉反应
试剂盒保存不当：按照试剂盒说明书正确保存试剂盒，避免受潮、污染等影响
自动化技术：提高ELISA检测 效率和质量的关键
智能化技术：实现ELISA检测 的自动化和智能化
通过将抗原或抗体与酶结合形 成酶标抗原或抗体，使其具有 酶的催化作用
酶联 测方法
在固相载体表面进行抗原抗体 反应，加入底物后根据颜色变
化判断结果
酶联免疫吸附试验具有灵敏度 高、特异性强、操作简便、易
于定量等优点
临床诊断：用于检测各种疾病相关的抗原、抗体和细胞因子等 食品安全：检测食品中的微生物、毒素和过敏原等 生物安全：检测实验室中的生物因子和微生物等 环保监测：检测环境中的污染物和有害物质等
ELISA检测技术在临床诊断中的应用：用于疾病早期诊断、疗效评估和预后判断 在科研领域的应用：用于疾病的基础研究和临床试验，提高研究质量和效率 未来发展趋势：随着技术进步和应用拓展，ELISA检测技术将更加便捷、准确和高效 展望：随着医疗科技的发展，ELISA检测技术将在未来发挥更加重要的作用
汇报人：
样本类型：血清、血浆、细胞培养 上清等

优点: 1. 特异性高、准确性好； 2. 实验操作简便，用时短。
缺点: 1. 应用范围较小，生产难度大。 ——需制备各种酶标抗原或抗体。
间接法ELISA
间接法ELISA是将酶标记在二抗上，当抗体（一抗）和包被 在酶标板的抗原结合形成抗原-抗体复合物后，再以酶标二抗和 复合物结合，通过测定酶反应产物的颜色可以（间接）反映一抗 和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量（见后图）。
洗涤3次，拍干
加底物溶液 (空孔除外)
避光 37℃, 10-30min
加终止液 (空孔除外)
加酶标抗体 (空孔除外)
上机检测、结果判定 (空孔调零)
双抗夹心法检测血清IL-2含量
设计加板次序 (空孔、阴、阳、标准)
加板 (阴、阳、标准、样)
37℃, 30min 洗涤3次, 拍干
加酶标抗体 (空孔除外)
酶标板
ELISA常用酶类
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
上式中，DH2为供氢体，H2O2为受氢体。
常用底物：
1. 邻苯二胺(OPD)，产物为橙红色（492nm检测）； 2. 四甲基联苯胺(TMB)，产物为蓝色，酸性条件下变为
谢谢！
xiexie!
ELISA试剂盒的组成
完整的ELISA试剂盒通常包含以下各组分： （1）已包被抗原或抗体的固相载体（俗称酶标板）； （2）酶标记的抗原或抗体（酶标记物）； （3）酶的底物； （4）参考标准品（定量试剂盒）及其稀释液； （5）酶标记物及样本的稀释液； （6）洗涤液（通常为浓缩液，用前按比例稀释）； （7）反应终止液； （8）封口膜若干、说明书一份。