药理实验方法学重点
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药理实验方法学药理学是研究药物在生物体内作用机理和药效学的科学。
药理实验方法学是药理学的基础,是药理学实验研究的方法和技术的总称。
药理实验方法学的研究对于揭示药物的作用机制、药效学、毒理学等具有重要意义。
下面将介绍一些常见的药理实验方法学。
首先,药理学实验的基本方法之一是体外实验方法。
体外实验是指在体外环境中进行的实验,常用的体外实验方法包括离体器官实验、细胞培养实验等。
离体器官实验是将动物的器官取出后放置在适当的培养液中进行实验,通过观察器官的生理功能变化来研究药物的作用机制。
细胞培养实验是将动物组织中的细胞进行离体培养,然后进行药物的作用研究。
体外实验方法可以减少动物的使用,同时也可以更好地控制实验条件,是药理学研究中常用的方法之一。
其次,药理学实验的另一种方法是体内实验方法。
体内实验是指在活体动物体内进行的实验,常用的体内实验方法包括动物实验、药物代谢实验等。
动物实验是将药物通过不同的给药途径给予实验动物,然后观察动物的生理、病理变化,从而研究药物的药效学和毒理学。
药物代谢实验是研究药物在体内的代谢过程,通过检测药物及其代谢产物在体内的浓度变化来研究药物的代谢途径和代谢动力学。
体内实验方法可以更好地模拟药物在生物体内的作用过程,是药理学研究中不可或缺的方法。
此外,药理学实验还可以采用计算机辅助实验方法。
随着计算机技术的发展,计算机辅助实验方法在药理学研究中得到了广泛应用。
计算机辅助实验方法包括药物分子模拟、药效动力学模拟等。
药物分子模拟是利用计算机对药物分子进行模拟,从而研究药物与受体的结合方式和作用机制。
药效动力学模拟是通过建立药物在体内的动力学模型,模拟药物在体内的代谢和排泄过程。
计算机辅助实验方法可以更好地理解药物的作用机制和药效学特性,为药物研发提供重要的参考。
总之,药理实验方法学是药理学研究的基础,不同的实验方法可以相互补充,共同揭示药物的作用机制和药效学特性。
随着科学技术的不断发展,药理实验方法学也在不断创新和完善,为药物研发和临床应用提供了有力支持。
药理学实验方法包括
1、体外实验:主要是在体外模拟生物系统的实验,用于研究药物的药理作用机制,
如电聚焦法、半稳定法、趋式滤液法、吸附氯化钾法、血浆药代动力学等。
2、动物实验:通过运用实验动物,研究药物的药理作用、药效学性质,帮助有效的
选择和用药,从而推动药物研发的发展。
3、临床实验:最重要的药理学研究方法,是对导致药物最终出现药效作用的机制和
动力学等进行研究。
通过临床研究,一方面可以评价药物的作用本质,另一方面也可以研
究其作用剂量,并可以用于起草药物的作用规律,从而可以指导有效的用药。
4、免疫学方法:新药研究中常用的药理学实验方法,用于评价药物分子对免疫反应,即向某种特定抗原的免疫反应。
5、微量元素分析:是研究药物的一种实验方法,用于研究药物的化学性质,研究药
物的释放、吸收、转化、排出和代谢谱等。
6、分子生物学方法:是一种新兴的药理学方法,用于研究药物对蛋白质、基因和细
胞内信号传导机制的影响。
7、微生物药理学实验:是研究药物抗病毒、抗菌和抗原过程的一种实验方法,旨在
该药物是否具有抗菌活性,该药物对微生物种群的影响,其有效剂量等。
中药药理实验方法学
中药药理实验方法学是研究中药作用药理机制的重要科学手段。
近些年来,随着生物医学技术飞速发展,中药药理学也得到了明显的进步,它已经成为中医药广泛应用的重要支持。
中药药理学的实验方法学涵盖了实验室动物模型、毒理学数据的解释、抗病毒活性的分析以及药物的有效成分的发现和鉴定等实验手段。
以实验动物模型为例,实验中需要使用对应的动物模型、试验方法和实验条件来验证药物是否有安全性和某种特异性的活性,或者是否有药物动力学、药代动力学等药理学数据。
实验动物模型一般包括大鼠、小鼠、大白鼠、鸭子等动物,根据药物疗效特点和实验目的,可以采用多种动物模型,进行分析、比较和研究。
毒理学数据的解释是实验的重点,它可以根据实验结果提出药物的剂量效应关系,并从短期和长期的角度研究药物的毒理活性,评价它是否有无毒性和有益作用。
抗病毒活性的分析也是实验中重要和必须的部分,它尤其适用于中药药理学研究,它可以通过免疫细胞杂交等实验手段,分析药物的抗病毒活性、视网膜保护剂作用等,为临床医疗提供实质性的依据。
此外,以中药药物鉴定分离和定量测定为基础的药理学研究,可以精准把握药物的活性成分,从而指导其合理用药。
这在实验中也需要进行调查研究。
总之,中药药理实验方法学是实现理解中药作用机理,为临床应用提供科学依据的重要工具。
多种实验手段结合起来,有助于深入研究中药药理特性、解析药物动力学和药物有效成分等问题。
它为临床医疗应用提供了支持,增加了对中药药效研究的是理解,为临床新药的研制和疾病的防治提供了重要的科学保障。
第一章药理学实验方法第一节分子生物学实验方法与技术分子生物技术在药理学实验中运用较为普遍,包括核酸分子探针的标志、核酸分子杂交、多聚酶链反响、蛋白印迹杂交技术、cDNA文库、随机分子库技术、外核基因在真核细胞中的表达、转基因植物、人类基因治疗等。
现将更为常用的技术引见如下:一、核酸分子探针的标志标志核酸分子探针〔nucleic acid probe〕是停止核杂交的基础,依据核酸分子探针的来源及性质停止选择,选择的基本原那么是具有高度的特异性,探针选择直接影响杂交结果的剖析。
依据检测对象和目的不同,,可选择不同的探针种类及标志方法。
㈠探针种类1.基因组DNA探针是克隆化的各种基因片断,也是最常用的核酸探针,探针应尽能够选用基因编码〔外显子〕,防止运用内含子及其它非编码序列。
2.cDNA探针与mRNA互补的DNA链称cDNA,是一种较为理想的核酸探针,特异性较高。
3.RNA探针RNA与RNA或DNA杂交体的探针动摇性,特异性高。
4.寡核苷酸探针人工分解寡核苷酸片段做探针,可依据需求分解相应序列。
㈡标志物常用的探针标志物有两类:放射性同位素和非放射性同位素。
标志物的检测具有高度灵敏性和特异性。
标志和探针结合不影响杂交的特异性和动摇性。
其中放射性同位素是运用最多的探针标志物,但易形成放射性污染,少数同位素的半衰期短,不能临时寄存。
常用的放射性同位素有32P¸3P¸35S,有时也用14C,125I或131I。
二、核酸分子杂交〔nucleic acid hybridiazation 〕是指具有一定同源序列的两条核酸单链在一定的条件下,按碱基互补配对原那么构成异质双链的进程。
核酸分子杂交是分子生物学范围运用最普遍的技术,灵敏度高、特异性强,主要用于特异DNA或RNA的定性定量检测。
三、聚合酶链反响〔polymerase chain reaction,PCR〕是一种体外酶促扩增特异DNA片段的方法。
药理学实验的基本知识和基本技术一、实验动物的种类选择药理学实验常用的动物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫、犬、蛙、蟾蜍等。
常根据实验目的和要求选用不同的实验动物。
由于不同的动物具有不同的特点,故所选用的动物应能较好地反映试验药物的选择性作用,并符合节约的原则。
小白鼠:系实验室最常用的一种动物。
易于大量繁殖,且价廉,适用需要大量动物的实验,如药物筛选、半数致死量测定、药物效价比较、抗感染、抗肿瘤药物及避孕药物的研究等。
大白鼠:与小白鼠相似。
一些在小白鼠身上不便进行的实验可选用大白鼠,如药物抗炎作用的实验常选用大白鼠踝关节制备关节炎的模型。
此外也可用大白鼠直接记录血压、作胆管插管,或用大白鼠观察药物的亚急性或慢性毒性。
大白鼠的血压和人相近,且稳定,现常用于抗高血压药物实验。
豚鼠:是实验室常用动物之一。
对组织胺很敏感,容易致敏,常用于平喘药和抗组胺药的实验。
对结核菌亦敏感,故也用于抗结核药的研究。
此外还用于离体心脏及平滑肌实验,其乳头肌和心房常用于电生理特性及心肌细胞动作电位实验,研究抗心律失常药物的机理。
家兔:温顺、易饲养,常用于观察药物对心脏、呼吸的影响及农药中毒和解救的实验。
亦用于研究药物对中枢神经系统的作用、体温实验、热原检查及避孕药实验。
猫:与家兔比较,猫对外科手术的耐受性强,血压较稳定,故常用于血压实验。
但价格较贵。
此外,猫也常用于心血管药物及中枢神经系统药物的研究。
犬:药理实验需大动物时常用犬。
常用于观察药物对心脏泵功能和血流动力学的影响,心肌细胞电生理研究,降压药及抗休克药的研究等。
犬还可以通过训练,用于慢性实验研究,如条件反射、高血压的实验治疗、胃肠蠕动和分泌实验、慢性毒性实验。
蛙和蟾蜍离体心脏能较持久地有节律地搏动,常用于观察药物对心脏的作用;坐骨神经和腓肠肌标本可用来观察药物对周围神经、神经肌肉或横纹肌的作用;蛙的腹直肌还可以用于鉴定胆碱能药物的作用。
须注意:由于动物对外界刺激的反应存在个体差异,在选择实验动物时,还应注意动物的年龄、体重、性别、生理状态、健康状况及其品系、等级等因素对实验的影响。
(完整版)临床药理学检验知识点完整版临床药理学检验知识点
临床药理学检验是用来评估患者身体对药物的反应以及药物在
身体内的动态过程的方法。
以下是一些常见的临床药理学检验知识点:
药物代谢
羟化作用
许多药物的代谢是通过肝脏中的细胞色素P450酶系统完成的,其中许多酶同时作用于许多化合物。
最常见的代谢途径是羟基化作用,在这个过程中,药物的代谢产物通过尿液排出。
酰胺水解
另一种常见的药物代谢途径是酰胺水解,这种代谢途径主要是
通过肝脏和肾脏的酯酶完成的。
剂量依赖性
最小有效剂量
药物的最小有效剂量是指可以治疗特定疾病的最小剂量,同时最小有效剂量还应该能够保证疗效与毒副作用的平衡。
毒性剂量
毒性剂量是指在不利的条件下,可以引起毒性反应的最小药物剂量。
毒副作用可以通过剂量依赖性来识别和预测。
致死剂量
致死剂量是指在不利条件下,可以引起死亡结果的最低药物剂量。
药效学
亲和力
药物的亲和力是指药物分子结构与细胞蛋白质结构之间的亲和性。
亲和力越大,药物与细胞蛋白质之间的结合就越紧密,药物的药效就越大。
题目作用
药物的靶向作用是指药物与特定的受体或酶结合,产生作用的过程。
药物的目标作用可以用来识别药物在体内的作用模式。
以上是一些常见的临床药理学检验知识点,医生需要透彻了解这些概念,才能更好地判断患者在使用药物时可能会出现的问题。
药理学实验基础知识点总结药理学实验是药物发现、研究和开发的重要环节,通过实验对药物的药理学特性进行评估,包括药理学作用、药动学、毒性等。
药理学实验要求严谨的实验设计和操作,同时也需要具备丰富的药理学知识和实验技能。
本文将针对药理学实验的基础知识点进行总结,包括实验设计、药理学作用评价、药动学评价、毒性评价等方面的内容。
一、药理学实验的基础知识点1. 实验设计实验设计是药理学实验的重要环节,合理的实验设计可以保证实验结果的可靠性和准确性。
常见的实验设计包括随机对照实验、对照组设计、交叉设计等。
在实验设计中需要考虑到实验对象的选择、样本数量、实验组织、数据分析等方面的内容。
2. 药理学作用评价药理学作用评价是对药物在生物体内产生的药理效应进行评估。
常见的药理学作用评价方法包括体外实验、体内实验、生物化学实验等。
通过这些实验可以评价药物对生物体的生理功能、生化代谢等方面的影响。
3. 药动学评价药动学评价是对药物在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄等动力学过程进行评估。
常见的药动学评价方法包括药物浓度-时间曲线、体内动力学参数的测定等。
通过这些实验可以评价药物在生物体内的药代动力学特性。
4. 毒性评价毒性评价是对药物在生物体内产生的毒性反应进行评估。
常见的毒性评价方法包括急性毒性实验、慢性毒性实验、致畸毒性实验等。
通过这些实验可以评价药物对生物体产生的毒性效应和毒性机制。
二、药理学实验的常用技术和方法1. 细胞培养技术细胞培养技术是现代药理学实验中常用的技术之一,通过对细胞系和细胞器官进行培养,可以评价药物对细胞的毒性和药理学作用。
常用的细胞培养技术包括细胞传代培养、凋亡检测、免疫细胞化学染色等。
2. 动物实验技术动物实验技术是药理学实验中常用的技术之一,通过对动物进行给药和实验观察,可以评价药物的药理学作用、药代动力学特性和毒性效应。
常用的动物实验技术包括造模实验、行为学实验、代谢实验等。
3. 分子生物学技术分子生物学技术是药理学实验中常用的技术之一,通过对药物靶标和信号通路进行研究,可以揭示药物的作用机制和药效基础。
药理学实验方法药理学实验方法第-讲实验动物的选择在药理学实验中,要根据实验目的,选择不同动物,常用动物有:1、青蛙和蟾蜍心脏(离体、在体)实验, 制备坐骨N-腓肠标本等。
2、小白鼠:药物初筛:镇痛、耐缺氧、抗肿瘤药物、LD50测定、避孕药实验等。
3、大白鼠:抗炎作用,大白鼠踝关节肿胀实验,血压测量,胆管插管等。
长期性毒性试验。
4、豚鼠:对组胺敏感,并易于致敏,常用抗过敏药(平喘药、抗组胺药)实验。
离体心房、心脏、肠管实验等。
豚鼠对结核菌也敏感,也用于抗结核病药物实验。
5、兔:家兔易得,驯服,便于静脉注射和灌胃,常用于观察药物对心脏的作用和对CNS 的作用。
又由于其体温变化较敏感,也常用于体温实验及热原检查。
家兔也常用于避孕药实验。
6、猫:猫的血压比较稳定,具有咳咳嗽反射和呕吐动作。
因而常用于心血管药物实验和镇咳药、镇吐药实验。
7、狗:狗的血压比较稳定,常用于降压药、升压药和抗休克药实验。
狗比较容易驯服,最适用于慢性实验。
手术造瘘(胃、肠)以便观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。
此外,长期毒性实验也常用狗来进行。
* 附:给药途径及剂量限制1. 小白鼠(1)灌畏法:0.1~0.25ml/10g体重。
(2)皮下注射:0.1~0.3ml/10g体重。
(3)肌肉注射:0.2ml/每侧。
(4)腔注射:0.1~0.25ml/10g体重。
(5)静脉注射:0.05~0.1ml/10g体重。
1.大白鼠(1)灌畏法:2.0ml/10og体重。
<3.0ml/只。
(2)腔注射:0.1~0.25ml/10g体重。
第二讲实验动物的麻醉和处死一、各种实验动物的麻醉药物和麻醉方法1药理学实验方法1、乙醚乙醚为挥发性麻醉药。
常用于小动物(小鼠)的麻醉。
使用方法有:开放发和封闭法。
2、戊巴比妥钠戊巴比妥钠的作用稳定、麻醉持续时间中等(一次给药可维持作用2~4 hr),一般实验均可使用。
常用其3% 溶液。
各种动物所用剂量如下:狗:30mg/kg,iv猫、兔:30~40mg/kg,iv或ip大鼠、小鼠:40~50mg/kg,ip3、乌拉坦乌拉坦的作用较弱,对呼吸的抑制作用小是其优点。
一.1.首过效应:口服给药后,药物在到达体循环之前,经肠道、肠壁和肝脏的代谢分解使进入生物体内的相对药量降低。
2,判断方法:尾静脉给药AUC和门静脉给药AUC—比较判断肝首过—是—尾静脉》门静脉;门静脉给药和十二指肠给药AUC—比较判断肠首过—是—门静脉》十二指肠十二指肠和灌胃给药AUC—比较判断胃首过—是—十二指肠AUC》灌胃AUC 二.简述肾外包扎性高血压模型制备的基本原理和注意事项?答:原理:肾外异物包扎,可致肾周围炎,肾外形成一层纤维性鞘膜,压迫肾实质,造成肾组织缺血,使肾素形成增加,进而使血管紧张素含量增加,血压上升。
属肾性高血压模型。
注意事项:1)肾外包扎材料除自制双层孔胶薄膜和玻璃纸外,还可用绸布、乳胶、火棉胶等材料。
肾外包扎应足够紧,但不能勒破组织。
2) 如果要制造2肾1扎型,则一侧肾包扎后无需切除另一侧肾,术后3~6个月10%~20%动物形成高血压;如果要制造2肾2扎型,则一侧肾包扎后同法包扎另一侧肾,术后3~4周70%以上动物形成高血压。
三、(一)佐剂性关节炎1.大鼠AA的制备:选用雄性Lewis、Wistar或SD大鼠,体重200g左右,将每鼠右后足趾皮内注射完全弗氏佐剂(CFA)0.1ml致炎。
CFA是将卡介苗或死结合分枝杆菌加入已经高压灭菌的液体石蜡中,浓度为10mg/ml。
原发病变主要表现为早起致炎局部的炎症反应,致炎后18h右后足的肿胀达峰值,持续3d后逐渐减轻,8d后再度肿胀;继发病变一般出现于致炎后10d左右,表现为对侧和前肢的肿胀,耳和尾部出现“关节炎”小结,变应性角膜翳以及体重下降等等。
2.小鼠AA 的制备:选用雄性C57BL/6小鼠,8周龄,4%氟烷吸入麻醉,左侧胫-跗关节皮下两点皮下注射100ulCFA,CFA浓度为5ug/ul,对照组同方法注射液状石蜡。
造模后22d处死。
造模24h 内原发侧关节出现急性肿胀,第9天肿胀较严重。
模型组穿格子数和活动度明显降低。
造模后小鼠对于机械异常性疼痛和热痛出现明显退缩反应。
(二)II型胶原诱导的关节炎 1.小鼠CIA的制备:将鸡或牛II型胶原(CII)溶解于0.01mol/L的醋酸后与同等容积的含有低浓度卡介苗的液体石蜡油(ALCB)充分乳化,CII和ALCB的计量均为4mg/mL.,乳化在冰浴中进行。
在小鼠(18g左右)根部多点皮内注射乳化剂0.1ml,第21d在尾根部加强注射。
加强注射后,由第三者检查关节炎的发生情况。
2.大鼠CIA的制备:CII溶解于0.01mol/L 的醋酸中(CII终浓度为4mg/ml),充分研磨,4度过夜,讲CII溶液滴加至冷的不完全弗氏佐剂(IFA)中,等体积混合,充分乳化。
大鼠(体重150g左右)尾根部和背部分多点皮内注射0.1mLCII乳化剂。
7d后同法再坚强注射一次。
对照组注射0.01mol/L醋酸和IFA的乳化液。
从第20d后开始,用组织测量仪测定后足趾的容积。
评价指标:足趾肿胀度、全身表现评分、关节肿胀数、关节炎指数、X线评分、关节炎病理评分。
四、祛痰药的药理试验方法 1).呼吸道分泌液量测定法小鼠酚红实验法,基本原理:利用酚红小鼠腹腔注射后部分从气道排泄的特点,测定小鼠气道酚红排泄量,以判断受试药对气道通透性和分泌液量的影响.操作步骤:小鼠饥饿16-18h--注射酚红前30min受试药物灌胃--腹腔注射酚红药物,30min 后处死--血凝后,分离气管、气管插管并与注射器相连--用5% NaHco3 0.8ml 洗气管,反复三次--合并洗液,放置,得透明红色上清液,用分光光度计波长545nm比色,根据酚红标准曲线计算出酚红量。
注意事项:1.待小鼠体内血液凝固后,再切开颈部,以免血液中酚红影响。
2.气道内注入NaHco3溶液后吸出时要轻轻进行,一旦用力过度,肺泡会破裂液体流入胸腔。
2)呼吸道纤毛运动实验法---鸽纤毛运动实验法原理:利用气管纤毛运动带动颗粒物从气管内固定的向口腔方向的速度,测定药物祛痰药物,一般测运动2cm所需的时间.操作步骤:鸽气管分离,做2cm的标记---切开气管,将软木屑放在2cm向心端--记录2cm所需时间,观察给药前后0.5h的速度,正常是3-4min。
注意事项:鸽气管暴露实验注意温度,等待时颈部用生理盐水湿润纱布防治干燥.3)豚鼠气道黏液黏蛋白的测定.原理:气道黏液主要由杯细胞和黏液性腺细胞产生和分泌,内含黏蛋白,为黏多糖和蛋白质。
无机酸存在下,己糖醛酸从黏多糖中释放与咔唑起缩合反应,形成有色物,在530nm比色测定.操作:豚鼠麻醉处死,取气管称重----剪开气管用棉棒取黏液--水洗,离心,取上清液待用--上清加四硼酸-浓硫酸溶液,沸水加热15min--用分光光度计530nm 比色。
4)大鼠气道黏液中肺表面活性物质的测定.原理:肺表面活性物质(ps )由脂质和蛋白质组成,其中约90%是脂质,且绝大部分是定磷脂,因此磷脂的定量即可反应ps 的多少。
操作:制取支气管肺泡灌洗液--肺表面活性物质的测定---置620nm 波长比色法定量。
五、镇痛药的药效实验方法?具体有哪些实验方法?分类:化学刺激法,热刺激法,电刺激法,机械刺激法,慢性疼痛法、化学刺激法:1.小鼠扭体法 2.钾离子皮下透过法 3.缓激肽动脉注射法 4.福尔马林实验。
热刺激法:1.辐射热刺激法 2.小鼠热板法 3.小鼠热水缩尾法 电刺激法:1.大鼠牙髓刺激法2.电刺激大鼠甩尾法。
机械刺激法:1大鼠尾尖部压痛法 2.小鼠尾根部、后肢加压法3.大鼠压足法 慢性疼痛法:1.大鼠关节炎痛 2.神经源性疼痛 3.坐骨神经痛4.癌痛模型六、肝纤维化模型 1、CCL 4诱发的肝纤维化动物模型原理CCL 4−−−→−酶肝450P CCL 3. + CL . 启动脂质过氧化作用损伤肝细胞 操作:SD 大鼠、CCL 4、花生油(高压灭菌)分组:正常组、模型组、不同剂量的受试药物组、阳性对照药组 背部皮下注射CCL 42、异种血清诱发的肝纤维化动物模型 原理:异种血清进入动物体内引起免疫应答形成抗异种血清的抗体,长期刺激产生的免疫复合物来不及清除,沉积于肝脏的血管壁内外。
操作:wistar 雄大鼠、猪血清分组:同上 每只腹腔注射,,每次注0.5ml,每周2次,16周→给药组给予相应药物→血清,肝脏指标检查3、胆总管结扎致肝纤维化动物模型4、乙醇诱导的肝纤维化动物模型5、二甲基硝胺诱导的肝纤维化动物模型6、复合因素建立的肝纤维化动物模型七、发热模型、1.基本原理:发热反应大多是各种致热因子作用于机体,产生和释放内热原,并进一步影响体温调节中枢,使调温起步点提高,体温相应升高。
因此,实验室常用有关的刺激因子激活产生内热原。
操作方法:1测量体温,系将肛表涂上凡士林,使其润滑后插入动物肛门,兔一般插入3-4cm ,大鼠插入2cm ,放置3-5min 后取出读数。
2.引起发热反应包括(1)细菌培养液和内毒素引起的发热。
1)注射杀死的大肠埃希菌或乙型副伤寒沙门菌培养液2)注射伤寒-副伤寒菌苗3)注射腐败干草浸剂4)注射大肠埃希菌菌液5)注入伤寒沙门菌内毒素6)应用啤酒酵母悬液(2)非感染性发热复制法1)化学刺激法:给兔背部注射松节油0.4ml/kg 或2%2,4-二硝基酚乙醇溶液亦用1%角叉菜胶0.1ml ,于大鼠一侧后足趾皮下注射2)注入异性蛋白给兔肌注10%蛋白栋,剂量1.0g/kg ,可在2-3h 内引起体温显著升高3)温刺激法(3)实验性发热反应的影响因素1)动物特点的影响:不同种属、年龄和形态特征,对发热有明显影响2)实验环境温度的影响:实验环境的温度能明显影响发热的反应速度和强度3)实验动物活性的影响:体温实验时,必须考虑到动物的活动情况4)致热物质的注入量和注射部位。
八、抗抑郁药模型 1、应激模型 a.大、小鼠强迫游泳实验 动物在恶劣环境下会出现逃逸行为,当不能逃逸时便出现行为绝望。
大鼠强迫游泳实验是利用行为绝望建立的一种能有效的抗抑郁药的大鼠抑郁模型。
b.小鼠悬尾法 是一种急性行为绝望模型,将小鼠倒挂后,其行为首先是拼命挣扎,企图逃脱,最后进入绝望而静止不动。
大多数抗抑郁药可以明显缩短其不动时间。
c.慢性不可预知性应激实验2.大鼠嗅球切除模型大鼠嗅球切除后许多行为发生改变,如自发活动增加,被动学习能力欠缺等,均可以被抗抑郁剂所逆转。
3.药物诱发的抑郁模型 (利血平、5-HTP 、色胺)利血平拮抗实验:利血平是一种囊泡再摄取抑制剂,他使递质留在囊泡外,易被单胺氧化酶降解,从而使单胺,儿茶酚胺耗尽,动物出现上眼睑下垂、体温下降及强直症状,抗抑郁药能拮抗上述症状。
5-HTP 诱导的甩头行为 大鼠色胺惊厥增强实验4.大鼠隔离残杀行为模型、脑卒中后抑郁模型九、如何从脾脏中取T 细胞:超净台内无菌取小鼠脾脏,将脾脏转入pbs中,研磨制成单细胞悬液,,另取无菌试管,先加入淋巴细胞分离液,然后加入制备的细胞悬液,离心,分层,吸出单个核细胞层在另外无菌试管中,用红细胞裂解液处理,以除去红细胞,离心,弃上清,采用尼龙毛柱法:混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时,B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上,而多数T细胞则通过尼龙毛柱,将注射器固定在支架上,倒入37℃的细胞培养液,关闭阀门一定时间,然后打开阀门,放掉细胞培养液,以清洗几次尼龙毛,关上阀门。
将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度,约5.00×107个细胞/ml。
将细胞液倒入注射器内,使之没过尼龙毛柱。
盖上注射器,37℃温育45min至1h。
打开下口,缓慢放流,收集于离心管中。
离心,即获所需的T淋巴细胞。
十、肿瘤细胞的培养:肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。
当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。
另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。
肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。
肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。
一、组织培养肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞与体内正常细胞相比,不论在体内或在体外,在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。
生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞,其差异较小,但也并非完全相同。
培养中的肿瘤细胞具以下突出特点:-)形态和性状培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态,大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰,核膜、核仁轮廓明显,核糖体颗粒丰富。
电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密,微丝走行不如正常细胞规则,可能与肿瘤细胞具有不定向运动和锚着不依赖性有关。
二)生长增殖肿瘤细胞在体内具有不受控增殖性,在体外培养中仍如此。
正常二倍体细胞在体外培养中不加血清不能增殖,是因血清中含有很细胞增殖生长的因子,而癌细胞在低血清中(2%~5%)仍能生长。