植物提取物提取dna方法

实验十一 DNA的粗提取与鉴定教学目的1．初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。

2．观察提取出来的DNA物质。

实验原理1．DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。

DNA在0．14mol/L的NaCl 溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。

2．DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。

3．DNA＋二苯胺−−沸水浴蓝色（用于DNA的鉴定）−→实验步骤1．材料制备0.1G/ml柠檬酸钠100ml500ml烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→活鸡血180ml即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯臵于冰箱中，静臵一天使鸡血细胞自行沉淀）2．方法步骤取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌（1）提取血细胞核物质纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂（2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/L NaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14mol/L）（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上（5）（纱布上的）DNA粘稠物再溶解： 20ml2mol/L NaCl溶液 50ml烧杯，上述粘稠物缓慢搅拌3 min（6）过滤含DNA的2mol/L NaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA（7DNA：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。

（8）DNA鉴定：实验关键：本实验成功的关键是获取较纯净的DNA，因此应注意：1．充分搅拌鸡血细胞液。

DNA存在于鸡血细胞核中。

将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA 2．沉淀DNA必须用冷酒精。

07
实验注意事项与拓展思考
实验注意事项
实验材料选择
选择新鲜、无腐烂的动物组织 或植物细胞作为实验材料，以
确保DNA的质量和数量。
操作规范
遵循实验步骤，正确使用实验 器具，避免交叉污染和实验误 差。
安全防护
佩戴实验服、手套和护目镜等 防护用品，确保实验过程的安 全。
废弃物处理
妥善处理实验废弃物，避免对 环境造成污染。
生物技术的关键步骤
DNA的粗提取和鉴定是生物技术领域 中的关键步骤，如基因工程、DNA指 纹鉴定、遗传病诊断等。
02
DNA的基本知识与原理
DNA的分子结构和特点
01
02
03
双螺旋结构
DNA由两条反向平行的多 核苷酸链组成，形成双螺 旋结构。
碱基互补配对
DNA中的碱基遵循A-T、 G-C的互补配对原则。
DNA的粗提取与纯化
粗提取方法
利用DNA在特定条件下的溶解性，通过加入适量的盐和酒精 等试剂，使DNA从细胞中粗提取出来。
纯化方法
通过去除蛋白质、RNA等杂质，进一步纯化DNA。常用的纯 化方法有酚/氯仿抽提法、硅胶柱层析法等。
DNA的定量与质量检测
定量方法
利用紫外分光光度计测定DNA溶液在260nm处的吸光度，根据标准曲线计算 DNA的浓度。
高二生物山选修课件DNA的粗提 取与鉴定
汇报人：XX 20XX-01-14
目录
• 引言 • DNA的基本知识与原理 • 实验材料与方法 • DNA粗提取的实验操作 • DNA鉴定的实验操作 • 实验结果与分析 • 实验注意事项与拓展思考
01
引言
目的和背景
探究DNA的粗提取和鉴定方法

天然植物产物与化学成分的鉴定和分析研究植物是地球上非常重要的生命体，它们不仅为我们提供氧气和食物，还有许多药用和工业用途的植物产品。

天然植物产物鉴定和化学成分分析是研究植物的重要途径之一，也是发掘植物资源和开发新药的必要步骤。

一、天然植物产物鉴定的方法天然植物产物鉴定的方法包括形态学、解剖学、化学和分子生物学等多种手段。

其中，形态学是最基本的方法，通过观察植物的形态特征，如叶片的形状、花的颜色和果实的大小等，可以初步确定植物的属、种和亚种。

解剖学是通过显微镜观察植物组织的结构和形态，进一步确认植物的分类和鉴别。

例如，在草本植物中，种子的大小形状和胚乳的结构等可以用于鉴别不同的种类。

化学方法是通过化学试剂对植物的成分进行分析和检测。

通常采用的方法有高效液相色谱（HPLC）、红外光谱（IR）、核磁共振（NMR）等。

这些分析技术可以鉴定植物中的化学成分和有无活性成分，评估其药理学和药效学价值。

分子生物学是通过DNA和RNA的分析，对植物进行鉴定和分类。

比如，PCR （聚合酶链反应）方法可以扩增植物DNA的一部分区域，通过比对已知的基因库或DNA条形码库，确认植物的种属和亚种。

二、天然植物产物化学成分分析的意义天然植物产物化学成分分析是研究植物的重要途径，可以分离和鉴定单一的化合物或化学成分，对植物体内的活性成分和药理作用进行评估和研究。

天然植物产物化学成分分析的研究领域非常广泛，包括天然药物、植物毒素、食品添加剂和香料等。

药用植物常被用于传统医学和现代医学中，它们的化学成分可能对治疗疾病、缓解症状和改善健康有一定作用。

分析药用植物的化学成分，可以为新药研发和药理作用的探索提供重要参考。

植物毒素是指植物体内毒性物质的总称，通常由一系列有毒的物质组成，包括生物碱、酸性天然毒素、蛋白质和多糖体等。

植物毒素会对人和动物造成中毒症状，如肝损伤、神经系统损伤和胃肠道问题等。

通过分析植物毒素的化学成分和毒性作用，可以为饲料和食品的质量检测提供科学依据。

目录摘要 (1)Abstract (1)1 引言 (2)1.1 RSAP标记技术 (2)1.2 DNA提取方法 (2)1.3 PCR反应原理及成分 (3)2 材料与方法 (4)2.1 材料 (4)2.1.1 32个花生品种 (4)2.1.2 主要试剂 (5)2.1.3 主要仪器用具 (5)2.2方法 (5)2.2.1花生DNA的提取 (5)2.2.2 PCR反应体系的优化 (6)2.2.3 PCR反应条件中退火温度的确定 (6)2.2.4引物初步筛选 (7)2.2.5多样性检测 (7)3 结果及分析 (8)3.1 PCR反应体系的优化 (8)3.1.1引物浓度对扩增结果的影响 (8)3.1.2模板浓度对扩增结果的影响 (8)3.1.3TaqDNA聚合酶浓度对扩增结果的影响 (9)3.1.4dNTP S浓度对扩增结果的影响 (9)3.2退火温度对扩增结果的影响 (10)3.3引物筛选结果 (11)3.4多样性初步分析 (11)4讨论 (12)4.1RSAP特点 (12)4.2影响RSAP因素 (13)致谢 (14)参考文献 (15)RSAP标记技术在花生遗传多样性检测中的初步应用生物技术专业李鹏飞指导教师乔利仙摘要：限制性位点扩增多态性(restriction site amplification polymorphism ,RSAP) 是根据基因组内普遍存在的酶切位点来设计特殊的引物,通过简单的梯度PCR反应来产生多态性。

本研究首次建立了适合于花生RSAP分析的PCR反应体系和反应条件,并对RSAP标记技术在花生遗传多样性检测中的应用进行了初步研究。

利用所建立的体系，使用15对引物对32个花生DNA进行了PCR扩增,经过重复验证,有8对引物能够扩增出清晰且稳定的条带，这些条带具有一定的多态性，说明所建立的体系可用于花生遗传多样性分析。

关键词：RSAP；花生；遗传多样性The Application of RSAP Marker Technique in DiversityDetection of peanutStudent majoring in biotechnology Li PengfeiTutor Qiao LixianAbstract : Restriction site amplified polymorphism (RSAP) requires just a simple polymerase chain reaction(PCR)to generate polymorphic markers around restrictive site. An RSAP analytic system suit for peanut was set up and applied in diversity detection of peanut for the fist time. In this experiment, fifteen primer pairs were screened with 32 peanut varies by the RSAP analytic system; and eight of them produced stable and reproducible amplification patterns. Some of the fragments screened by the primer pairs were polymorphic, indicting that the analytic system was suit for the diversity detection of peanut.Key words:RSAP; peanut; diversity1 引言花生是世界范围内广泛种植的重要油料作物之一，营养价值高，用途广，深受人们喜爱。