单核细胞增生李斯特菌检验

乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析樊惠华，侯磊磊，方 莹，柴梅梅（榆林市食品检验检测中心，陕西榆林 719000）摘 要：为了提升食品检验检测机构对食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验能力，提高微生物实验室外部质量控制水平。

本实验室参加中国检验检疫科学研究院测试评估中心组织的ACAS-PT1108（2021）乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证，参考参试指导书、《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》（GB 4789.30—2016）、海博单增李斯特氏菌成套生化鉴定管和MicroScan WalkAway 40 Plus全自动微生物生化鉴定仪。

结果表明，参试样品编号21-T031为单核细胞增生李斯特氏菌，样品编号21-U887未检出单核细胞增生李斯特氏菌，经鉴定为伊氏李斯特氏菌，最终能力验证结果评价为满意，可见本实验室具有成熟的单核细胞增生李斯特氏菌检验能力。

关键词：乳粉；单核细胞增生李斯特氏菌；能力验证Results and Analysis of the Proficiency Testing of ListeriaMonocytogenes in Milk PowderFAN Huihua, HOU Leilei, FANG Ying, CHAI Meimei(Yulin Food Inspection and Testing Center, Yulin 719000, China)Abstract: In order to improve the ability of food inspection and testing institutions to detect Listeria monocytogenes in food and to improve the external quality control level of microbiology laboratory. The laboratory participated in the proficiency testing of Listeria monocytogenes in ACAS-PT1108 (2021) milk powder organized by the Testing and Evaluation Center of the Chinese Academy of Inspection and Quarantine Sciences. Reference was made to the test guidelines, the GB 4789.30—2016, the complete biochemical identification tubes of Listeria monocytogenes in Haibo and the MicroScan WalkAway 40 Plus automatic microbial biochemical identification instrument. The results showed that the sample number 21-T031 was detected as Listeria monocytogenes, and the sample number 21-U887 was not detected as Listeria monocytogenes, which was identified as Listeria.ivanovii. The final proficiency test results were satisfactory. It can be seen that the laboratory has a mature ability to test Listeria monocytogenes.Keywords: milk powder; Listeria monocytogenes; proficiency test李斯特菌属目前包括17种公认的短杆状革兰氏阳性菌，其中单核细胞增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌被认为是病原体[1]。

单核细胞增生李斯特菌污染调查及快速检验方法的比较余淑冰1 梁景涛1 周强忠1 孔繁钧1 陈庆韶1 李婉霞2单核细胞增生李斯特菌(LM)能引起人畜共患病，致病性强，临床病死率高达30%～70%。

目前，国际上对其研究非常重视，已将其列为90年代食品四大致病菌(致病性大肠菌、肉毒梭菌、亲水气单胞菌和LM)之一。

我国在LM研究及检验起步较晚，经验较少，1994年才颁布该菌的标准检验方法。

为了解食品中LM的污染状况，开展应用快速检验方法，作者于1996年5月至1997年4月对佛山地区的市场销售点，抽取6类不同的食品共309份，作为LM污染调查对象，同时根据现有的检验方法，探索出一种快速可行的检验方法，现报告如下：一、材料与方法1.样本来源：选取佛山市区5个肉菜市场的各个肉档、鱼档、烧腊档、菜农等6类食品，每类食品50份以上。

其中乳和水产品分别由水牛奶厂和水产加工场提供。

6类食品具体包括有：①生肉类：猪肉、猪肉馅、鸡肉、牛肉、羊肉。

②熟肉制品：猪肉、猪肉肠、鸡肉、牛肉。

③乳类：生牛奶、消毒牛奶。

④乳制品：冰淇淋、奶酪、酸奶、果奶。

⑤蔬菜：黄瓜、香菜(去根)、菠菜(去根)、菜花(指花菜)、莲藕。

⑥水产品：鱼、虾。

2.标准菌株：LM(54004和54007)、金黄色葡萄球菌、马红球菌(R.equi)由卫生部食品卫生监督检验所提供。

3.培养基和试剂：本实验室配制，并以有关阳性菌株进行质量控制。

4.试验动物：采用广东省卫生厅医用实验动物所饲养的瑞士小白鼠，选取体重在16～18 g之间作试验用。

5.试剂盒：由生物-梅里埃公司提供，使用时按说明书进行。

6.方法：按国标食品卫生检验方法GB4789.30-94进行。

二、结果1.6类食品检测情况：在受检的6类食品共309份中，检出阳性菌株16份(已由卫生部食品卫生监督检验所鉴定)，总污染率为5.18%(16/309)，其中在生肉、熟肉制品、生牛奶和水产品中均检出LM。

采用LB法检出率为62.5%(10/16)，EB法检出率为37.5%(6/16)，LB法明显高于EB法，见表1。

龙源期刊网 单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么作者：周林来源：《学习与科普》2019年第31期单核细胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范围当中。

就目前来看，免疫学检测方法和分子学检测方法是很多单增李斯特菌检测方法中使用最频繁的两种方法。

免疫学检测方法具有操作简便、时间短的特点，然而其非常依赖高特异性的抗体，结果容易出现失误，需要对检测结果进行详细判定。

和免疫学检测法相比，分子学检测方法具有灵敏度高、省时省力等特点，然而分子学检测方法在使用过程中需要较多的操作经验，同时不能在大批量检测中应用。

一、单核细胞增生李斯特菌概述（一）生物学特征单核细胞增生李斯特菌是一种革兰阳性短杆菌，其对营养的需求量较少，生长温度通常最低不能低于2摄氏度，最高不能超过42摄氏度，同时可以在弱酸、弱碱和6.5%NaCl肉汤中得到快速成长，并且能够形成β-溶血。

在其生长过程中还可以发酵出很多种糖类物质，按照O抗原以及H抗原能够分解成十三中血清型，其中1/2a与4b这两种类型在致病菌株中的占比最大。

（二）污染源及流行病学单核细胞增生李斯特菌是自然界中常见的一种致病菌，抗冻能力非常强，其主要传播路径是通过粪-口这种方式进行。

健康人粪便中的单核细胞增生李斯特菌携带率通常为0.6%至16.0%，然而奶制品、水产品以及家禽中均携带相应的单核细胞增生李斯特菌。

另外，单核细胞增生李斯特菌通过胎盘、黏膜、性以及产道鞥部位都可以进入到体内，从而导致感染。

单核细胞增生李斯特菌的致病性与其具有的毒作用、宿主的免疫状况以及年龄具有密不可分的关系，宿主的细胞免疫可以有效的解除单核细胞增生李斯特菌中存在的病菌。

各种免疫力弱的人群都属于易感人群，比如新生儿、四十岁以上的成人等。

健康成人感染后会出现和感冒相似的情况，然而其他免疫力功能较低的人可能会出现更加严重的症状，乃至会直接死亡。

二、相关检测技术（一）聚合酶链反应技术就目前来看，聚合酶链反应技术得到了广泛的普及与运用。

食品微生物期末考核题目：单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展姓名：学号：班级：单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展康阳妃西南大学食品科学学院，重庆400715摘要：单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患病的食源性致病菌之一，在自然界中分布广泛。

近年来，在许多国家，它是卫生部门重点监测的几种食源性致病菌之一。

本文介绍了单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性，流行病学特征。

总结了单核细胞增生李斯特氏菌现行有效的的常规和快速的检测方法及流程，并对各方法的优缺点进行了比较。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌；生物学特征；流行病学特性；检测；致病菌The progress of detection methods to ListeriamonocytogenesKang yangfeiCollege of Food Science ,Southwest University,Chongqing 400715Abstract:Listeria monocytogenes is one of foodborne pathogens that can cause zoonosis,it is found ubiquitously in the environment. In recent years, it is one of several kind of foodborne pathogens that the Health department focus on surveillance to in many countries.This paper introduce the biological and epidemiological characteristics of Listeria monocytogenes. Summarize the current effective conventional and rapid detection methods and processes of Listeria monocytogenes.Key words:Listeria monocytogenes; biological characteristics;epidemiological characteristics ; Detection;pathogens引言单核细胞增生性李斯特菌是一种短小的革兰氏阳性无芽胞杆菌，是一种人畜共患病的致病菌，可使人和动物患李斯特菌病。

食品中单增李斯特菌检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测实验目的1）了解单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性。

2）熟悉单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定方法。

基本原理单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)归属于李斯特菌属(Listeria)。

单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中唯一对人致病的病菌。

李斯特菌是一种细胞内寄生菌，它不仅可能存在于肉类产品中，也可能存在于乳制品、蔬菜、沙拉及海产品等日常食物里面。

此菌广泛分布于自然界中，在土壤、排污下水、地表水、青贮饲料、烂菜中均可分离到。

人也可作为无症状携带者。

据报道，健康人粪便中该菌的携带率为0.6％～16％，4％～8％的水产品、5％～10％的奶及其制品、30％以上的肉制品及15％以上的家禽均被该菌污染。

李斯特菌能在1～45℃的温度下生存，能在家用电冰箱的冷藏室内较长时间生长、繁殖。

该菌为革兰氏阳性短杆菌，有的菌体略弯曲，两端钝圆，大小约为0.4～0.5μm ′0.5～2.0μm。

多单在，有时是V字型排列。

无芽孢，不产生荚膜。

在陈旧培养物中或粗糙型菌落的菌体长度可达6～20μm 或更长的丝状。

在20～25℃培养时可产生2～4根鞭毛而运动，但在37℃培养时鞭毛发育不良，无运动性。

本菌需氧或兼性厌氧，生长温度为1～45℃，最适温度为30～37℃。

对营养要求不高，可在普通琼脂培养基中生长，但在血琼脂培养基或胰酪胴琼脂上生长更好。

加入0.2％～1％(W/V)的葡萄糖及2％～3％(V/V)的甘油生长更佳。

在含1%(W/V)NaCl的复合培养基中能生长。

在4℃可缓慢增殖，形成菌落约需7d。

在液体培养基中培养18～24h后，肉汤呈轻度均匀混浊，数天后形成粘稠沉淀附着于管底，摇动时沉淀呈螺旋状，继续培养可形成颗粒状沉淀。

不形成菌环、菌膜。

在营养琼脂上，光滑(S)型可形成直径0.5～1.5mm、圆形、露滴状半透明、低隆起、边缘整齐、表面有细致纹理的蓝灰色菌落，斜射光照射时，菌落呈特征性蓝绿光泽。

受控编号：
单核细胞增生李斯特氏菌检测原始记录表
检测项目：☑单核细胞增生李斯特氏菌检测依据：☑GB 4789.30-2016
样品状态：□液态☑固态□完好□已开封□其他：检测日期： 2023.12.4-12.6 环境条件： 25 ℃ 47 ％ RH
存放条件：□室温□冷藏☑冷冻检测仪器：☑生化培养箱WTHF1010A1-002 □电热恒温培养箱 WTHK1001A-1001
样品处理：1单核细胞增生李斯特氏菌检验：按无菌操作称取25g（mL）样品，加入225mL LB1增菌液中，研成匀浆制成混悬液，置30℃恒温培养24h，取上述增菌液0.1mL接种至10mL LB2增菌液中，混匀后置30℃恒温培养18h~24h。

委托单编号：
备注：1.“+”表示选择性平板上有可疑或典型菌落生长或生化试验呈阳性，“-”表示选择性平板上无可疑或典型菌落生长或生化试验呈阴性。

2.“ND”表示未检出。

检验员：复核人：审核人：。

单核增生李斯特氏菌检测概述单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的致病菌，能够在低温下生存繁殖，并在恶劣环境中形成生物被膜，使其对抗不良条件。

该菌可引起人类的李斯特菌病（Listeriosis），也是一种可以通过食品传播的重要病原体。

李斯特菌病在免疫功能低下的人群中很容易引起严重感染，包括孕妇、老年人、免疫抑制患者和新生儿。

检测单核增生李斯特氏菌的方法主要包括传统的培养方法和现代的分子生物学方法。

1.传统培养方法传统的培养方法是检测单核增生李斯特氏菌的主要方法之一、常用的培养基包括PALCAM（Polymyxin, Acriflavine, Lithium chloride and Cycloheximide）和OXOID Listeria Selective Agar等。

培养温度通常在30-37℃之间，因为单核增生李斯特氏菌可以在低温下生长。

在培养过程中，从食品样品或其他可能受污染的样品中提取菌落，并在培养基上进行培养。

培养时间通常为1-2天，培养过程中需要注意去除其他菌落的干扰。

2.分子生物学方法分子生物学方法是现代检测单核增生李斯特氏菌的常用方法，主要包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR等。

这些方法的优势在于其高度敏感性和特异性。

通过检测单核增生李斯特氏菌特有的基因或序列，可以快速准确地鉴定与检测其存在。

3.培养与分子生物学相结合的方法为了更好地检测单核增生李斯特氏菌，有些方法将传统培养与分子生物学相结合。

这种方法通常先进行培养，然后使用PCR或实时荧光定量PCR等技术进行进一步检测和鉴定。

这种方法较为耗时，但能够进一步提高检测的准确性。

需要注意的是，由于单核增生李斯特氏菌能够在低温下生存，因此在食品或样品中的检测非常重要。

常见的食品样品包括生肉、海鲜、冷冻食品、奶制品等。

对于食品企业来说，建立完善的食品安全管理体系和进行规范的监测是防止单核增生李斯特氏菌传播的重要措施。

李斯特氏菌的检验李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。

李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发觉的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。

单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。

它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。

它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的平安具有危急，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威逼人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必需加以重视。

李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。

肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证明是李斯特菌的感染源。

李斯特菌中毒严峻的可引起血液和脑组织感染，许多国家都已经实行措施来掌握食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。

其中单增李斯特菌是唯一能引起人类疾病的。

单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。

它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。

试验步骤1. 增菌培育将未开封的测试片贮藏在8℃的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。

在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。

取回的样品应在4℃下处理、存放和运输，假如是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。

取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培育4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，连续培育20h和44h.。

2. 分别共培育24h和48h后，取EB培育物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。

PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。

将OXA和PALCAM平板置于35℃培育24-48h，LPM平板在30℃培育24-48h。

食品中单核增生细胞李斯特氏菌快速检测研究单核细胞增生李斯特氏菌在病原学上作为一种人畜共患和食源性疾病的致病菌已得到世界范围普遍的公认。

近年来，如何分离和鉴定食品中单核细胞增生李斯特氏菌已成为研究热点。

本文结合近十年的各种该病菌的快速检测方法作了系统综述，介绍了针对该病菌的快速检测方法，如显色培养基快速检测方法、酶联免疫试验检测方法、结合单克隆抗体技术的免疫学检测方法、反转录-PCR 检测方法、生物芯片，以期对食品中单核细胞增生李斯特菌的检测起到帮助和指导作用。

标签：单核增生细胞李斯特氏菌；检测方法单核细胞增生李斯特氏菌是一种短小的革兰氏阳性无芽孢杆菌[1]，它能引起人畜的李氏菌的病，该病发病率较低，但致死率高达20%～30%[2]，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。

单核细胞增生李斯特氏菌广泛存在于自然界中，食品中存在的单核细胞增生李斯特氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。

本文拟对单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法及其当前存在的问题等作系统介绍，以期为进一步深入研究提供参考。

1快速检测方法1.1 显色培养基快速检测方法显色或荧光鉴别培养基的基本原理是针对李斯特氏菌的β-D-葡萄糖苷酶和毒力因子PI-PLC酶，设计相应的底物，加入到常规选择性培养基中，利用酶对底物的分解，产生荧光或显色物质，使其菌落形态或颜色不同于其他李斯特氏菌和非李斯特氏菌，从而实现对李斯特氏菌快速定性鉴定和菌落数目快速定量。

张淑红等[3]检测了显色培养基的特异性和灵敏度。

实验证明此种检测方法具有较高灵敏度、特异性和选择性，是非常有价值的分离平板。

1.2 免疫学检测方法1.2.1 酶联免疫试验检测方法（ELISA）早期起初人们采用简单直接的细胞计数法进行检测，运用细胞计量术对牛奶中的单核细胞增生李斯特氏菌进行检测。

但是由于病原微生物的含量很低，仅通过细胞计数的方法检测灵敏度无法达到。