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实验一用ELISA试剂盒快速测定食物中链霉素

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合肥师范学院新开实验项目试做报告
单位名称： 生命科学系 试做日期： 2015 年 1
月 7 日

新开实验项目名称 用ELISA试剂盒快速测定食物中
链霉素
学 时 数 4

面 向 专 业 2012级 食品质量与安全 试作教师签名 张方艳
一、实验目的、要求
理解链霉素ELISA试剂盒在蜂蜜、牛乳动物肌肉和肝脏中链霉素检测的现实意
义；学会使用链霉素ELISA试剂盒。

二、实验原理
本方法是应用抗原抗体反应原理，采用竞争抑制法构建的一种ELISA试剂。在预
包被有在抗链霉素抗体的微孔反应孔内，依次加入链霉素酶标记物、链霉素标准液或
样品溶液，然后孵育一定时间，则游离链霉素与链霉素酶标记物竞争链霉素抗体结合
位点（竞争性酶免疫分析）。没有结合的链霉素酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶
基质（过氧化脲）和发色剂（TMB）/四甲基联苯胺）加入到微孔中并且孵育一定时间。
结合的链霉素酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。未显色孔为阳性，显色孔
为阴性。检测过程中设置阴性对照、阳性对照或空白对照。可通过目测对比颜色变化
进行定性判读，也可加入终止液后使颜色由蓝色转变为黄色，读取在 450nrn 处的
OD值（选择参比波长≥ 600nm）；或直接在630nm处读取OD值。OD值与样品中的链
霉素浓度成反比。
三、实验所用主要仪器、试剂及材料
主要仪器：恒温箱、单道微量移液器，塑料吸嘴，洗瓶，酶标仪，洗板机
试剂：链霉素ELISA试剂盒（过氧化脲，发色剂（TMB）/四甲基联苯胺）
材料：牛乳、蜂蜜、猪肝脏
四、操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每
种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记
录标准孔和样品孔所在的位置。
5 加标准品/样品：加标准品/样品50ml/孔到对应的微孔中，然后加入链霉素抗试
剂50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5
次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、加酶标物：加入链霉素酶标物100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃
避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。
8、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖
板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。
9、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双
波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不
加终止液用目测法可进行判定)。
五、实验结果记录与判定：
未显色孔为阳性，显色孔为阴性
六、思考题
1、ELISA试剂盒在蜂蜜、牛乳及猪肝脏中中链霉素检测时。是如何保证灵敏度和特
异性的？

试做实
验小结
预实验选用的实验材料是猪肝脏，实验结果有无色没有转变为蓝色，说明所

选材料中不存在链霉素。

开出注
意事项

1、室温低于20℃或试剂及样品没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准
的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，
重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的
任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使
用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新
密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度
（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20 min即可。
若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长），但不得超过40min。反之，
则减短反应时间。
9、链霉素快速检测试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检
测吸光度值和灵敏度发生变化。
院（系、
部）验
收组审
查意见
院（系、部）负责人签字：

1、一些不法商贩为了防止辣椒久置变色、失去光泽，而采用一种人工合成的红
色物质，使辣椒具有鲜亮的色泽。请问这种这种物质是什么？快速检测该类
物质的原理是什么？
2、下列 不是水溶性非食用色素得快速检测方法。（ ）
A、盐酸萘乙二胺 B、脱脂棉染色法
C、羊毛染色法 D、罗丹明B法
3、亚硝酸盐的快速检测方法是 。（ ）
A、盐酸萘乙二胺 B、脱脂棉染色法
C、羊毛染色法 D、罗丹明B法

2008年中国出现毒奶粉事件。事件起因是很多食用三鹿集团生产的奶粉的婴儿被发现患有
肾结石，随后在其奶粉中被发现化工原料三聚氰胺。该事件造成39,965个婴儿不同程度的
病症，该事件亦重创中国制造商品信誉，多个国家禁止了中国乳制品进口。请问三鹿集团向
奶粉中加入三聚氰胺的目的何在？针对三聚氰胺的快速检测法方法有哪些？分别基于什么
原理？

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酶联免疫在食品检测中的应用

酶联免疫在食品检测中的应用


方法也正在被广泛地应用于各种藻类和贝类毒素的检测。
细菌污染检测
• 目前利用ELSIA检测食品中的有害细菌数量有 许多种途径，其中通过制备单克隆抗体分析食品 中细菌的酶联免疫测定技术研究最多，检测结果 准确可靠。ELISA 法可用于检测食品中沙门氏菌、 军团菌、大肠杆菌、李斯特菌及金黄色葡萄球菌 等致病微生物。另外，ELISA 在寄生虫的检测中 也有应用，如：猪弓形虫。
3.原理（以双抗体夹心法为例）：
抗体
待测抗原
酶标抗体
显色
ELISA基本原理
（1）利用抗原与抗体的特异反应将待测 物与酶建立关联。 （2）通过酶与底物产生颜色反应，用于 定量测定。
ELISA测定中酶的作用
由于酶的催化效率很高，间接地放大了 免疫反应的结果，使测定具有极高的灵 敏度。
ELISA技术在食品分析中的应用
近年来，ELISA因其操作程序的规范化、简单化 和检测的高灵敏性，在农药残留、动物违禁药物残 留、有害细菌、有机物污染、生物毒素、食品添加 剂和人畜共患疾病病原体的快速检测和分析等食品 安全性检测领域正逐步推广应用。
毒素检测
真菌毒素是真菌产生的次级代谢产物，有十几种对人类危害 较大，它们具有毒性强和污染频率高的特点。 目前利用合 成单克隆抗体的方式，几乎所有重要真菌毒素如伏马毒素、 赭曲毒素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯酮、展青霉素、 黄曲霉毒素（AFT）等的ELISA 检测方法均已建立。另外该
农药残留检测
酶联免疫测定已成为许多国际权威分析机构如AOAC分析
农药残留的首选方法。迄今为止，应用酶联免疫测定检测
食品中的残留农药主要为除草剂、杀虫剂和杀菌剂。例如
草甘膦的ELISA检出下限为0.07μg/mL，与色谱法测定的
食源性致病菌快速检测方法研究报告

食源性致病菌快速检测方法研究报告

食源性致病菌快速检测方法研究报告摘要】目的应用酶联免疫吸附实验（ELISA）快速检测奶类及肉类制品中沙门菌。

方法样品经增菌后，用ELISA法及国标法对样品中的沙门菌进行初步检测，并比较ELISA法检测结果与国标法灵敏性、特异性、符合率。

结果检测200份奶类制品和肉制品，经ELISA法检测阳性率为8.3%，国标法阳性率为6.7%。

ELISA法敏感性、特异性分别为100%、97%，与国标法符合率达99.3%。

结论 ELISA法可快速、方便的对食品中沙门菌的污染情况进行初步检测，灵敏度高、特异性好，与国标法符合率高。

适用于食品中沙门菌的初步检测。

【关键词】奶制品肉制品沙门菌 ELISA沙门菌为常见的引起食源性疾病爆发的病原菌，在我国微生物性食物中毒中一直位居首位，而受沙门菌污染的奶、肉制品为造成人类感染的主要来源，因此沙门菌一直为医疗卫生、食品卫生及商检部门重点检验对象之一[1]。

本研究采用ELISA法检测奶、肉制品中沙门菌，并与国标法进行比较研究，现报道如下：1 材料与方法1.1实验材料奶、肉制品分别来自本市8家不同超市，包括70份奶及奶制品样本，60份肉及肉制品样本。

取样均采取随机抽样的方法进行。

每份样品250ml或250g，经无菌包装后置冷链保存送实验室检测。

缓冲蛋白胨水，氯化镁孔雀绿增菌液，四硫酸钠煌绿增菌液，亚硒酸盐胱氨酸增菌液，亚硫酸铋琼脂，DHL琼脂，HE琼脂，WS琼脂，SS琼脂，三糖铁琼脂，蛋白陈水、靛基质试剂，尿素琼脂（pH7.2)，氰化钾（KCN）培养基，氨基酸脱梭酶试验培养基，糖发酵管， ONPG培养基，半固体琼脂，丙二酸钠培养基，沙门氏菌因子血清。

均按国标相关规定进行。

ELISA相关试剂均购自试剂公司。

1.2实验方法样品按国标法相关规定预先增菌。

样品处理后于36°C培养4h，转种于100ml氯化镁孔雀绿增菌液中，42°C18-24h，另取10ml转种于亚硒酸盐胱氨酸增菌液中，36°C18-24h。

霉素检测操作方法

霉素检测操作方法

霉素检测操作方法
霉素检测操作方法包括以下步骤：
1. 样品准备：将待检测样品进行处理，以保证准确的检测结果。

对于食品样品，一般需要将样品进行研磨或切割成均匀的粉末或块状样品。

对于环境样品，需要将样品进行适当的处理，如过滤或离心等。

2. 提取：将样品中的霉菌毒素提取出来，以便进行后续的分析。

提取方法可以根据不同的检测要求选择。

常用的提取方法包括溶剂提取、固相微萃取等。

3. 分析：将提取得到的样品进行分析，检测霉菌毒素的含量。

常用的霉素检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附试验等。

根据不同的分析方法，还需要准备相应的试剂和仪器设备。

4. 结果判读：根据分析结果，判断样品中霉菌毒素的含量是否超标。

可以根据国家相关的标准或指标进行判定，判断样品是否合格。

需要注意的是，在进行霉素检测时，应严格按照实验操作规程进行，避免样品污染和操作误差的发生。

同时，还需注意个人防护，以保证实验操作的安全。

食品中致敏物质的检测与控制

食品中致敏物质的检测与控制

食品中致敏物质的检测与控制随着人们生活水平的提高和饮食习惯的多样化，食品安全问题受到了越来越多的关注。

其中，食品中的致敏物质是引起人们担忧的一个重要因素。

致敏物质能够引发过敏反应，对人体健康产生负面影响。

因此，对于食品中致敏物质的检测和控制显得尤为重要。

食物过敏是一种免疫系统异常反应，当人体暴露在致敏物质下时，免疫系统会产生一系列的过敏反应，如皮肤发红、呼吸困难等。

常见的食品过敏原包括花生、虾、牛奶、鸡蛋等，但实际上，食品过敏源多种多样，并且对不同的人群可能产生不同的过敏反应。

因此，确保食品中致敏物质的检测和控制非常重要。

目前，食品中致敏物质的检测主要通过实验室分析方法来实施。

这些实验室方法可以对食品中的致敏物质进行精确的测定，确保食品的质量和安全性。

常见的实验室检测方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）和聚合酶链反应（PCR）等。

这些方法可以准确地检测食品中的致敏物质，并提供数据支持给食品生产商和监管部门。

同时，这些方法还可以帮助消费者做出明智的购买决策。

在食品生产过程中，控制食品中致敏物质的含量也是非常重要的。

由于不同的食品制造过程和原料，食品中的致敏物质含量可能会有所不同。

因此，食品生产商需要通过科学的控制方法来降低食品中致敏物质的含量。

例如，在生产过程中使用替代原料、改变加工方法或者采用特殊的处理技术，这些方法都可以有效地减少食品中的致敏物质含量。

除了食品生产过程中的控制，消费者在购买食品时也有一定的责任和义务。

作为消费者，我们应该了解自己对不同食品的过敏情况，并谨慎选择合适的食品。

在购买食品时，我们可以查看食品包装上的标签，特别注意是否包含自己过敏源物质，同时也可以咨询专业人士的建议。

除了食品中致敏物质的检测和控制，加强对食品过敏的研究也是非常重要的。

通过深入研究食物过敏的机制，可以更好地预防和治疗食物过敏。

目前，科学家们已经发现了某些基因与食物过敏之间的关联，这些发现有助于我们更好地理解食物过敏的发生机制，并为相关疾病的治疗提供新的思路。