可溶性血管内皮生长因子受体-1在子痫前期胎盘及在外周血的研究
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・206・ 中国妇产科临床杂志2 1生 旦箜!鲞箜 塑 ! Q !!!! !!!! !! !!: ! !:
可溶性血管内皮生长因子受体一1
在子痫前期胎盘及在外周血的研究
魏俊 梁梅英 孙蓬明 王大鹏 魏丽惠 ・论著・
【摘 要】 目的 研究可溶性血管内皮生长因子受体一1(sFlt一1)mRNA在正常妊娠和子痫前期胎盘中 的表达差异及相应的母体外周血中sFlt一1水平的变化。方法 选取15例子痫前期孕妇(子痫前期组)和14例 孕周与之相匹配的血压正常妊娠孕妇(对照组),用ELISA方法测定其外周血中sFh一1的水平;并应用实时荧
光定量PCR测定两组胎盘组织中sFlt一1 mRNA水平。结果 外周血中sFlt一1的水平子痫前期组明显高于对照 组,分别为(16.9±8.32) g/L、(5.48±2.09)/ ̄g/L,两者差异有显著性(P<O.05)。sFh一1 mRNA在两组 胎盘中均有表达,在子痫前期组的表达明显高于对照组的表达分别为(4.11±4.09)、(1.69±1.61),两者差异
有显著性(P<O.05)。子痫前期组血清sFlt一1水平与24 h尿蛋白定量呈明显正相关(r一0.741。P<O.05)。结 论sFlt一1 mRNA在子痫前期组孕妇的外周血中及胎盘组织表达升高,可能与子痫前期的病因及病理生理有
关。 【关键词】 可溶性血管内皮生长因子受体一1(sFh一1);子痫前期;实时定量PCR;酶联免疫吸附测定
Messenger RNA expression of sFIt一1 in placenta and peripheral blood of preeclampsia WEI J un。LIANG Meiying,SUN Pengming,et a1.
(Department of Obstetrics and Gynecology,Peking University People’S Hospital,Beijing 100044,China)
[Abstract】 Objective To investigate the mRNA expression of sFlt一1 in placenta and serum in patients with preeclampsia.Methods The expression of sFlt一1 mRNA was detected by two—step real—time quantitative poly— merase chain reaction(real—time PCR).Fifteen and fourteen placental specimens were collected from preeclampsia group and healthy control with matched gestational age。respectively.Maternal sFltl concentration in serum before labor was measured by enzyme linked immunosorbent assay(EI ISA).Results Maternal serum sFlt一1 was signifi—
cantly higher in preeclampsia group than control,(16.9±8.32) g/I VS(5.48±2.09)/ ̄g/L,P<0.05.The sFh 1 mRNA expression could be detected in both groups.Compared with control group,sFlt一1 mRNA expression was significantly higher in preeclampsia placentas,(1.69±1.61)VS(4.11±4.09),P<0.05.Positive relationship was observed between the level of sFh一1 and the 24一hour proteinuria in women with preeclampsia(r=0.741,P< O.O5).Conclusion High maternal serum sFlt一1 and over expression of sFlt一1 mRNA in preeclampsia placenta may relate tO the pathogenesis and pathophysiology of preeclampsia. [Key words] soluble fms—like tyrosine kinase一1(sFlt一1);preeclampsia;real—time quantitative PCR; EI ISA Chin J Clin Obstet Gynecol,2007,8:206—209
妊娠高血压疾病至今仍是严重危害母婴生命安
全的产科合并症之一,在我国的发病率为9.4 ,
占孕产妇死亡原因的1O [1]。妊娠期高血压疾病
的发病原因不清,机制复杂。近来有学者认为,可
溶性血管内皮生长因子受体一1(soluble fms—like
tyrosine kinase一1,sFlt一1)可能参与了子痫前期
作者单位:100044 北京大学人民医院妇产科 的发生与发展_2 ]。sFlt为血管内皮生长因子
(vascular endothelia growth factor,VEGF)受体
的一种,由于它仅有胞外配体结合区,保留了与
VEGF高亲和力的特性,但缺少跨膜区和胞内区,
缺乏酪氨酸激酶活性,其与VEGF结合后抑制其
促血管生长作用。本研究采用酶联免疫吸附法和荧
光定量PCR法分别测定同一妊娠妇女的外周血清 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国妇产科临床杂志2007年5 fl鲞箜 塑 ! Q !生 !塑! !! !!: ! !:
及胎盘组织中sFh一1表达情况,并探讨sFh一1
在子痫前期发病中可能的作用。
资料与方法
一、研究对象
选取2006年6月~12月在北京大学人民医院
分娩的15例子痫前期孕妇作为子痫前期组,子痫
前期诊断标准参照全国高等医学规划教材妇产科学
第6版[4]。同时选取同期孕周相匹配的无妊娠合
并症及并发症的14例正常孕妇为对照组。对照组
平均年龄28±4.8岁,平均分娩孕周(37.3±1.9)
周;子痫前期组平均年龄(30±4.5)岁,平均分
娩孕周(36.7±2.3)周。两组年龄及分娩孕周差
异无显著性(ANoVA,P>0.05)。新生儿出生体
重分别为(3 571±350)g和(2 626±350)g,两
组差异有统计学意义(P<0.05)。所选病例既往
均无高血压、心脏病、肾病、糖尿病、血小板减少
等病史。
二、方法
1.外周血sFh一1水平的检测:子痫前期孕妇
治疗前取肘静脉血3 ml,静置1 h,2 000 r/min离
心10 min取血清,保存于一80℃冰箱待测。取对
照组孕妇肘静脉血,同法处理。应用酶联免疫吸附
(ELISA)法测定已分离保存的血清中sFh一1浓
度,操作按试剂盒(购自美国R&D System公司)
的说明书进行。所有标本均设3个复孔且为同批测
定,均值为最终浓度,批内变异<5 。
2.胎盘的采集与保存:胎盘娩出后5 min内,
无菌条件下剪开胎膜,取近脐带根部胎盘子面和母
面间无钙化胎盘组织约1 cm×1 cm×0.5 cm,置
人经DEPC处理的冻存管中,5 min内置液氮保
存。
3.胎盘组织总RNA提取和逆转录:取约100
mg冻存胎盘组织,经液氮充分研磨后按照Trizol
(北京天根生化科技有限公司)试剂说明提取总
RNA。紫外分光光度计鉴定RNA纯度并计算其浓
度,OD值A260/A280比值在1.8~2.0之间;
2 琼脂糖凝胶电泳可见28 S、18 S条带。以4 g
总RNA作为模板按照RT—PCR试剂盒(美国
Promega公司)按说明书进行逆转录,产物置一
20℃保存。
4.sFh一1 mRNA水平的定量PCR检测:从
基因库EGenebank(Accession U01134)]获得人 sFh一1基因全长cDNA序列,应用GENERUN—
NER3.04软件设计,扩增sFh一1基因的上游引物
序列为:5 GTAGCCACGAGTCAAATAGCG一
3 ,下游引物为5 一GGCTCTCTATGAAAGT—
GAAGGC一3 ,扩增片断长lO4bp;GAPDH上游
弓I物序歹U:5 一CCACTCCTCCACVTTTGAC一3 ,
下游引物为5 一CACCACCCTGTTGCTGTAG一
3 ,扩增片断长106 bp。经BLAST(NCBI)同源
性分析,由北京奥科生物技术有限责任公司合成。
采用25肚l体系,实时定量PCR仪为MiniOpticon-
TM System(BIORAD公司,美国)。SFh一1扩
增条件为:94℃1 min,61.6℃30 S,72℃45 S,
81℃读板,循环33次。每一次反应均设定阴性对
照,以GAPDH作为内参照进行PCR。通过计算
机软件分析各反应管的荧光强度,采用△CT法计
算各目的基因的相对反应起始拷贝数。每个标本设
3个复孔。计算公式如下:目的产物起始拷贝数:
2一△C
5.24 h尿蛋白定量测定:按常规方法收集子
痫前期孕妇24 h尿液送检。
三、统计学方法
采用SPSS 10.0软件进行统计学分析,数据以
均数±标准差( ±s)表示,采用t检验。以P<
0.05为差异有显著性。
结 果
一、子痫前期组和对照组孕妇外周血中sF|t一1
检测
ELISA法测定两组孕妇外周血清中sFh一1的
水平见表1。对照组外周血中sFh一1的水平为
(5.48±2.09)btg/I ,子痫前期孕妇的水平为
(16.9士8.32)/ ̄g/L。经独立样本t检验,两者间
差异有显著性(P<0.05)。
二、子痫前期和正常妊娠胎盘中sFh一1 mRNA
表达的检测
表1外周血sFlt一1水平和胎盘组织中
sFlt—lmRNA水平比较( ±s)
注:与对照组比较,*P<0.05
子痫前期胎盘组织中sFh一1 mRNA的表达为 维普资讯 http://www.cqvip.com