磁性纳米四氧化三铁颗粒及汉黄芩素逆转K562_A02细胞多药耐药的研究

超顺磁性氧化铁纳米颗粒的理化性质及其标记BMSCs 的安全性、示踪时效性研究进展

王海龙;张良;郭艾

【摘 要】随着干细胞移植技术的深入发展，动态监测移植后移植细胞的分化和生存状态、治疗机制和效果等问题成为研究重点。超顺磁性氧化铁纳米颗粒（SPIONs）是一种新型示踪剂，应用相对安全，其标记干细胞的技术已被用于细胞磁共振活体示踪和细胞磁靶向研究，成为探索细胞移植机制和改善疗效的有力工具。

【期刊名称】《山东医药》

【年(卷),期】2015(000)024

【总页数】3页(P99-101)

【关键词】超顺磁性氧化铁;骨髓间充质干细胞;干细胞移植;磁共振成像

【作 者】王海龙;张良;郭艾

【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院，北京100050;首都医科大学附属北京友谊医院，北京100050;首都医科大学附属北京友谊医院，北京100050

【正文语种】中 文

【中图分类】R817

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是良好的组织工程载体细胞［1，2］，在组织损伤的修复与重建方面起重要作用［3］。随着干细胞移植技术的深入发展，动态监测移植后移植细胞的分化和生存状态，了解干细胞移植的治疗机制，评估移植效果等问题成为下一步研究工作的重点。自1999年提出了分子影像学(MI)概念［4］后，应用磁共振(MR)对比剂标记细胞已有10余年的历史，上个世纪90年代末就已经提出“纳米医学”概念。近年来，超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPIONs)标记干细胞的技术已被用于细胞MR活体示踪和细胞磁靶向研究，成为探索细胞移植机制和改善疗效的有力工具。本文就SPIONs的理化性质及其标记BMSCs的安全性、示踪时效性研究进展作一综述。

1 SPIONs相关理化性质

SPIONs的基本结构多是以葡聚糖包裹氧化铁颗粒而得，直径在纳米数量级，粒度的大小将影响其在体内分布的特异性和磁化特性。根据粒度的大小，超顺磁性氧化铁(SPIO)可分为普通型SPIO(直径40～400 nm)和超微型SPIO(USPIO，最大直径＜30 nm)两类。Feridex@是SPIO类造影剂的典型代表，而Combidex@是USPIO类造影剂的典型代表。

序号科研热词推荐指数序号科研热词1多药耐药221多药耐药2肿瘤62耐药3汉防己甲素63白血病4抗药性,多药54rna干扰5白血病45阿霉素6rna干扰46肿瘤7k562/a02细胞47p-糖蛋白8耐药38逆转9抗药性,肿瘤39柔红霉素10多药耐药相关蛋白310抗药性11乳腺癌311乳腺癌耐药蛋白12rnai312k562/a02细胞13p-糖蛋白313血清药理学14阿霉素214药物耐受性15逆转耐药215药物疗法16逆转剂216细胞凋亡17紫杉醇217磁性纳米四氧化三铁颗粒18癌,肝细胞218汉防己甲素19环孢菌素a219大肠癌20小分子干扰rna220复方浙贝颗粒21卵巢癌221乳腺癌22凋亡222p糖蛋白23mdr1223p-gp24k562/a02细胞株224靶向25黄芩苷125非小细胞肺26黄芩素126长春新碱27顺铂耐药127铜绿假单胞菌28顺铂128进展29靶点129裸鼠30非小细胞肺癌130蛋白酶体抑制剂31青霉素结合蛋白131蛋白基因32难治性癫痫132膀胱肿瘤33阳离子脂质体133胰腺肿瘤34铂134胃肿瘤35邻苯二甲酰亚胺135胃癌36造影剂136肿瘤转移37逆转录病毒载体137肺肿瘤38逆转作用138肠胃清方39逆转139肠胃清40转基因140肝细胞癌41超声检查141耐药逆转42超声142耐药质粒消除43质粒143耐药性逆转44谷胱甘肽144耐药性45裸鼠145耐甲氧西林金黄色葡萄球菌46血清146耐受47葡萄糖基转移酶147羽苔素e48药理学148羟基喜树碱49药物耐药149结肠肿瘤细胞50苯唑西林150细胞酸化51芳香化酶抑制剂151细胞膜角蛋白852脉冲磁场(pmf)152细胞周期2008年2009年53脉冲磁场153细胞内ph值54胶质瘤154细胞55胃肿瘤155纳米微粒56肿瘤细胞,培养的156紫花地丁57肿瘤多药耐药性157米托蒽醌58肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导158移植瘤模型59肺癌159神经胶质瘤60肝脏肿瘤160磁性纳米fe_3o_4颗粒61肝细胞癌161磁性纳米62聚合物胶束162真菌耐药63耐药相关性可溶性钙结合蛋白163皮下移植瘤64耐药性164白色念珠菌65耐甲氧西林金黄色葡萄球茵165癌,肝细胞66缺氧诱导因子-1?rna干扰166癌67综述167甲氨蝶呤68维拉帕米168甲基转移酶69结肠肿瘤169甲基化70结直肠肿瘤170生存素71细胞膜角蛋白8171环孢菌素a72细胞系,k562/a02172烷基化73细胞株,mcf-7/adr173淫羊藿苷74细胞株174液相色谱质谱联用75细胞凋亡175流式细胞术76组织防御176洛贝林77神经酰胺类177氟康唑78神经母细胞瘤178槲皮素79研究进辰179机制80益气养肺方180朊蛋白81环孢霉素a181抗药性,多药82环孢素182抗肿瘤药83温下方183抗砷84淋球菌184慢性粒细胞白血病85沙利度胺185异种移植模型86水产养殖186异硫氰酸苯乙酯87氧自由基187川芎嗪88氧化苦参碱188宿主因素89核因子κb189姜黄素90核因子nf-κb190多靶点治疗91机制191多药耐药逆转92星点设计192多药耐药蛋白93昆布水提物193多药耐药性94早幼粒细胞白血病194多药耐药基因95新靶点195基因治疗96整合素rgd196反义寡脱氧核苷酸97抗药性肿瘤197卵巢肿瘤98抗药性198卵巢癌耐药细胞99抗肿瘤药(中药)199卵巢癌100抗肿瘤药1100凋亡相关基因101抗肿瘤1101凋亡102微rna1102何首乌103异硫氰酸盐1103亚胺培南104屈洛昔芬1104五味子醇提取物105实验治疗1105三磷酸腺苷结合盒转运体g2106子宫内膜肿瘤1106~(99)tc~m-mibi

・斟砷成果・　Ｊ　Ｍｅｄ　Ｒｅｓ，Ｍａｒ　２００８，Ｖｏ１．３７　Ｎｏ．３　

血液系统恶性肿瘤治疗主要手段是化疗，肿瘤化　疗失败的主要原因是多药耐药（ｍｕｈｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，　ＭＤＲ），是当今治疗最大难点，也是亟需解决的重要　研究课题。经过多年的努力，我们从中药中筛选高效　低毒肿瘤耐药逆转剂“拮新康”，是由莲心、黄芪组　成，２００２年１１月已获国家发明专利。经研究表明，　拮新康有逆转耐药，增强化疗的作用，应用于临床治　疗耐药白血病有一定的疗效，且又无明显的不良反　应，但拮新康究竟是通过何种机制逆转耐药，值得深　入研究。经药理研究表明莲心中主要有效成分为甲　基莲心碱。本研究采用生物化学、细胞生物学、分子　生物学、高效液相色谱、实验动物模型及血清药理学　等方法，深入研究拮新康及甲基莲心碱逆转白血病细　胞多药耐药的机制。　１．拮新康对白血病细胞株增生、凋亡的影响：①　采用体外细胞毒性试验（ＭＴＴ法）检测拮新康对３种　白血病细胞株（ＨＬ一６０、Ｋ５６２、Ｊｕｒｋａｔ）结果显示拮新　康对３种白血病细胞株有增生抑制及增强化疗的作　用；②采用形态学及ＤＮＡ凝胶电泳方法观察拮新康　对ＨＬ一６０、Ｋ５６２细胞凋亡的影响。　研究结果显示，光镜与电镜观察均可见典型的凋　亡细胞和凋亡小体；ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的梯形　带，提示拮新康可诱导白血病细胞凋亡，与剂量和时　间有一定的关系。　２．拮新康对小鼠粒一单核白血病模型的作用：　ＷＥＨＬ一３Ｂ是小鼠急性粒一单核细胞性（粒单）白血　获奖项目：湖南省医学科技进步奖二等奖；湖南省科技进步奖三　等奖　基金项目：湖南省科委项目［编号９７ＳＳＹ１００１（３）］；湖南省自然　科学基金项目（编号ｏ３ＪＪＹ５ＯＩ３）　作者单位：４１０００８长沙，中南大学湘雅医院　・６４・　病细胞株。将体外培养的ＷＥＨＬ一３Ｂ细胞经腹腔注　射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠体内，成功建立白血病模型，为研究　药物提供了１个有用的动物实验模型。给小鼠白血　病模型进行实验、采用拮新康不同剂量灌胃及长春新　碱腹腔注射，结果显示：拮新康不同剂量实验组小鼠　骨髓未分化细胞均较模型对照组明显减少（Ｐ＜　０．０１）。随着剂量增加，未分化细胞逐渐减少，与对照　组比较有明显差异（Ｐ＜０．０１）。　拮新康与长春新碱联合作用较拮新康及长春新　碱单药组未分化细胞明显减少（Ｐ＜０．０１）。拮新康　实验组，脾脏病理切片所见未分化细胞较对照组明显　减少。研究表明，该药对小鼠移植性白血病模型确有　一定程度抗肿瘤及增强化疗药物作用，为临床应用提　供有力的实验依据。　３．拮新康对Ｋ５６２／Ａ０２耐药细胞株增生、膜流动　性及细胞内化疗药物积聚的浓度影响：本研究应用了　血清药理学方法及ＭＴＴ法、荧光分光光度法高效液　相色谱（ＨＰＬＣ）法，观察拮新康对Ｋ５６２／Ａ０２细胞的　增生、膜流动性及细胞内阿霉素（ＡＤＭ）的积聚浓度。　结果显示拮新康能抑制Ｋ５６２／Ａ０２细胞的增生，降低　Ｋ５６２／Ａ０２细胞膜的流动性，影响Ｐ—ｇＰ的“药泵”功　能。拮新康能增加ＡＤＭ在Ｋ５６２／Ａ０２细胞内积聚浓　度，逆转Ｋ５６２／Ａ０２细胞ＭＤＲ。　４．拮新康对Ｋ５６２／Ａ０２细胞及原代耐药白血病　细胞Ｐ—ｇｐ／ｍｄｒ—Ｊ基因表达的影响：采用ＲＴ—ＰＣＲ　法，免疫细胞化学ＳＡＢＣ法，荧光分光光度法及Ｗｅｓｔ－　ｅｒｎ蛋白印迹法，结果显示经采用含拮新康血清处理　Ｋ５６２／Ａ０２及原代耐药白血病细胞后，Ｐ—ｇｐ／ｍｄｒ—Ｊ　基因的表达，与无药组比较明显下降（Ｐ＜０．０１），研　究表明拮新康能通过降低Ｐｇｐ／ｍｄｒ—Ｊ基因表达，逆　转白血病细胞ＭＤＲ。　５．甲基莲心碱对Ｋ５６２／Ａ０２细胞内ＧＳＨ含量及　ＧＳＴ一　表达影响：采用生物化学ＤＴＮＢ法、ＭＴＴ法　ＲＴ—ＰＣＲ法及Ｗｅｓｔｅｒｎ蛋白印迹法探讨甲基莲心碱　对Ｋ５６２／Ａ０２细胞内谷胱甘肽含量（ＧＳＨ）及对谷胱　甘肽Ｓ转移酶　（ＧＳＴ一　）表达的影响，结果显示：①　Ｋ５６２／Ａ０２细胞内ＧＳＨ含量高于敏感的Ｋ５６２细胞内　ＧＳＨ含量（Ｐ＜０．０５）。经甲基莲心碱处理后Ｋ５６２／　Ａ０２细胞内ＧＳＨ含量较无药组明显下降（Ｐ＜０．０１）；　②经甲基莲心碱处理Ｋ５６２／Ａ０２细胞后ＧＳＴ一　＂ｔｒｍＲＮＡ的转录和蛋白的表达明显下调，与无药组比　较有明显差异（Ｐ＜０．０１），研究说明甲基莲心碱可通　过谷胱甘肽解毒代谢酶的途经逆转白血病多药耐药。

纳米药物载体介导的联合给药逆转肿瘤多药耐药的研究进展

目的：为设计用于联合给药逆转肿瘤多药耐药的新型纳米药物载体提供参考。方法：以“纳米药物载体”“联合给药”“多药耐药”“Multidrug

resistance”“Co-delivery”“Nanoparticle”等为关键词，组合查询2012-2017年在中国知网、万方、维普、PubMed、Elsevier等数据库中的相关文献，对纳米药物载体介导的联合给药在逆转肿瘤多药耐药中的优势及联合给药的类型进行综述。结果与结论：共检索到相关文献282篇，其中有效文献47篇。药物经纳米载体包载后具有增加药物在肿瘤部位的蓄积、延长药物在体内的循环时间、促进药物在肿瘤部位的靶向递送、控制联合给药药物比例、增强逆转多药耐药的协同作用等优势。纳米载体可以介导不同类型药物的联合给药用于逆转肿瘤多药耐药。联合递送的药物组合类型包括化疗药与化疗药、化疗药与多药耐药逆转剂、化疗药与小干扰RNA、化疗药与单克隆抗体、天然产物与天然产物等。其中，采用化疗药与其他药联合给药是最常见的联合给药类型。纳米药物载体介导的联合给药是逆转肿瘤多药耐药的非常具有潜力的给药形式，但目前均未进入临床阶段。为使纳米药物载体介导的联合给药更好地应用于临床，在处方工艺和临床效果评价等方面尚需大量的研究工作。

关键词 纳米药物载体；联合给药；肿瘤多药耐药；综述

肿瘤多药耐药（MDR）是指肿瘤细胞在对一种化疗药产生耐药的情况下同时对一系列不同结构和不同机制的化疗药产生耐药的现象，MDR是临床上导致化疗失败的重要原因[1]。MDR发生机制复杂，包括细胞内因以及肿瘤微环境改变等，MDR发生机制的复杂性为克服肿瘤耐药带来挑战[2-3]。目前有研究报道的逆转MDR的策略很多，包括应用新型药物递送系统递送化疗药、采用MDR逆转剂与传统化疗药联合给药等[4-6]。与临床单一药物治疗比较，联合给药对耐药肿瘤具有更好的疗效，目前临床上往往采用联合给药的策略治疗耐药肿瘤或降低耐药肿瘤的发生率[7]。采用纳米药物载体共载需联合给药的药物可进一步增强对耐药肿瘤的增殖抑制作用，为逆转肿瘤MDR提供了很好的药物递送平台[8-9]。