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・2944・光明中医2019年10月第34卷第19期CJGMCM October2019.Vol34.19【实验研究】黄精多糖的分离、鉴定及免疫调节功效研究**基金项目：开封市科技发展计划项目(No.1703008)作者单位：河南大学第一附厲医院营养科(河南开封475001)余亚英摘要:黄精是一种药食同源的中草药，经过研究发现,黄精多糖含有多种活性成分，能增强免疫力、抗衰老、抗动脉粥样硬化、降血糖、降血脂、抗肿瘤等，医学对于黄精多糖的研究已经比较丰富，但对于黄精多糖的结构、对细胞的免疫调节作用研究的篇章较少，文章以黄精多糖为研究对象，研究黄精多糖的分离、鉴定、免疫调节作用。
关键词：黄精多糖；分离；鉴定；免疫调节功效；实验研究doi：10.3969/j.issn.1003-8914.2019.19.017文章编号：1003-8914(2019)-19-2944-02黄精是一种中草药⑷，是百合科黄精属植物，种类繁多，常见以根茎入药，能提高人体的免疫功能⑵，能补气、润肺、健脾，还可以抗衰老、抗动脉粥样硬化、降血糖、降血脂、抗肿瘤等⑶，研究黄精所含黄精多糖的结构，对细胞免疫调节作用具有重要的意义⑷，本文以研究黄精多糖的分离、鉴定及免疫调节功效为主题，现报道如下。
1黄精多糖的分离与鉴定1.1材料与试剂实验材料黄精，购买于河南的药材市场；使用莱阳经济技术开发区精细化工厂研制的硫酸，北京索莱宝科技公司生产的DPPH、DEAE-Sepharose Fast Flow、ABTS,美国Sigma公司生产的甘露糖、葡萄糖、木糖、鼠李糖、半乳糖、PMP。
1.2仪器上海天宇新企业发展有限公司生产的多功能粉碎机、日本岛津的GC-17AATF气相色谱仪，Alpha l-2LDplus牌的冷冻干燥机，北京浦西通用仪器公司生产的紫外可见分光光度计(TU-1900)。
1.3实验方法1-3.1黄精多糖的提取取适量的干燥黄精为实验材料，将黄精研磨粉碎，并过30目筛，然后再碾碎以后的黄精中加入相当于黄精10倍剂量的95%的乙醇溶液，进行回流提取1h,收集滤渣，进行干燥处理。
不同炮制方法对黄精多糖含量的影响瞿昊宇;冯楚雄;谢梦洲;朱建平;孙毅中;崔培梧;肖作为【摘要】目的探究湖南本土种植及加工的鸡头黄精、多花黄精采用不同炮制方法对黄精多糖含量的影响. 方法超声提取法提取多糖,用 Sevage 法除去蛋白,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量.结果鸡头黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、七蒸七晒、九蒸九晒炮制后,多糖含量分别为7.973%、3.584%、2.845%、2.194%;多花黄精经二蒸二晒、四蒸四晒、五蒸五晒、七蒸七晒炮制后,多糖含量分别为9.602%、3.185%、2.572%、2.043%;精密度良好(RSD=0.274%)、平均回收率99.29%、试验在60 min内稳定性良好(RSD=1.36%). 结论炮制过程蒸晒次数越多,黄精多糖含量越少.%Objective To explore different processing methods on polysaccharide content of Polygonatum sibiricum Red. and Polygonatum cyrtonema Hua, which cultivated and processed in Hunan. Methods The polysaccharidewas extracted by ultrasonic extraction and the protein was removed by Sevage's method. The content of polysaccharide was determined by phenol-sulfuric acid method. Results The polysaccharide content of Polygonatum sibiricum Red. with different times of steaming and drying processing methods were 7.973%, 3.584%, 2.845%, 2.194%, and the polysaccharide content of Polygonatum cyrtonema Hua with different processing methods were 9.602%, 3.185%, 2.572%, 2.043%; The precision was good (RSD=0.274%); The average recovery rate was 99.29%; the test has good stability in 60min (RSD=1.36%). Conclusion The content of polysaccharide was reduced with the more times of steaming and drying processing methods.【期刊名称】《湖南中医药大学学报》【年(卷),期】2015(035)012【总页数】3页(P53-55)【关键词】黄精;多花黄精;黄精多糖;炮制;苯酚-硫酸法;酶标仪【作者】瞿昊宇;冯楚雄;谢梦洲;朱建平;孙毅中;崔培梧;肖作为【作者单位】湖南中医药大学中医诊断学重点学科,湖南长沙 410208;湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学重点学科,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学重点学科,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学重点学科,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心,湖南长沙 410208;新化绿源农林科技有限公司,湖南娄底 417000;湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心,湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南长沙 410208;湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心,湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院,湖南长沙 410208;湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心,湖南长沙 410208【正文语种】中文【中图分类】R283;R575.54黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red.、多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。
黄精黄精 53HuangjingRHIZOMA POLYGONATI本品为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。
按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。
春、秋二季采挖，除去须根，洗净，置沸水中略烫或蒸至透心，干燥。
【性状】大黄精呈肥厚肉质的结节块状，结节长可达10cm以上，宽3～6cm，厚2～3cm。
表面淡黄色至黄棕色，具环节，有皱纹及须根痕，结节上侧茎痕呈圆盘状，圆周凹入，中部突出。
质硬而韧，不易折断，断面角质，淡黄色至黄棕色。
气微，味甜，嚼之有黏性。
鸡头黄精呈结节状弯柱形，长3～10cm，直径0.5～1.5cm。
结节长2～4cm，略呈圆锥形，常有分枝；表面黄白色或灰黄色，半透明，有纵皱纹，茎痕圆形，直径5～8mm。
姜形黄精呈长条结节块状，长短不等，常数个块状结节相连。
表面灰黄色或黄褐色，粗糙，结节上侧有突出的圆盘状茎痕，直径0.8～1.5cm。
味苦者不可药用。
【鉴别】本品横切面：大黄精表皮细胞外壁较厚。
薄壁组织间散有多数大的黏液细胞，内含草酸钙针晶束。
维管束散列，大多为周木型。
鸡头黄精、姜形黄精维管束多为外韧型。
【检查】水分照水分测定法(附录Ⅸ H第二法)测定，不得过18.0%。
总灰分取本品于80℃干燥6小时，粉碎后测定，不得过4.0%(附录Ⅸ K)。
酸不溶性灰分不得过1.0%(附录Ⅸ K)。
【浸出物】照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法(附录Ⅹ A)测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于45.0%。
【含量测定】对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水葡萄糖0.33mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6m1,分别置10ml具塞刻度试竹中。
不同产地黄精品种的成分分析作者：田迎秋李玲杨玉玲黄玉玲王春全杨清松蔡群虎来源：《农家科技下旬刊》2018年第02期摘要：目的：对不同产地黄精品种进行多糖含量和浸出物测定，为黄精品种选育和种植奠定基础；同时对不同生长年限的滇黄精以及三年生滇黄精不同采收期的多糖含量进行比较，确定其适宜的采收期。
方法：黄精浸出物按《中国药典》2015年版醇溶性测定法的热浸法测定，多糖含量采用硫酸蒽酮法测定。
结果：产自云南文山的滇黄精（黄断面类型）的浸出物和多糖含量最高，分别为54.6%和24.62%；不同生长年限的滇黄精多糖含量以十年生滇黄精多糖含量最高，为35.83%；三年生不同采收期的滇黄精以11月采收的多糖含量最高，为25.93%。
结论：不同产地黄精的多糖和浸出物含量均有较大差异，滇黄精的生长年限和采收期影响多糖含量。
关键词：滇黄精；多花黄精；鸡头黄精；浸出物；多糖；采收期黄精为百合科黄精属（Liliaceae）多年生草本植物，有黄精（Polygonatum sibiricum Red.）、滇黄精（Polygonatum kingianum Coll. et Hernsl.）和多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）等，按形状不同，习称“鸡头黄精”、“大黄精”、“姜形黄精”。
具补肾益精、滋阴润燥之功，用于滋补强身和治疗肾虚精亏、肺虚燥咳以及脾胃虚弱之症已有很长历史，是中医常用药物之一[2，3]。
现代药理学研究表明其活性成分主要为黄精多糖（polygonatum sibiricum polysaccharides， PSP），具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎抗菌、调节血糖血脂、调节免疫、改善记忆力等功能[5-11]。
并且黄精中的多糖含量普遍在10%以上，因此黄精多糖的研究对黄精的开发利用具有重要意义[12]。
但当前已报告黄精多糖的研究大多是关于提取工艺的研究[13]。
本研究主要对不同品种黄精进行多糖和浸出物含量的测定，为黄精品种选育及利用提供理论依据。
黄精炮制的历史沿革及现代研究进展摘要：黄精为临床常用中药，其炮制方法源远流长。
历代医方、本草、炮制专著对黄精的炮制均有记载，有传统炮制方法，也有各地用药习惯，致使全国各地炮制方法不够统一，累计达到20多种。
本文对我国黄精的炮制历史进行剖析，并结合当前黄精炮制现状，深入分析在现代科技支持下黄精炮制的发展情况。
关键词：黄精；炮制；历史沿革；研究进展1.黄精炮制的历史沿革在张晓宁等研究中提出，从我国黄精炮制的历史上看，宋代是中药炮制发展最为鼎盛的时期。
当时除了对唐代的炮制方式进行沿用之外，还对黄精进行了精细化的加工，采用细作阴干捣末的方式，其中加用了黄精汁加酒炮制或采取蔓荆子蒸制等方式，这种方式一经推出便得到了广泛认可，为我国黄精炮制添加了新的工艺。
在任洪民等研究中提出，在我国的元代和明代时期，出现了很多著名的医药大家，而对于黄精的炮制而言，主要是承袭了唐朝和宋朝的炮制方式，而后再加以创造。
如将黄精与黑豆进行炮制、酒蒸炮制等，但除此之外并没有涉及到其他的创新，仅仅只是沿袭前人留下的方法而已。
在李钢等研究中提出，在我国清代时期，黄精的炮制方式主要以继承为主，其中包含有水煮炮制、黑黄豆末炮制、蒸制、晒制、熟地制、蜂蜜制、姜制等，到了清代中期，黄精的炮制方式便已经达到了二十多种。
在李玉香等研究中提出，在现代医学飞速发展的背景下，对于黄精的炮制方式而言除了借鉴传统经验之外，还对相应的炮制工艺进行了整理与创新。
在张艳雪等研究中提出，黄精炮制具体的方式分析可分为以下几种：①取黄精原药，洗净后，蒸制5h左右，密封一夜，取出后切厚片，而后摇匀蒸汁，反复蒸制、晒制3次以上，直到黄精变得黑色滋润、味甘无麻等为准，而后晒干；②取原药，洗净后晒干，采用黄酒搅拌，而后放置于药罐当中，密封后隔水加热，取出后晒干切片即可；③取原药，取出杂质后洗净，切片后晒制。
④取原药，加酒后拌匀，置入容器当中，蒸制后取出干燥。
2.黄精炮制的现代研究进展根据现代研究得知，黄精属于一种复合物质，其中包含有甾体皂苷、生物碱、多糖、木脂素、强心苷、蒽醌、氨基酸等物质，在临床入药治疗中能够起到抗衰老、改善记忆力、调节免疫力、降血糖、降血脂、抗炎、抗病毒等功效。
黄精是中国传统的中药,属于药食同源性中草药,黄精的根状茎黄白色,味稍甜,肥厚而横走,直径达3cm [1].黄精的主要有效成份多糖、皂苷、黄酮类等多种物质.其中黄精多糖占据着主导地位,在黄精多糖的构成部分中,葡萄糖、甘乳糖、半乳糖醛酸占其主要成分,果糖和葡萄糖发生缩合反应后能形成低聚糖[2],其在防治心血管疾病、缓解变老的迹象、降低患肿瘤概率等领域用处广泛.而黄精皂苷,属中性,成分含量低,在黄精和滇黄精中种类偏多.国内外现已研究大约80种甾体皂苷类化合物的临床药用途径,都是分别从10余种药用黄精中提取分离得到的[3].黄精皂苷的药理学作用主要集中抗菌、降血糖血脂、改善提高记忆能力、调节免疫力[4-7]等几个方面.目前黄精有效成份主要的提取方法包括传统的水煎煮提取法[8],溶剂提取法[9]、酸提法[10]、酶解法[11]等,皂苷,这些方法均存在提取时间较长,操作较复杂的缺点.本文拟用微波和超声辅助提取黄精的有效成分多糖和皂苷,在传统基础上,缩短提取测定时间,提高提取效率.1材料与方法1.1仪器与试剂微波化学反应器,超声波发生器,水浴锅,粉碎机,电子天平,真空泵,紫外分光光度计,多花黄精(九华山地区),人参皂苷Rb1标准品(上海源叶生物科技有限公司),实验用水均为二次蒸馏水.1.2黄精预处理本文实验选用的黄精购于安徽省池州市九华山地区,为多花黄精干,取其根茎,低温干燥,再粉碎成粉末,于阴凉干燥的地方密封存放.1.3多糖提取测定准确称量黄精粉末,加入蒸馏水,在适当微波条件下进行提取,冷却后离心,移取适量上清液利用苯酚-硫酸法(SN/T 4260-2015)测量其多糖含量,并探究料液比、微波功率、反应温度、微波处理时间对提取效果的影响.1.4皂苷提取测定准确称量黄精粉末,加入80%乙醇,在一定温度下超声提取一段时间.移取一定量经超声提取后的溶液到试管中,放进60℃的水浴内.蒸发干后在试管内加入0.20mL 的0.05g 香草醛与10.00mL 冰醋酸的混合液,0.80mL 浓硫酸,摇匀.水域温度控制60℃不变,在其内加热15分钟,冷却,移取冰醋酸溶液5.00mL 放入试管内摇晃均匀.在最大吸收峰的波长处测定其吸光度.本实验标准曲线以人参皂苷Rb1为标准品在相同条件下绘制.并探究料液比、乙醇浓度、超声处理时间、提取温度对提取效果的影响.2结果与分析2.1多糖提取工艺优化通过控制变量法,分别改变料液比、微波功率、反应温度、微波处理时间,探究其对多糖提取的影响,结果如图1所示.由图1-A 可知,随着料液比增加,其多糖提取率在缓慢地发生变化.在料液比为1:50g/mL 时,其多糖提取率最高,达到1:50g/mL 之后大致不变,说明其后料液比对多糖提取的影响不是很大.分析其原因:在一定范围内,溶剂的增加使得原料与溶剂边界层浓度差增大,有利于多糖的溶出和扩散;当溶剂即水进一步增加时,三口烧瓶中的水位也上升,此时瓶内的温度不高,升高的趋势趋于缓慢.能耗效率迅速下降,溶解出的杂质逐渐变多,在某种程度上使多糖的浓度降低,则多糖提取效果不好[12].当料液比增加时,内部植物细胞与外部溶剂之间的浓度差越大,导致多糖的传质驱动力越大.提取率变低是因为材料与溶剂的比例高.当比例越高时,扩散内部组织距离越长,就会在传输过程中造成损失.图1-C 表明,在微波处理时间240s 至280s 的时候,提取效果较突出,280s 后曲线急剧下降,分析原因可归结为以下几点:首先,在少许时间内,微波对植物细胞壁及细胞膜Vol.35No.9Sep.2019赤峰学院学报（自然科学版）JournalofChifengUniversity （NaturalScienceEdition ）第35卷第9期2019年9月收稿日期:2019-06-27基金项目:2017年合肥师范学院校级科研项目(2017QN13);2018年国家大学生创新创业训练项目(201814098035)黄精有效成分提取测定的研究陈蕾,万婉,刘艳,周青松(合肥师范学院,安徽合肥230601)摘要:黄精作为药食同源性中草药,其活性成分主要包括多糖、皂苷、黄酮类等多种物质.本文分别研究了提取测定黄精多糖和皂苷的方法,并进行工艺优化.结果表明,利用微波、超声辅助法能够快速提取测定黄精多糖和皂苷的含量,提取操作简单,提取效果优于传统提取方法.关键词:黄精;有效成分;提取中图分类号：TQ460.7文献标识码：A文章编号：1673-260X （2019）09-0037-0337--图2工艺条件对黄精皂苷提取的影响图的破坏效果明显,引起植物细胞中许多物质散失,大大地增强了多糖的提取效果.而后微波对黄精处理时间过长的话,会使多糖分子的结构发生变化,促使多糖快速降解,从而导致多糖提取效果不佳.分析图1-B 和D,适当增加微波功率和温度能够提高多糖的提取率,但过高的功率或者温度提取率反而降低.可能原因是,微波功率越强,散发的能量越多,导致反应体系温度突然升高,破坏了黄精多糖结构,使部分多糖发生降解,减少多糖提取率.2.2皂苷提取工艺优化2.2.1单因素实验利用超声辅助法进行黄精皂苷的提取,通过控制变量图1工艺条件对黄精多糖提取的影响图38--法,分别改变超声时间、乙醇浓度、料液比、温度,探究其对皂苷提取的影响,结果如图2所示.由图2可知,超声提取黄精皂苷时间越长,黄精皂苷的提取量越大,40min后继续提取,提取量无明显提高,可能是继续提取会导致皂苷少量分解成其他物质,或者造成皂苷活性下降.浸取液乙醇的浓度对提取量影响最大,提取温度太高或太低都会使得黄精皂苷提取量降低.而随着料液比的增加,黄精皂苷的提取量虽然下降但波动并不明显.料液比对提取量基本没有太大作用,总体来看,料液比的改变对黄精皂苷的提取没有太大干扰.其中乙醇浓度的影响可能是75%的乙醇溶剂极性的大小与皂苷极性大小接近,皂苷在其中的溶解度最大,提取量自然最大.提取温度在40-60℃内,黄精皂苷提取量明显在不断上升,60℃后皂苷提取量反而下降.可能是因为用乙醇提取时,达到乙醇沸点78℃时对皂苷的溶解有所影响.而且当温度过高时,黄精中某些酸性物质活性可能增大,造成皂苷结构的变化,以致被提取到的皂苷含量较低[13].2.2.2正交实验结果在单因素实验基础上,设计以下正交实验,结果如表1所示.从正交实验结果可以看出,水温、浸取黄精的溶液浓度、物料与溶液的比例对黄精皂苷提取量的大小影响各不相同.根据计算可得出,R B>R A>R C,使提取量改变最为明显的是乙醇浓度大小,较之提取温度的影响稍弱,料液比最次.由此确定出黄精皂苷最优提取方案应为:在料液比1: 15时用75%浓度的乙醇溶液溶解被提取物后,在60℃的水浴中经超声波提取时长40分钟.3结论本文使用微波辅助提取法提取黄精多糖,发现在料液比为1:50g/mL,微波功率为500W,60℃下,提取4min,能够快速提取黄精中多糖,提取量达到640mg/mL,较传统方法快速,提取效果好.选用超声波辅助提取法提取黄精皂苷,通过单因素实验和正交实验,结果均表明乙醇浓度对皂苷提取的影响最大,温度的影响次之,提取温度太大或太小都会使得黄精皂苷提取量降低,而料液比对提取量基本没有太大作用.在最佳提取工艺条件下,黄精皂苷提取量达到46.96μg/g.———————————————————参考文献:〔1〕徐兵兵,倪穗.野生黄精的多糖含量测定及提取工艺研究[J].中国野生植物资源,2016,35(04):19-22.〔2〕李丽,田丽娜.黄精多糖的结构分析及功能活性研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(15):231-234.〔3〕张沐新,杨晓虹.黄精属植物甾体皂苷类化学成分研究进展[C].中国药学会.第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集,2007.352-355.〔4〕孙隆儒,李铣,郭月英.黄精改善学习记忆障碍等作用的研究[J].沈阳药科大学报,2001,18(4):286-289.〔5〕Wang Z J,Zhou Y Ju,Zhang H.Effects of two saponins extracted from the Poly gonatumz anlanscia⁃nense pamp on the human leuk emia(HL-60)cells[J].Biological&Pharmaceutical Bulletin,2001,24(2):159-162.〔6〕祝凌丽,徐维平.黄精总皂苷和多糖的药理作用及其提取方法的研究进展[J].安徽医药,2009,13(7):719-722.〔7〕王冬梅,张京芳,李晓明.卷叶黄精根中甾体皂苷化学成分及其抗菌活性[J].林业科学,2007(08):91-95.〔8〕Yu H S,Ma B P,Kang L P.Saponins from the pro⁃cessed rhizomes of molygonatum kingianum[J].Chemmharm Bull,2009,57(9):1011-1014.〔9〕陈燕文,胡晶红.金银花多糖提取、精制方法和药理活性综述[J].辽宁中医药大学学报,2017,19(01):155-159.〔10〕张燕,张树淼.近年来植物多糖提取方法研究进展[J].农产品加工,2015(11):65-68.〔11〕Yg Wang,YGao.Rapid Determination of lycium bar⁃barum polysaccharide with effective wavelength selec⁃tion using Near-Infrared diffuse reflectance spec⁃troscopy[J].Food analytical methods.2016,09(01):131-138.〔12〕徐冰冰,于勇杰.黄精多糖研究综述[J].中国野生植物资源,2015,34(04):38-41.〔13〕王冬梅,朱玮,张存莉.卷叶黄精总皂苷含量测定方法及提取工艺研究[J].西北林学院学报,2006,21(3):107-110.试验号A(提取温度/℃)B(乙醇浓度/%)C(料液比)皂苷提取量(ug/g)140651:1041.46240751:1544.96340851:2027.44460651:1543.46560751:2046.96660851:1031.44770651:2039.95870751:1044.96970851:1528.94K137.95541.62739.29K240.62645.63339.123因素主次K337.95529.27638.122B>A>CR 2.616.3 1.1表1黄精皂苷提取工艺正交实验结果39--。
