HPLC法检测低聚果糖的研究

2212002,Vol.23,No.8食品科学※分析检验

ＥＬＩＳＡ法可以成功的检测转基因玉米中Ｂｔ１蛋白，并具有灵敏

简便、快速准确、成本低的优点，为转基因玉米中Ｂｔ１蛋白的

定性和定量检测提供了有效的手段，在进出境产品的检验检疫

工作中有较高的实用价值。

参考文献

１ Ａｎｋｌａｍ　Ｅ，　Ｇａｄａｎｉ　Ｆ，　Ｈｅｉｎｚｅ　Ｐ，　ｅｔ　ａｌ．　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｄｅ ｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｏｒｇａｎｉｓｍｓ　ｉｎ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ｃｒｏｐｓ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｏｏｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ．　Ｅｕｒ　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓ Ｔｅｃｈｎｏｌ，　２００２，２１４：　３～２６．２ 刘光明，苏文金．转基因产品的检测方法．　集美大学学报（自 然科学版），　２００１，６（１）：８７～９２．３ Ｄｉｅｒｋ　Ｅ　Ｒ，　Ｅｖａ　Ｍ　Ｗ，　Ｓｈｉｎ　Ｙ　Ｋ，　ｅｔ　ａｌ．　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｕｎａｃｃｅｐｔ ａｂｌｅ　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｎｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｔｏ ｔｈｅ　ｐｌａｔｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ　ＥＬＩＳＡ．　Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ， １９９９，２２６：８５～９１．４ 沈法富，于元杰，尹承侑等．利用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测Ｂｔ棉杀 虫蛋白的研究．　中国农业科学，１９９９，３２（１）：１５～１９．５ Ｊ．　萨姆布鲁克，Ｅ．　Ｆ．　弗里奇，Ｔ．　曼尼阿蒂斯著．　金冬雁， 黎孟枫等译．分子克隆实验指南（第二版）．　北京：科学出 版社，１９９５，　８５２～８９７．

ＨＰＬＣ法检测低聚果糖的研究

张志国 生庆海 卢彦君 朱俊平 陆 淳

石家庄三鹿集团股份有限公司 石家庄 ０５００７１

摘 要 本文研究了高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法检测低聚果糖的色谱条件和不同浓度低聚果糖对检出率的影响。

结果表明，用高效液相色谱法检测低聚果糖的色谱条件为：流动相配比（乙腈：水）＝７５：２５（ｖ／ｖ）、色谱柱温度为

３０℃、检测器灵敏度为＋８。用此方法检测低聚果糖发现，低聚果糖的检出率随其浓度的不同呈现规律性变化。

关键词 低聚果糖 ＨＰＬＣ 检出率

Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ，　ｔｗｏ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｔｈａｔ　ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＦＯＳ　ｂｙ　ＨＬＰＣ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．　Ｏｎｅ　ｗａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ

ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｗａｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．　Ａｓ　ａ　ｒｅｓｕｌｔ，　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ

（ｅｔｈａｎｅｎｉｔｒｉｌｅ：　ｗａｔｅｒ）　ｗａｓ　７５：２５（ｖ／ｖ）　，　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　３０℃ ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ’s

ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　＋８．　Ｂｙ　ＨＬＰＣ，　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＦＯＳ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｒｅｇｕｌａｒｌｙ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ ＦＯＳ（　ｆｒｕｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ） ＨＰＬＣ Ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ　ｒａｔｅ

低聚果糖有双向调节人体肠道微生态的功能，即能增加肠

道内双歧杆菌的数量，又能同时抑制其他有害菌的生长。而且

低聚果糖很难被人体消化吸收，是一种低能量的糖，不会引起

肥胖。同时，可以认为低聚果糖是一种水溶性膳食纤维，能降

低血清胆固醇和甘油三酯含量，摄入后不会引起体内血糖值的

大幅度升高。所以低聚果糖可以作为高血压、糖尿病和肥胖症

等患者使用的低腐蚀性的防龋齿甜味剂。

低聚果糖已成为许多食品的重要有效成分之一，目前检测

食品中低聚果糖含量的方法主要有纸色谱分离法，３，５－二硝基

水杨酸法，气相色谱法和高效液相色谱法。液相色谱法的色谱

条件有很多种，本研究用正交试验详细阐述了高效液相色谱法

检测低聚果糖的色谱条件和不同浓度低聚果糖对检出率的影响。１ 试剂与仪器

１．１ 试剂

乙腈（色谱纯）；水：超纯水；低聚果糖糖浆（维尔康药业

提供）：分别配成糖浆浓度为０．３０３６ｇ／１００ｍｌ、０．６０７ｇ／１００ｍｌ、

１．０１２２ｇ／１００ｍｌ、２．０２６５ｇ／１００ｍｌ、４．００６０ｇ／１００ｍｌ、６．１１８６ｇ／１００ｍｌ溶

液过０．４５μｍ滤膜备用。

葡萄糖、果糖、蔗糖标准溶液：称取葡萄糖、果糖、蔗糖

各２０ｍｇ于２５ｍｌ容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容稀释至刻度，过

０．４５μｍ滤膜备用。

１．２ 仪器及条件

美国Ｗａｔｅｒｓ公司产高效液相色谱议，Ｗａｔｅｒｓ　４１０差示折光222食品科学2002,Vol.23,No.8※分析检验

检测器，氨基柱（Ｗａｔｅｒｓ公司产），ＷａｔｅｒｓＴＭ ６００　Ｐｕｍｐ，流速

１．０ｍｌ／ｍｉｎ，进样量　２０．０μｌ。

２ 实验设计

２．１ 检测条件的实验

根据实验室现有的条件，我们考虑检测低聚果糖的主要影

响因素为流动相配比、柱温、检测器灵敏度，因此我们用低聚

果糖糖浆浓度为１．０１２２ｇ／１００ｍｌ的溶液进行实验，本实验采用正

交表Ｌ９（３４）确定实验方案，见表１。

２．２ 不同浓度低聚果糖检出率的实验

根据上述实验中所选定的最佳实验条件，我们对低聚果糖

糖浆浓度分别为０．３０３６ｇ／１００ｍｌ、０．６０７３ｇ／１００ｍｌ、１．０１２２ｇ／１００ｍｌ、

２．０２６５ｇ／１００ｍｌ、４．００６０ｇ／１００ｍｌ、６．１１８６ｇ／１００ｍｌ（即低聚果糖含量

分别为０．１１３９ｇ／１００ｍｌ、０．２２７７ｇ／１００ｍｌ、０．３７９６ｇ／１００ｍｌ、０．７５９９ｇ／

１００ｍｌ、１．５０２２ｇ／１００ｍｌ、２．２９４５ｇ／１００ｍｌ）进行高效液相色谱检测。

２．３ 计算方法

由于目前国内尚无低聚果糖标样，因此低聚果糖的含量用

面积归一法进行定量，即用高效液相色谱分别测定果糖、葡萄

糖、蔗糖的绝对含量，利用下式计算低聚果糖的含量：

（Ｇ＋Ｐ＋Ｚ）×Ａ／（１－Ａ）

式中：Ｇ、Ｐ、Ｚ分别为果糖、葡萄糖、蔗糖的绝对含量，Ａ

为低聚果糖的相对含量。３ 结果与讨论

３．１ 检测条件的实验结果

正交实验结果见表２，从表２中我们可以发现流动相配比是

影响低聚果糖检出率的最主要的因素，以后依次为柱温和检测

器灵敏度。根据正交试验分析规则，三种因素的最优组合应为

Ａ２Ｂ１Ｃ１。即最优检测条件是：流动相乙腈：水（ｖ／ｖ）＝７５：２５，色

谱柱温度为３０℃，检测器灵敏度为＋８。

在该色谱条件下，浓度为１．０１２２ｇ／１００ｍｌ的低聚果糖糖浆溶

液的色谱峰如图１。色谱峰从左到右依次为果糖、葡萄糖、蔗

糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖。

３．１．１ 流动相配比的影响

当流动相中水的比例减小时，各种糖组分出峰的保留时间

有所提前，可以缩短检出时间。但是葡萄糖和果糖的色谱峰不

能有效分开，造成色谱峰的重叠，给数据分析带来困难；水的

比例增大时，葡萄糖和果糖的色谱峰虽然能很好的分开，但是

延长了色谱峰的保留时间。

３．１．２ 色谱柱温度的影响

在实验中我们发现，随着色谱柱温度的升高，色谱峰保留

时间也提前了，但是升高柱温能够造成色谱峰重叠以及峰形的

不规则，给数据分析结果带来较大的误差并且使检测结果不够

准确。表１ 正交试验因素与水平表

流动相配比为乙腈：水因 素水平流动相配比（ｖ／ｖ）柱温（℃）检测器灵敏度１７０：３０３０＋８２７５：２５５０＋１６３

８０：２０

７０＋３２

图１ １．０１１２ｇ／１００ｍｌ低聚果糖糖浆溶液色谱图

表２ Ｌ９（３４）正交试验结果实　验　方　案实验序号ＡＢＣ检出率（％）

１１１１６９．４５２１２２７０．３３３１３３６５．６１４２１２７７．５１５２２３６５．７９６２３１８０．３２７３１３６９．９８８３２１６６．１４９３３２６７．２３Ｋ１２０５．３９２１６．９４２１５．９１Ｋ２２２３．６２２０２．２６２１５．０７Ｋ３２０３．３５２１３．１６２０１．３８Ｒ２０．２７１４．６８１４．５３∑＝６３２．３６2232002,Vol.23,No.8食品科学※分析检验

３．１．３ 检测器灵敏度的影响

从表２正交试验分析结果中可以看出，　检测器灵敏度对实

验结果的影响并不是特别大。而且在实验中我们发现，随着检

测器灵敏度的增大色谱图的基线不容易稳定，还出现了许多杂

峰，使我们的目标峰不容易辨认，所以检测器灵敏度我们选择

为＋８。

３．２ 不同浓度低聚果糖对检出率的影响

在实验中，我们对一系列浓度的低聚果糖溶液进行液相色

谱检测，实验结果如表３。

从表３中可以看出，低聚果糖的检出率是随糖浓度发生变

化的，即随着低聚果糖浓度的增大其检出率也随着增大，检出

率与低聚果糖浓度的关系如图２。表３ 不同浓度低聚果糖的检出率

低聚果糖浓（ｇ／１００ｍｌ）０．１１３９０．２２７７０．３７９６０．７５９９１．５０２２２．２９４５检出值（ｇ／１００ｍｌ）０．０８７６０．１８０５０．３１１２０．６５９９１．３３１８２．０７０２检出率（％）７６．９４７９．２７８１．９８８６．８４８８．６６９０．２２

图２　检出率随浓度变化曲线７０７５８０８５９０９５

１２３４５６浓度ｇ／１００ｍｌ检出率(％)４ 结 论

由上述实验可得出结论，用ＨＰＬＣ法检测低聚果糖的色谱

条件为：流动相乙腈：水（ｖ／ｖ）＝７５：２５，色谱柱温度为３０℃，检

测器灵敏度为＋８。并且，在此条件下低聚果糖的检出率随浓度

发生变化。

４．１　本实验只讨论了三个水平，还需进一步实验，对各因素的实验水平进行仔细的探索和研究来提高低聚果糖的检出率。

４．２　对不同浓度低聚果糖的检出率还需进一步研究，并且要进

一步检测样品中的聚果糖。

参考文献

１ 汪世华等．低聚果糖的开发与应用．　中国乳品工业，２００２， （２）：３１～３４．２ 王文辉等．低聚果糖ＨＰＬＣ的快速测定．　食品科学，１９９９， （３）：５３～５４．３ 施奈德　Ｌ　Ｒ．　实用高效液相色谱法的建立．　北京：科学出 版社，２０００，１７～５０．４ 冯叙桥，赵静编著．　食品质量管理学．　北京：中国轻工业出 版社　，１９９５，８７～９２．

过硫酸钾氧化－氨性液分离－钼蓝抗坏血酸

还原分光光度法测定海带中微量磷的研究

司文会 朱金坤 安徽技术师范学院 凤阳 ２３３１００

摘 要 海带中微量磷的测定，尚未见报道。样品以硝酸－高氯酸分解、氨水调节体系呈微碱性，除去可能含有

的金属杂质后，过硫酸钾氧化各种形式的磷盐成正盐，因此，在钼蓝－抗坏血酸还原体系基础上，建立了分光光

度法测定微量磷的新方法。磷含量在０～２．０ｕｇ／５０ｍｌ范围内具有线性关系，ＣＶ％＝９７％～１０１％，ＲＳＤ％＝１．０６％～

１．２０％，Ｓａｎｄｅｌｌ＝２．０×１０－３ｕｇ．ｃｍ－２。实际样品分析，结果满意。

关键词 过硫酸钾 氨性液分离 光度法 微量磷

Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｔ　ｈａｓ　ｎｏｔ　ｙｅｔ ｂｅｅｎ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　，　ｈｏｗ　ｔｏ　ａｓｓａｙ　ｔｈｅ　ｔｒａｃｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｉｎ　ｋｅｌｐ　．　Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　，　ｗｅ　ｆｏｕｎｄ