当归多糖的分离纯化及其部分理化性质的研究
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2012年10月第9卷第30期·综述·CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报当归为伞形科(umbrelliferae )植物当归Angelica sinensis (Oliv.)Diels 的根,当归入肝、心、脾,药性甘、辛、温,具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效,为临床使用频率最高的中药之一,素有“十方九归”之称。
近年来,国内外学者应用现代提取分离、含量测定方法对当归的化学成分进行研究,发现多糖是其主要成分之一。
我国学者邓永健等[1]从岷县当归中分离出当归多糖(angelica polysaccharides ,AP ),组分含D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、葡萄糖醛酸以及半乳糖酸等。
AP 为当归主要水溶性成分,且具有明显地改善血液系统、免疫促进、抗肿瘤等广泛的药理活性,故成为当归药效成分研究的热点。
本文综述了近年来国内外有关AP 药理作用的研究进展。
1血液系统作用AP 能增加外周血红细胞、白细胞、血红蛋白及骨髓有核细胞数,并且这种作用在外周血细胞减少和骨髓受到抑制时尤为明显。
同时,AP 能够影响动物机体的造血系统,对小鼠造血干细胞、小鼠与人髓系造血祖细胞的增殖分化有显著促进作用。
Liu 等[2]将AP 作用于小鼠脾细胞后发现,小剂量AP (2.3mg/kg )可以快速恢复贫血小鼠的外周血红蛋白至正常水平,缓解了贫血症状。
另有实验发现,AP 能有效地刺激正常小鼠及贫血小鼠的早、晚期红系祖细胞和CFU-GM (粒细胞及巨噬细胞集落形成单位)的增殖,并可抑制K562细胞增殖,诱导其向红系、粒系细胞方向分化[3]。
同时,我国学者柳永青[4]发现,AP 通过保护和改善造血微环境,促进了造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化,直接或间接地诱导、激活造血微环境中的巨噬细胞、成纤维细胞,淋巴细胞等,从而产生造血效应。
杜小丽等[5]探讨了AP 对小鼠造血细胞表面黏附分子表达的影响,为阐述AP 在造血调控和动员方面的机制提供了实验依据。
当归多糖结构表征研究进展发布时间:2023-01-11T01:06:54.859Z 来源:《中国医学人文》2022年30期作者:张洪财1,王文姌1 [导读] 当归多糖作为水溶性生物大分子,是中药当归的主要活性成分之一。
随着近些年对于多糖研究的深入,张洪财1,王文姌1黑龙江中医药大学,北药基础与应用重点实验室,黑龙江哈尔滨,150040摘要:当归多糖作为水溶性生物大分子,是中药当归的主要活性成分之一。
随着近些年对于多糖研究的深入,科研工作者运用化学分析法和仪器分析法鉴定其结构,并开展相应的生物活性研究。
本文对当归多糖结构鉴定等研究进行总结,旨在为当归多糖的开发利用及生物活性研究提供参考。
关键词:当归多糖;结构表征当归为伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels.的干燥根,性温,味甘、辛。
具有补血活血、调经止痛、润肠通便之功效。
素有“十方九归”之称[1]。
多糖是具有多种生物活性的天然产物,引起了学者的关注。
本文围绕当归多糖Angelica sinensis polysaccharide的提取工艺、分离纯化和结构鉴定这三个方面的研究进行综述。
1.多糖结构表征目前的研究大多数集中于多糖一级结构,包括:分子量范围、单糖的组成、连接方式、糖苷键的构型及重复单元等。
多糖的高级结构研究较少,周涛[2]利用原子力显微镜AFM和透射电子显微镜TEM对其表观形貌和特征进行了初步研究,田苏阳[3]使用二维磁共振成像法与刚果红法确定是否含有三螺旋结构。
对于多糖结构解析,通常使用的方法如表1所示。
多糖甲基化后,通常使用红外光谱(IR)证实其完全甲基化,经水解、还原、乙酰化处理后,使用GC-MS进行测定,通过GC的出峰顺序和对MS谱图的主要离子碎片分析,得到各糖残基类型和比例,及其连接方式,并且由此推测出多糖的链接单元[4]。
通过GC-MS分析高碘酸氧化-Smith 降解产物,可以辅助验证甲基化分析结果。
当归多糖的研究进展王利华;王菲菲;刘悦;毕野;张馨方;赵晶;凌宁生【摘要】当归主要的活性物质为当归多糖,一般采用粗提、精提等多种分离技术来提取当归多糖.当归多糖具有丰富的生理活性,不仅对机体血液系统有明显作用,同时还具有抗肿瘤、增强免疫力、抗氧化、抗辐射等作用.本文综述了当归总多糖及其组分的结构、当归多糖的理化性质、分离纯化制备技术,以及当归多糖的生物学功能和制剂,同时提出了当归多糖的研究方向.【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2017(029)003【总页数】4页(P67-70)【关键词】当归多糖;结构性质;分离纯化;生物学功能;制剂【作者】王利华;王菲菲;刘悦;毕野;张馨方;赵晶;凌宁生【作者单位】天津生物工程职业技术学院,天津 300462;天津生物工程职业技术学院,天津 300462;天津生物工程职业技术学院,天津 300462;天津生物工程职业技术学院,天津 300462;天津生物工程职业技术学院,天津 300462;天津生物工程职业技术学院,天津 300462;天津生物工程职业技术学院,天津 300462【正文语种】中文【中图分类】R285多糖是一类天然高分子化合物,具有广泛的生物学功能[1, 2]。
植物多糖来源广泛,生理活性强,毒副作用小,所以对其综合开发利用已成为不仅是医药界甚至食品、化妆品等领域的热门话题[3]。
当归为伞形科植物当归[Angelica sinensis(Oliv) Diels]的干燥根,其产地主要分布在甘肃、陕西、湖北、云南、四川等地,其中中国甘肃岷县所产当归品质最好,作为常用传统中药,当归对女性妇科疾病有神奇疗效,有“十方九归”之称的当归一直被广泛用于各种疾病的治疗[4,5],并长时间作为保健食品使用。
当归对血液系统具有重要作用[6],当归的主要活性物质当归多糖,因其具有提高免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射等良好疗效[7],吸进了众多学者的广泛关注。
本文就当归多糖的理化性质、分离纯化、功能用途等进行综述。
当归多糖提取工艺的优化研究
以大枣当归为原料,研究当归多糖提取工艺优化。
提取多糖时,采用2-3-5步法:第一步静置,采用蒸馏水固定液比为1∶20,用0.1mol/L NaOH消化2h;第二步冷却沉淀,有效成分沉淀;第三步稀释混匀,用0.05mol/L HCI抽滤,滤液稀释15倍,调节温度60℃混合溶解;第四步再沉淀、再抽滤,升温至90℃抽滤,滤液稀释10倍,后冷却;第五步洗涤制备,采用0.01mol/L HCI洗涤,pH值调节至3.5-4.0,冷却沉淀,收集沉淀物。
以当归多糖出液的总糖量测定结果为指标,即可得出最优的提取工艺。
经研究结果表明:第一步消化时间1 h,第二步冷却温度维持–4°C,第三步料液比为1∶30,第四步温度为90°C,第五步冷却温度为0°C,最优的提取工艺为:蒸馏水(1∶20)+ NaOH消化(1h)+ 冷却沉淀–4°C + 稀释混匀(1∶30)+ 90°C抽滤+ 洗涤(pH.3.5-4.0)+ 0°C冷却沉淀,此提取工艺下提取的当归多糖总糖量为20.58 %。
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法(一)溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70%左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5h,多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似,碱提中碱的浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.(二)生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。
此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物,常用的酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶等。
(三)超声提取法超声波是一种高频率的机械波,其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏,有利用植物有效成分的释放,而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间的阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比,有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
(四)微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波,微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部,由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来,传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化(一)多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物,分级的方法可达到纯化的目的.可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等),也可按分子所带基团的性质分级.1、按溶解性不同分离(1)分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质,从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀.(2)盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
当归多糖的成分及其生物学作用作者:李成军金香兰沈云虹作者单位:齐齐哈尔医学院机能实验室【摘要】当归被广泛应用在中药的复方和验方中,随着对中药的广泛开发和利用,当归的主要成分被分离、纯化并且进行相应的结构确定,当归多糖是当归中主要生物活性物质,采用水提、醇沉和离子交换树脂和凝胶树脂的综合利用,当归多糖已经被分离出来。
生物学和药理学研究显示当归多糖在抗肿瘤、肝损伤、免疫作用等方面具有明显的作用。
本文就当归多糖的成分和生物学功能和临床应用加以综述,同时提出了当归多糖的研究方向。
【关键词】当归多糖提取分离抗肿瘤生物学功能临床应用当归为伞形科(Umbrelliferae)植物当归(Angelica sinensis(Oliv)Diels)的根,当归入肝、心、脾经,药性甘、辛、温,具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效,为临床使用频率最高的中药之一,素有“十方九归”之称[1-2 ]。
随着现代分析方法和仪器在中医药领域的应用,多糖、苯酞类、萜类、芳香族化合物等多种成份从当归中被分离出来。
当归多糖是当归中的主要成分之一,近年来国内外对当归多糖的成分研究和药理学研究有了新的进展,发现其对机体免疫系统、造血系统的明显作用以及抗肿瘤、抗放射性损伤的良好疗效[3]。
现就其提取分离、成分、生物学功能和临床应用等方面的研究进展综述如下。
1 当归多糖的提取、分离当归粉碎,过40 目筛,用一定浓度的乙醇溶液在较高温度内热处理原料2~3 次,得预处理当归粉。
预处理当归粉于80℃热水提取,离心,合并上清液,用乙酸调pH为4~5左右,离心去除沉淀,上清液浓缩后加乙醇至一定体积,4℃静置过夜,过滤,沉淀依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤,得到当归多糖粗品。
将其加入一定量去离子水溶解,用不同的方法去除游离蛋白后,透析,冷冻干燥得到初步纯化多糖。
初步纯化的多糖经济自交换柱和凝胶色谱柱柱层析,依次用磷酸盐缓冲液、0~1mol/L NaCl 溶液梯度洗脱,控制一定的洗脱速度一般为1.5~2ml/min,每管4~5ml 分部收集,逐管检测多糖含量(苯酚硫酸法A490nm)和蛋白质含量(紫外A280nm)[4-5]。
当归中当归多糖的现代应用及药理作用研究学校:陕西中医学院姓名:高夏班级:11级中药专升本班【摘要】:中药当归功效补血,活血,调经,止痛,润肠,当归为补血要药。
当归中起主要补血作用的化学成分是:当归多糖。
查阅了近年来有关当归多糖的文献资料,通过现代对当归多糖的研究,概述了当归多糖的药理作用及其在临床方面的应用。
【关键词】:当归当归多糖本品为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv) Diels的干燥根,味甘、辛,性温。
功能补血活血,调经止痛,润肠通便痹痛,跌扑损伤,痈疽疮疡。
当归的主要化学成分主要有挥发油,阿魏酸,当归多糖,氨基酸和维生素等,当归多糖为当归补血主要成分,现就当归多糖所具有的药理作用和现代临床应用归纳如下。
药理作用1、促进造血小鼠于7Gy剂量照射前24h,腹腔注射当归多糖(APS)300mg/kg,可使照射小鼠脾内源性造血灶数、脾重及骨髓有核细胞明显增加促进造血功能的恢复[2]。
给小鼠体内注射当归多糖有使外周造血干细胞数量增加的作用[3]。
当归多糖可使小鼠BMSCs黏附分子表达降低[4]。
对大鼠气血双虚的模型,予以APS15mg/kg灌胃,每日一次,连续十四天,可使气血双虚大鼠IL-6和EPO非常显著提高[5]。
2、抗血小板聚集及抗血栓当归多糖在凝血方面表现出双向调节作用既有抗凝血活性又有明显止血作用给小鼠注射APS5mg/kg每日一次,共三天,凝血时间明显延长,出血时间明显缩短;给家兔静脉注射APS2mg/kg,连续三天,TT和APTT明显延长,而PT则无差异。
提示当归多糖抗凝血作用主要是影响了内源性凝血系统,而对外源性凝血作用较弱[]。
3、调节免疫小鼠腹腔注射当归多糖(APS)50mg/kg,连续7d,对刚果红的廓清率提高41%;在皮下注射强的松龙15mg/kg的同时,每日腹腔注射(APS)25mg/kg或50mg/kg,则能拮抗强的松龙的上述免疫抑制作用。
APS10、20mg/kg给小鼠腹腔注射,每日一次连续七天,可拮抗环磷酰胺(cy)所致小鼠脾淋巴细胞抑制、NK细胞活性减弱及IL-2诱生水平低下的作用[]。
当归多糖AP-Ⅰ的提取、分析鉴定及抗肿瘤活性研究
商澎;杨铁虹;贾敏;朱德生;梅其炳;赵德化
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2000(015)0z1
【摘要】@@ 选用岷县产中国当归,机械破碎,乙醇回流提取挥发油;残渣烘干后用热水煎煮提取多糖,再用乙醇沉淀,离心收集粗提多糖;粗提多糖用蒸馏水溶解后,反复冻融数次后,冷冻干燥得AP-Ⅰ.采用改良苯酚-硫酸法测定总糖含量,间羟基联苯法测定糖醛酸含量,Serva Blue G染料结合法测定蛋白质含量.
【总页数】2页(P80-81)
【作者】商澎;杨铁虹;贾敏;朱德生;梅其炳;赵德化
【作者单位】第四军医大学药理学教研室,西安,710032;第四军医大学药理学教研室,西安,710032;第四军医大学药理学教研室,西安,710032;第四军医大学药理学教研室,西安,710032;第四军医大学药理学教研室,西安,710032;第四军医大学药理学教研室,西安,710032
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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当归多糖的分离纯化及其部分理化性质的研究刘 娟,彭仁王秀,乐 江,田卫群(武汉大学医学院药理学系,湖北武汉430071)摘要:目的 对甘肃岷县产当归中获得的当归多糖(ASP)进行分离纯化,并测定其部分理化参数。
方法 采用水煮-醇沉法从新鲜当归中提取当归粗多糖,Sevag法除蛋白,冷冻干燥。
苯酚-硫酸法测定总糖含量;UV法及IR法检测多糖性质;自动旋光仪测定旋光度;采用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(SEC-LLS)分析多糖的分子量范围及其分布;HP LC鉴定多糖的单糖组分及其相对百分比含量。
结果 所得当归多糖为浅米灰色,无甜味,易溶于水,总糖含量为96.8%;192nm处有明显吸收峰,260、280nm处均无吸收峰,证明被测物为多糖,且不含核酸及蛋白质;红外吸收光谱分析,在3352、2940、1747、1626、1414、1237、1021、536cm-1处表现为典型的多糖吸收峰;旋光度为+94.6°,糖残基间的苷键可能为α-糖苷键;分子量在1×104~111×105之间,80%的组分集中在413×104左右;当归多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖和木糖组成,其摩尔比值为17.8∶5.8∶12∶1∶2.2。
结论 所用方法提纯的当归多糖糖含量较高。
关键词:当归多糖;当归;单糖;分离纯化;理化性质中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1006-0103(2004)06-0412-03Isolation,purification and partial properties of polysaccharides from Angelica sinensisLI U Juan,PE NG Ren-xiu,Y UE Jiang,TI AN Wei-(Department o f Pharmacology,Medical College o f Wuhan Univer sity,Wuhan430071,China)Abstract:OBJECTIVE T o is olate and purify the polysaccharides fractions from Angelica sinensis(ASP),and to determine the partial char2 acters.METH ODS H ot water extracting and ethanol precipitating method were employed to is olate polysaccharides from fresh Angelica sinensis.A fter the rem oval of protein by Sevag method,the purified ASP was dried by frozen drier.The am ount of total carbohydrates of ASP was measured with phenol-sulfuric acid method.FT-IR spectrometry,UV-spectrophotometer,and automatic spectropolarimeter were used to determine the characteristic abs orption and optical rotation of the polysaccharides,respectively.S ize exclusion chromatography with laser light scattering(SEC-LLS)technology was employed to measure the m olecular masses.The m onosaccharides contained in ASP were analysed by HP LC.RESU LTS The am ount of total carbohydrates in ASP was96.8%.Both UV and IR displayed representative polysaccharides properties.The m olecular weight distribution was1×104-111×105,and eight percent was distributed in413×104.The m onosaccharides constituent of ASP were glucose,arabinose,galactose,rhamnose and xylose,and their m olar proportions were17.8∶5.8∶12∶1∶2.2.CON2 C L USION The am ount of total carbohydrates is high in ASP distilled by this method.The range of m olecular weight and m onosaccharides constituents of ASP are affirmed.K ey w ords:Angelica sinensis polysaccharides;Angelica sinensis;M onosaccharides;Is olation;PurificationC LC number:R917Document code:A Article I D:1006-0103(2004)06-0412-03 当归具有活血补血、润肠调经、扶正固本之功效。
从其水溶性部分提取的当归多糖具有丰富的生物活性,包括影响造血系统、调节免疫、抗肿瘤、抗辐射以及促进胃溃疡愈合等[1~4]。
确定当归多糖的分子量范围及单糖组分等性质,是研究其组效关系(constituent-activity relationship,C AR)的重要前提。
现从岷当归中分离纯化出当归多糖,并对其部分理化性质进行了研究。
1 实验部分1.1 药材、仪器和试剂岷县当归(甘肃岷县康达有限责任公司)。
UV-1601紫外可见分光光度计(日本岛津);170SX FT-IR型傅立叶变换红外光谱仪(美国尼高力);WZZ-2A型自动旋光仪(上海物理光学仪器厂);77520-01Freezone6冷冻干燥浓缩干胶系统(Labconco, US A);SEC-LLS由多角度光散射仪(M A LLS, DA W N-DSP,Wyatt T echn ology C o,US A,激光波长λ= 630nm),P100型泵(Therm o seperation products),Tsk -GE L G6000PWX L和G4000PWX L(7.8mm×300 mm)型凝胶柱以及示差检测仪RI-150组成;HP LC 系统由LC-6A泵、RI D-6A检测器(日本岛津), Z orbax Carbohydrate Analysis C olumn(Agilent C o,US A)和N2000色谱工作站(浙江大学)组成。
阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、果糖、木糖(中国药品生物制品检定华西药学杂志W C J・P S 2004,19(6):412~414 作者简介:刘娟(1979-),女,硕士,从事生化药理及药物代谢研究。
所);其余试剂均为市售分析纯。
1.2 方法1.2.1 当归多糖的分离纯化 新鲜当归粉碎后脱去表面脂肪,脱脂后滤得残渣,用水煎煮约1h。
水液浓缩至稠膏状,65%乙醇沉淀过滤,所得醇沉物以等量蒸馏水溶解,加10%氢氧化钙溶液调pH10~11,放置过夜,抽滤,滤液用3m ol・L-1硫酸溶液调pH5~6,再抽滤,滤液用85%乙醇沉淀,过滤得醇沉物,将其吸干并迅速移入真空干燥器中减压干燥,得粗当归多糖。
将多糖重新溶于蒸馏水,3000r・min-1离心10min,弃去沉淀。
用Sevag法去蛋白,即溶液中加入氯仿和正丁醇(25∶5∶1),剧烈振荡20min使其充分混匀,然后3000r・min-1离心10min,除去水相与有机相交界处的灰白色变性蛋白。
水相仍按此法反复去蛋白,共6次。
剩余茶色液体再加入4倍体积的无水乙醇,充分振荡摇匀,于4℃静置24h。
弃上清,沉淀部分以无水乙醇洗涤3次至洗涤液呈无色,小心吸弃洗涤液,自然干燥15min,冷冻干燥10h,即得当归多糖(ASP)。
1.2.2 总糖含量测定 采用苯酚-硫酸法,吸取5μg・ml-1的样品液2ml,测定吸光度,通过标准曲线法求得相应糖浓度值,并计算糖含量。
1.2.3 紫外光谱检测 称取冻干ASP样品10mg,置100ml量瓶中,加双蒸水溶解并稀释至刻度,摇匀。
在190~400nm区间进行扫描。
1.2.4 红外光谱检测 称取冻干ASP样品2mg,加入200mg干燥的K Br晶体,在红外灯照射下于研钵中轻轻研磨至极细,用压片机压片,红外分光光度计400~4000cm-1中红外区扫描,测定透光率曲线。
1.2.5 旋光度测定 称取冻干ASP样品100mg,双蒸水定容至10ml(浓度1%)。
用10cm的旋光测定管于自动旋光仪上测定旋光度值。
1.2.6 分子量范围的测定 精密称取冻干ASP样品50mg,溶于10ml生理盐水,配制成浓度为5‰的样品溶液。
以0.9%的NaCl溶液作流动相,流速110 ml・min-1。
所有溶液均先后用砂芯漏斗及012μm 过滤器过滤,并于用前超声脱气。
于25℃进行SEC-LLS测定。
用Astra软件进行数据的采集和分析。
样品在0.9%NaCl溶液中的折光指数增量(dn/ dc)通过OPTI LAB折光仪在632.8nm和25℃测定,样品的dn/dc值为0.133ml・g-1。
1.2.7 单糖组分及含量百分比的测定 准确称取葡萄糖(G lu)、阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(G al)、木糖(Xyl)、鼠李糖(Rha)和果糖(Fru)各20mg,分别溶于2ml双蒸水中,配制1%标准液。
精密称取冻干ASP 样品20mg,加入2m ol・L-1H2S O46ml,充分溶解后移入刻度试管,密封,于100℃水浴中水解10h。
水解液以固体碳酸钡中和,4000r・min-1离心,留取上清液。
采用HP LC法分析其单糖组分。
分析柱为Z orbax Carbohydrate Analysis C olumn;流动相为乙腈-水(78∶22);流速1.5ml・min-1;进样量20μl;柱温30℃;采用示差折光检测器检测。