响应面法优化超声波辅助提取银杏叶黄酮类化合物

分离提取　食品研究与开发　

Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　２０１２年２月　第３３卷第２期　４７＝＝　一　

响应面分析法优化桑叶黄酮的提取工艺　

吴冬青，任雪峰，林敏，徐新建，安红钢　

（河西学院化学系，甘肃张掖７３４０００）　

摘要：研究桑叶黄酮回流方法提取最佳工艺。在单因素试验的基础上，应用Ｂ０ｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ设计四因素（乙醇浓度、提　取时间、温度、料液比）三水平的试验，研究４个自变量对桑叶黄酮产量的影响。结果表明桑叶黄酮提取的最佳条件为：　乙醇浓度６１％，提取温度７２　ｏＣ，料液比ｌ：２９（ｇ／ｍＬ），提取时间１．５ｈｏ最佳条件下黄酮产量实测值为２．００１　２（ｇ／ｌＯ０ｇ）。实测　值与回归模型预测值的相对误差为１．６８％，说明采用响应面法优化得到的提取条件可靠。　关键词：桑叶；黄酮；响应面法；提取工艺　

Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｍｏｒｕｓ　ａｌｂａ　Ｌ．ｂｙ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　Ｓｕｒｆａｃｅ　Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　

ＷＵ　Ｄｏｎｇ—ｑｉｎｇ，ＲＥＮ　Ｘｕｅ—ｆｅｎｇ，ＬＩＮ　Ｍｉｎ，ＸＵ　Ｘｉｎ－ｊｉａｎ，ＡＮ　Ｈｏｎｇ－ｇａｎｇ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｈｅｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｇｙｅ　７３４０００，Ｇａｎｓｕ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｍｏｒｕｓ　ａｌｂａ　Ｌ．ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　

ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ，Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ　ｄｅｓｉｇｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　４－ｆａｃｔｏｒｓ（ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｉｍｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ）ａｎｄ　３一ｌｅｖｅｌｓ　ｔｅｓｔ，ａｎｄ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　

响应面法优化扶桑叶黄酮超声提取工艺

郑梦娇;陈清西

【摘 要】The Hibiscus rosa-sinensis leaves were used as the meterials, and

the response surface methodology was used to optimize the flavonoids

extraction process, which was designed by Box-Behnken. The results

showed that the optimum conditions for extracting flavonoids from H.

rosa-sinensis leaves was:the ethanol concentration 70%, 70 min ultrasound

treatment and the ratio of solid 40:1. Under the optimum conditions, the

yield of flavonoids was 34.56 mg/g.%以扶桑叶为研究材料，以Box-Behnken中心组合实验设计，利用响应面法对扶桑叶黄酮提取工艺进行优化。结果表明，超声波辅助乙醇提取扶桑叶黄酮优化工艺条件为乙醇浓度70%，超声提取时间70

min，液料比40∶1。在最佳工艺条件下扶桑叶黄酮提取的得率最高，为34.56

mg/g。

【期刊名称】《亚热带植物科学》

【年(卷),期】2013(000)003

【总页数】6页(P205-210)

【关键词】扶桑叶;黄酮;响应面法

【作 者】郑梦娇;陈清西

【作者单位】福建农林大学 园艺学院，福建 福州 350002;福建农林大学 园艺学院，福建 福州 350002 【正文语种】中 文

【中图分类】Q586

扶桑Hibiscus rosa-sinensis为锦葵科木槿属常绿灌木，原产印度、非洲及我国南部，目前国内作为民间常用药材和优良的园林观赏植物，应用十分广泛。扶桑叶中含蒲公英赛醇乙酸酯和β-谷甾醇, 无毒，性甘、平，具有清热利水、解毒消肿的作用[1-2]。

２０１０年７月第７卷第２０期・实验研究・

超声波提取银杏叶中黄酮类化合物的研究

杨荣华．任京东，屈云霞

（泰山医学院，山东泰安２７１０１６）

【摘要１目的：研究采用超声波法提取银杏叶中黄酮类化合物的工艺。方法：采用正交试验确定银杏叶中总黄酮的最佳提取工艺：以总黄酮为评价指标，用分光光度法进行分析检测，并与传统的溶剂提取法进行比较。结果：最佳提取

条件为超声波功率１００％，超声时间４５ｍｉｎ，液固比为１２：１，溶剂浓度３０％，提取次数２次。分析检测显示，总黄酮的提取率达１．２％，超声提取的提取率比溶剂法提高了约１．５倍。结论：超声波用于银杏叶提取具有成本低、回收率高、有机溶剂残留少等优点。

『关键词】超声波提取；银杏叶；银杏黄酮苷；提取工艺

【中图分类号】Ｒ２８４＿２【文献标识码】Ａｆ文章编号】１６７３－７２１０（２０１０）０７（ｂ）－０２５—０３

ＳｔｕｄｙｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｎｇＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｔｈｅＬｅａｖｅｓｏｆＧｉｎｋｇｏＢｉｌｏｂａｂｙＵｌｔｒａ－

ｓｏｎｉｃ

ＹＡＮＧＲｏｎｇｈｕａ，ＲＥＮＪｉｎｇｄｏｎｇ，Ｑ【，Ｙｕｎｘｉａ

（ＴａｉｓｈａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｆｉｅｇｅ，ＴａＹａｎ２７１０１６，Ｃｈｉｎａ）

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｆｌａｖｏｎａｉｄｓｆｒｏｍｔｈｅＩＪｅａｖｅｓｏｆＧｉｎｋｇｏＢｆｌｏｂａｂｙＵｌｔｒａｓｏｎｉｃ．Ｍｅｔｈ－

ｏｄｓ：ＴｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｃｏｎｇｄｉｔｉｏｎｓｏｆｆｌｏｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｔｈｅＬｅａｖｅｓｏｆＧｉｎｋｇｏＢｉｌｏｂａｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎ．

Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙｗａ￥ｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｇｔｅｎｔｏｆｆｌａｖｏｎｉｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｌｔ＇ｅｕｎｄｅｒｔｈｅ１００％ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｐｏｗｅｒ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｔｉｍｅＷａｇ４５ｍｉｎ，ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｖｅｎｔｔｏｆｅｅｄｓｔｏｃｋｗａｓ１２：１，ａｌｃｏｈｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ

227※工艺技术食品科学2008, Vol. 29, No. 08响应面法优化超声提取杜仲雄花中黄酮类化合物的工艺参数董发明１，白喜婷２（１．河南科技大学动物科技学院，河南 洛阳 ４７１００３；２．河南科技大学食品与生物工程学院，河南　洛阳 ４７１００３）摘 要：在单因素试验的基础上，对乙醇浓度、提取时间和超声功率三因素进行二次通用旋转组合试验设计并通过响应面分析，优化杜仲雄花中黄铜类化合物的超声波提取工艺。结果表明：超声辅助提取杜仲雄花中黄酮类化合物的最佳工艺参数为乙醇浓度６０％、提取时间３４ｍｉｎ、超声功率３２０Ｗ。在此条件下，黄酮类化合物的实际提取率为１３．１３ｍｇ／ｇ，与预测值基本一致。在三个因素中，乙醇浓度对提取率影响最大，其次是超声功率，提取时间对黄酮类化合物的提取率影响较小，并且三因素之间无交互作用。关键词：杜仲雄花；超声提取；黄酮类化合物；响应面优化Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＥｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｓｔａｍｉｎａｔｅ　Ｆｌｏｗｅｒ　ｂｙ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　Ｓｕｒｆａｃｅ　ＭｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙＤＯＮＧ　Ｆａ－ｍｉｎｇ１，ＢＡＩ　Ｘｉ－ｔｉｎｇ２（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３，　Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ｈｅｎａｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３，　Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ，　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｅｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｓｔａｍｉｎａｔｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｗｅｒｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｑｕａｄｒａｔｉｃ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｓｐｉｎｎｉｎｇ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏｎ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ．　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ａｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：　ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　６０％，　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ　３４　ｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　３２０　Ｗ．　Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，　ｔｈｅ　ａｃｔｕａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｓ　１３．１３　ｍｇ／ｇ，ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｖａｌｕｅ．　Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｍｏｓｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ａｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅ，　ｆｏｌｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，　ａｎｄ　ｎｏ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｅｘｉｓｔｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅｍ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｓｔａｍｉｎａｔｅ　ｆｌｏｗｅｒ；ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈ－ｏｄｏｌｏｇｙ中图分类号：Ｏ６２３．５４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００８）０８－２２７－０５收稿日期：２００８－０５－２１基金项目：河南省教育厅自然科学基金项目（２００６５５０００１）；河南科技大学博士科研启动基金项目作者简介：董发明（１９６４－），男，副教授，博士，主要从事中药研究与开发。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｆｍｉｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｏｌｉｖ）为我国特有的名贵中药材，分布在全国２０多个省（市、自治区），栽种面积达３６　×１０４ｈｍ２［１］。雌雄异株，其中雄株占４０％～６０％。雄花簇生于雄株的当年生枝条基部，花量大，采集容易［２］，资源十分丰富。杜仲全身是宝，含有多种活性成分，具有很高的药用价值。黄酮就是其有效成分之一，具有生物抗氧化性、清除自由基、抗衰老［３－４］、治疗心脑血管疾病、降血脂、降血压、降血糖的作用［５－６］，还具有消炎、镇痛、抗菌和增强免疫力等作用［７－８］。近年来研究发现，杜仲雄花与皮含有相类似的有效成分，并且杜仲雄花中黄酮类化合物的含量高于皮和叶［９］，是亟待开发的新资源。目前，对于杜仲雄花的研究主要集中在产品开发上，杜仲雄花中总黄酮和绿原酸的含量测定也有报道［１０－１１］，而对于杜仲雄花中活性成分的提取则罕见报道。本实验采用超声波辅助提取，二次通用旋转组合试验设计及响应面分析的方法，对杜仲雄花中黄酮类化合物的提取工艺参数进行优化，以确定最佳提取工艺，为杜仲雄花中黄酮类化合物的利用提供科学的理论依据。１材料与方法１．１材料与试剂 2008, Vol. 29, No. 08食品科学※工艺技术228杜仲雄花于２００８年４月１０日采自洛阳市汝阳县王坪乡杜仲种植基地，烘干后粉碎过４０目筛。甲醇（色谱纯） 天津市科密欧化学试剂开发中心；槲皮素对照品 中国药品生物制品检定所；其余试剂均为分析纯。１．２仪器与设备Ｗａｔｅｒｓ　２６９０高效液相色谱仪、Ｗａｔｅｒｓ　２４８７紫外检测器、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ３２色谱工作站 美国　Ｗａｔｅｒｓ公司；ＢＳ２１０Ｓ型１／１万电子分析天平 北京赛多利斯天平有限公司；多功能自动制茶机 洛阳市矿山设备厂；ＪＹ９２－２Ｄ超声波细胞粉碎机 宁波新芝生物科技股份有限公司；ＲＥ－５２Ａ型旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；ＳＨＺ－Ｄ（Ⅲ）循环水式真空泵 巩义市英峪予华仪器厂；ＦＷ１７７型中草药粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司；电热恒温水浴锅 上海医疗器械五厂；１０１Ａ－２型数显电热鼓风干燥箱 上海浦东荣丰科学仪器有限公司。１．３方法１．３．１杜仲雄花中黄酮类化合物的检测方法（高效液相色谱法）由于杜仲雄花中所含的黄酮类化合物主要有槲皮素、山奈酚、芦丁、紫云英甙、陆地锦甙等［１２］，水解后的苷元部分主要是槲皮素，其他成分含量很少，因此用高效液相色谱法测定杜仲雄花中黄酮类化合物的含量时，用槲皮素作对照品。色谱条件：Ｋｒｏｍａｓｉｌ－Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５．０μｍ）；流动相甲醇－０．４％磷酸（６０：４０）；检测波长３６０ｎｍ；流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温２５℃。标准曲线的绘制：精确称取经１０５℃干燥至恒重的槲皮素标对照品２．５ｍｇ，加甲醇溶解并定容至５０ｍｌ，配成５０μｇ／ｍｌ的槲皮素标准溶液。分别进样１、３、５、７、９、１１μｌ，在上述色谱条件下进行测定。以进样量（μｌ）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为ｙ　＝　１５９．８１ｘ－３４．８５，相关系数Ｒ２＝０．９９９６。１．３．２杜仲雄花中黄酮类化合物的提取及测定准确称取１．０００ｇ经干燥粉碎的杜仲雄花粉末，加入一定体积分数的乙醇溶液，按相应的提取条件在超声４ｓ、间隔时间５ｓ为１次的条件下超声提取，过滤，在滤液中加入５％（Ｖ／Ｖ）的浓硫酸，８０℃水浴回流２ｈ，抽滤，减压浓缩，挥去乙醇溶液，用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯溶液蒸干，用甲醇定容至５０ｍｌ，用孔径为０．４５μｍ的微孔膜过滤。精密吸取经滤过的溶液１０μｌ　，按上述色谱条件进行测定，根据测定槲皮素的峰面积计算游离苷元的含量，用游离苷元的含量乘以平均换算因子２．５１［１３－１４］，即得样品中总黄酮的含量（以槲皮素计ｍｇ／ｇ　ｄｗ）。计算公式是： Ｓ１×Ｃ×ＶＸ＝—————×２．５１ Ｓ２×ｍ式中，Ｘ为样品中总黄酮含量（ｍｇ／ｇ）；Ｓ１为样品峰面积；Ｃ为标准溶液浓度（ｍｇ／ｍｌ）；Ｓ２为标准溶液峰面积；Ｖ为样品定容体积（ｍｌ）；ｍ为试样质量（ｇ）；２．５１为平均换算因子。１．３．３单因素试验１．３．３．１乙醇浓度对黄酮类化合物提取率的影响准确称取１．０００ｇ经干燥粉碎的杜仲雄花粉末，以料液比为１：２０的比例分别加入４０％、５０％、６０％、７０％和８０％的乙醇溶液，在超声功率为３００Ｗ时提取时间为３０ｍｉｎ，每个处理做３次重复，研究乙醇浓度对黄酮类化合物提取率的影响。１．３．３．２提取时间对黄酮类化合物提取率的影响准确称取１．０００ｇ经干燥粉碎的杜仲雄花粉末，以料液比为１：２０的比例加入６０％的乙醇溶液，在超声功率为３００Ｗ时，分别提取１０、２０、３０、４０和５０ｍｉｎ，每个处理做３次重复，研究提取时间对黄酮类化合物提取率的影响。１．３．３．３超声功率对黄酮类化合物提取率的影响准确称取１．０００ｇ经干燥粉碎的杜仲雄花粉末，以料液比为１：２０的比例加入６０％的乙醇溶液，在超声功率分别为１００、２００、３００、４００和５００Ｗ时，提取３０ｍｉｎ，每个处理做３次重复，研究超声功率对黄酮类化合物提取率的影响。１．３．４提取条件优化方案在单因素试验的基础上，采用ＳＡＳ９．０统计软件中的二次通用旋转组合设计方案，进行参数优化。各因子编码值见表１。水平编码Ｘ１乙醇浓度（％）Ｘ２提取时间（ｍｉｎ）Ｘ３超声功率（Ｗ）＋λ １．６８２７７４７４６８＋１７０４０４０００６０３０３００－１５０２０２００－λ －１．６８２４３１３１３２Δｊ１０１０１００表１ 因素水平编码表Table 1 Coding of factors and levels２结果与分析２．１单因素对黄酮类化合物提取率的影响２．１．１乙醇浓度对黄酮类化合物提取率的影响229※工艺技术食品科学2008, Vol. 29, No. 08从图１可以看出，总黄酮的提取率在４０％～６０％范围内，随乙醇浓度的升高而逐渐增加，乙醇浓度为６０％时提取率最大，在６０％～８０％范围内随乙醇浓度的升高又急剧降低。主要原因是乙醇浓度不同，极性不同，６０％乙醇的极性与杜仲雄花中黄酮类化合物极性相似，随着乙醇浓度的升高，一些脂溶性物质的溶出增加，影响了黄酮类物质的浸出［１５］。２．１．２提取时间对黄酮类化合物提取率的影响图１ 乙醇浓度对黄酮类化合物提取率的影响Fig.1 Effects of ethanol concentration on extraction rate offlavonoids１４１３１２１１１０９８７４０５０６０７０８０提取率（ｍｇ／ｇ）乙醇浓度（％） 图２ 提取时间对黄酮类化合物提取率的影响Fig.2 Effects of extraction time on extraction rate of fla-vonoids１４１３１２１１１０９８７１０２０３０４０５０提取率（ｍｇ／ｇ）提取时间（ｍｉｎ）从图２可以看出，随着提取时间的延长，黄酮类化合物的提取率先上升而后又呈现缓慢下降趋势，在３０ｍｉｎ时达到最大值。原因是时间过短，黄酮类物质还未充分溶出，时间过长，一些热敏性组分被破坏或溶剂挥发导致乙醇浓度降低而使黄酮类化合物提取率降低［１６］。２．１．３超声功率对黄酮类化合物提取率的影响图３ 不同超声功率对黄酮类化合物提取率的影响Fig.3 Effects of ultrasonic power on extraction rate of flavonoids１４１３１２１１１０９８７１００２００３００４００５００提取率（ｍｇ／ｇ）超声功率（Ｗ）从图３可以看出，当超声功率小于３００Ｗ时，随着超声功率的增加黄酮类化合物的提取率逐渐增大，当超声功率大于３００Ｗ时，黄酮类化合物的提取率又逐渐下降。这可能是由于随着超声功率的增强，细胞内物质不断被释放，同时一些能使黄酮类化合物分解的酶也被充分释放出来，从而导致其含量下降［１７］。超声波作用的效果取决于单位面积输出的超声功率和提取物的结构和性质，不同的提取物有着不同的适宜提取的超声功率范围，超过此范围，超声作用可能会导致目标产物发生降解而影响提取率［１８］，因此提取杜仲雄花中黄酮类化合物的超声功率应设定在３００Ｗ。２．２二次通用旋转组合设计试验结果及响应面分析２．２．１杜仲雄花中黄酮类化合物提取率的方差分析在单因素试验的基础上，采用二次通用旋转组合试验设计，试验结果见表２。试验编号Ｘ１Ｘ２Ｘ３提取率（ｍｇ／ｇ）乙醇浓度（％）提取时间（ｍｉｎ）超声功率（Ｗ）１－１－１－１１１．６２－１－１１１１．７３－１１－１１１．６４－１１１１１．８５１－１－１１１．６６１－１１１１．８７１１－１１１．７８１１１１１．９９－１．６８２００９．６１０１．６８２００１０．１１１０－１．６８２０１２．８１２０１．６８２０１３．１１３００－１．６８２１２．５１４００１．６８２１２．８１５０００１３．０１６０００１３．１１７０００１３．２１８０００１３．２１９０００１３．１２００００１３．２表２ 试验设计方案及试验结果Table 2 Test designs and results采用ＳＡＳ９．０进行统计分析，得到杜仲雄花中黄酮类化合物的提取率与超声处理各因素变量间的函数关系（去掉不显著项）为：Ｙ＝１３．１３４１２＋０．０８３５４２Ｘ１＋０．０５８９１１Ｘ２＋０．０８８２Ｘ３－１．１６５９６２Ｘ１－０．０６９９４５Ｘ２－０．１７６０１１Ｘ３为了说明回归方程的有效性及各因素对提取率的影响程度，对回归方程进行了方差分析，结果见表３。从表３可以看出，乙醇浓度和超声功率对黄酮类化合物的提取率影响极显著，提取时间对提取率影响显２２２