高效液相色谱法对黄精多糖分子量及组成的测定

高效液相色谱法同时测定大黄中14种成分的含量建立高效液相色谱法同时测定大黄中大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B、没食子酸、儿茶素、（-）-表儿茶素-3-没食子酸酯、异莲花掌苷、4-4′-羟基苯基-2-丁酮、莲花掌苷、4′-羟基苯基-2-丁酮-4′-O-β-D-（2″-O-桂皮酰基-6″-O-没食子酰基）-葡萄糖苷14个成分含量的方法。

采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm × 150 mm，5 μm），采用0.05%的磷酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，柱温40 ℃，检测波长268 nm。

结果表明在线性范围内14个成分线性良好（r>0.999 9）；日内精密度和日间精密度均小于3.1%；平均回收率在91.80%～104.1%。

同时，对收集到的10个掌叶大黄和10个唐古特大黄合格样品进行定量测定，发现掌叶大黄中含量比较高的成分是芦荟大黄素，唐古特大黄中含量比较高的是4-4′-羟基苯基-2-丁酮，各样品中所有化合物的含量差异都比较大。

所建立的含量测定方法能同时测定大黄中14个成分的含量，为大黄药材多成分含量测定和质量控制提供一种简便的方法。

标签：大黄；高效液相色谱法；蒽醌类；苯丁酮苷类；鞣质类；含量测定[Abstract] To establish an HPLC （high performance liquid chromatography）method for the simultaneous content determination of gallic acid，（+）-catechin，（-）-epicatechin-3-O-gallate，isolindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone，emodin，chrysophanol，physcion，aloe-emodin，rhein，lindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone-4′-O-β-D-（2″-O-galloyl-6″-O-cinnamoyl）-glucopyranoside，sennoside A and sennoside B in Rhei Radix et Rhizoma. The analysis was performed on Agilent Zorbax SB-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm）with 0.05% phosphoric acid solution （A）- acetonitrile （B）as mobile phase for gradient elution. The flow rate was 1 mL·min-1，with column temperature of 40 ℃and the wavelength was set at 268 nm. All calibration curves showed good linearity （r > 0.999 9）within the concentration range. Both the intra- and inter-day precision for 14 analytes was less than 3.1%，with the mean recovery at the range of 91.80%-104.1%. Meanwhile，quantitative determination was carried out for 10 qualified samples from Rheum palmatum and 10 qualified samples from R. tanguticum. respectively. It was found that the content of 4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone and aloe-emodin were higher in the R. tanguticum and R. palmatum，respectively，and the content of all the compounds was different in each sample. The established HPLC method for simultaneous content determination of 14 compounds from Rhei Radix et Rhizoma could be used for quantitative assessment and quality control of Rhei Radix et Rhizoma.[Key words] Rhei Radix et Rhizoma；HPLC；anthraquinones；butanone glycosides；tannins；content determination大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄R. tanguticum Maxim. ex Balf. 或药用大黄R. officinale Baill.的干燥根和根茎[1]。

黄精的高效液相色谱指纹图谱硒北难业2O11,20(2):1141l9 AetaAgriculturaeBoreali—occidentalisSinica黄精的高效液相色谱指纹图谱赵欣,刘晓蕾,兰晓继1,2,刘峰.,梁宗锁(1.西北农林科技大学生命学院,陕西杨凌712100;2.陕西省中药指纹图谱与天然产物研究中心,陕西杨凌7l2100;3.陕西步长制药集团公司,陕西两安7,10029))摘要:建立陕西杨凌黄精的高效液相色谱(HPIC)指纹图谱,比较8个不同产地黄精高效液相色谱(HPLC)指纹图谱.色谱条件为WatersXBCI8色谱柱(250lllrnx4.6mm,5m),检测波长为200niil,流动相为乙腈一水溶液梯度洗脱,流速1mI/min,分析时间70min,柱温3OlC.结果显示,在选定的色谱条件下,通过共有模式生成法和平均矢量计算以及相似度分析确定的16个色谱峰,构成陕西杨凌黄精的指纹图谱特征峰.表明用高效液相色谱一紫外检测器联用建立的黄精指纹图谱稳定性,重复性较好,能为陕西杨凌,汉中及其他各产地的黄精质量标准提供参考.关键词:黄精;高效液相色谱;指纹图谱中图分类号:R282.72文献标志码:A文章编号:1004一l389(2011)020l】4O6 StudyontheFingerprintsChromatogramofPolygonatumsibiricunRed.byHPLCZHAOXin,LIUXiaolei,LANXiaoji'.,LIUFeng.andIIANGZongsuo'(1.Collegeof1.ireScience,NorthwestA&FUniversity,YanglingShaanxi712100,Chi na;2.Shaan~ResearchCenterinTCMFingerprint&NPLibrary,YanglingShaanxi712100,China;3.BuchangPharmaceuticalGroupofShaanxiProvince,Xi'an740029,China)Abstract:Toestablishthehighperformanceliquidchromatogram(HPIC)fingerprintchrom atogramofPolygonatumsibiricunRed.inYanglingofShaanxiprovince.Thefingerprintchromatogr amofPolygonatumsibiricunRed.ofgrowingtheeightdifferentareaavecompared.TheHPICcond itionisthat:WatersXB—C18(250mm× 4.6mm,5"m),themixtureofAcetonitrile—solutionphosphoricacid,thedetectionwavelengthwas200nm,theflowratewas1mI/rainandthecolumntemperature was3ooC.ResultUndertheabovechromatographic,16chromatographicpeakswereinvolvedin thechar—acteristicabsorptionbandofPolygonatumsibiricunRed.fingerprimtbyaaveragevectorand asimi—larityanalysis.ConclusionthatthefingeprintchromatogramofPolygonatumsibiricunRed.s etupbyHPIC—DADisstableandrepeatable.andcanprovidearelevantinformationtoqualitycontrolofPo—lygonatumsibiricunRed.Keywords:PolygonatumsibiricunRed;HPIC;Fingerprintchromatogram黄精(PolygonatumsibiricumDelar.exRe—donte)是百合科黄精属(Polygonaturn)多种植物的根茎,《中国药典))2OO5版收载了黄精Polygo—naturesibiricunRed,囊丝黄精(多花黄精)Pcyr一[onglTlaHua或滇黄精PkingianumCoilet收稿日期:基金项目:第一作者:通讯作者:Hemsl的干燥根茎入药.黄精始载于晋代《名医别录》,具补肾益精,滋阴润燥之功,用于滋补强身和治疗肾虚精亏,肺虚燥咳以及脾胃虚弱之证,是中医常用药物之一.现代药理学研究证明,黄精具有增强免疫,降低血脂,血糖,延缓衰老等多2O1O一0824修回日期:201012-20国家科技部十一五支持计划(2008BAD98B08;2007BAD79B06). 赵欣,女,硕士,专业方向为药用植物.Email:ZX2680271@126.COlIl 梁宗锁.Email:liangzs@2期赵欣等:黄精的高效液相色谱指纹图谱种药理作用].《中国药典》规定的黄精3种原生药,在中国分布较广,蕴藏量也较大.黄精分布于东北,华北,西北,华东以及河南,湖北,四川,贵州;多花黄精分布于华东,中南,四川,贵州等地;滇黄精主产云南,四川,贵州,广西等省区也有分布].黄精由于生长的地理环境不同,药材质量参差不齐,所以提供可靠的质量评价方法对黄精的栽培和临床应用非常重要.基于目前《中国药典}2010年版中黄精药材的质量评价主要是测葡萄糖的含量,成分单一,有一定的不准确性,有关黄精药材质量标准方面的研究也比较少,陈立娜,高艳坤用高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元的含量来研究黄精质量标准.指纹图谱方面也只查阅到杨先国用高效液相色谱法测定了与黄精药材易混的玉竹药材的指纹图谱,而有关《中国药典》收录的3种黄精原生药中黄精(Polygonatu~lsibiricunRed)指纹图谱的研究至今还没有文献报道,本研究采用高效液相色谱法,建立陕西杨凌黄精指纹图谱,图谱化学信息比较丰富,获得l6个峰,可为黄精药材的规范化种植以及不同产地黄精药材质量控制提供参考.1材料与方法1.1试材标准品薯蓣皂苷元(111539),黄精对照药材(121341)购自中国生物制品检定所.供试的8批黄精药材分别于2009年8月2O10年5月采于西北农林科技大学生命学院药用植物园.不同产地黄精样品来源见表1,经西北农林科技大学生命学院植物教研室张跃进副教授鉴定,均为百合科黄精属(Polygonatum)植物黄精Polygonatum sibiricunRed的根茎.表1黄精样品来源TablelOriginofPolygonatumsibiricunRed.Samples 1.2仪器Waters1525二元高效液相色谱仪,Waters2996二极管列阵检测器,WatersUV2487紫外检测器,WatersXB—C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5肚m),Empo'wer2色谱分析软件(美国wa—ters公司),优普超纯水机(上海优普科技公司),旋转蒸发器RE一52AA(上海亚荣生化仪器厂), KQ一250B型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司),调温型电热套MH一2000(北京科伟永兴仪器有限公司).1.3试剂色谱级乙腈购自FisherScientific(Fair—lawn,NJ,USA),无水乙醇,正丁醇,冰醋酸购自西安三浦精细化工厂.1.4色谱条件1.4.1指纹图谱色谱条件Watersl525二元高效液相色谱仪,WatersXBC18色谱柱(250 mm×4.6mm,5m),WatersUV一2487紫外检测器,以乙腈(A,下文用体积分数)和水(B)为流动相,采用二元梯度洗脱,梯度程序为0～10 min,5～10A;10～30rain,10～35A;3O～40min,35～60A;40～60min,60～100A.流速1mI/min,柱温30.C,检测波长200nm,进样量20"I.1.4.2含量测定色谱条件Waters1525二元高效液相色谱仪,WatersXB—C18色谱柱(250 mrn×4.6mm,5肚m),WatersUV一2487紫外检测器,以乙腈(A)和水(B)为流动相,采用94:6等度洗脱],流速1mL/min,柱温30.C,检测波长200nm,进样量2OI.1.5对照品溶液的制备精确称取薯蓣皂苷元适量,加甲醇溶解配制成(113.9mg/L)的对照品溶液,0.22肛m滤膜滤过,备用.1.6供试品溶液的制备1..6.1指纹图谱供试品溶液制备将黄精药材放入烘箱50_c烘干至恒量,粉碎,过40目筛,精确称取此样品2g,加一70的乙醇40mL,超声30min提取,放冷,抽滤,取滤液,滤渣加(D一7O的乙醇40mI,超声30rain提取第2次,放冷,抽滤,合并2次提取液,旋干,浸膏加10mI甲醇定容,然后加10g/I的壳聚糖冰醋酸溶液100L过夜,0.22/xm滤膜滤过,取滤液作为供试品溶液.西北农业1.6.2含量测定供试品制备将黄精药材放入烘箱50℃烘干至恒量,粉碎,过40目筛,精确称取此样品2g,加(D一70的乙醇4OmI,加热回流3h,放冷,抽滤,取滤液,旋干,加水20mI,加正丁醇(2OmL,2OmI)萃取2次,取正丁醇层旋干,浸膏加10mL甲醇定容,然后加10g/I的壳聚糖冰醋酸溶液100L过夜,0.22ffm滤膜滤过,取滤液作为供试品溶液.1.7方法学考察1.7.1精密度试验取同一产地(陕西杨凌)供试品溶液,按照"1.6.1"方法处理,按"1.4.1"色谱条件,平行测定5次,计算其中16个分离度好的主组分峰相对于内参照峰(14)的相对保留时间和相对峰面积值.结果显示,各共有峰相对保留时间的RSD为0.037～0.163,相对峰面积的RSD为0.105～1.987,表明仪器精密度良好(表2).1.7.2重复性试验取同一产地样品(陕西杨凌)5份,按照"1.6.1"方法处理,按"1.4.1"色谱条件进行测定,计算其中l6个共有峰相对于内参照峰(14)的相对保留时间和相对峰面积值.结果显示,各共有峰的相对保留时间的RSD为0.028～0.296,相对峰面积的RSD为0.288～1.537,表明该提取方法重复性较好I8(表2).1.7.3稳定性试验取同一样品(陕西杨凌)黄精药材,按"1.6.1"方法处理,按"1.4.1"色谱条件,分别于0,2,4,8,12,24h依次进样进行测定,计算其中16个共有峰相对于内参照峰(14)的相对保留时间和相对峰面积值.结果显示,各共有峰的相对保留时间的RSD为0.039～0.306,相对峰面积的RSD为0.102～1.785,说明样品至少在24h内稳定(表2).1.7.4加样回收率试验取已烘干至恒量的黄精粉末(2g)5份,精确称量,各精确加入薯蓣皂苷元对照品1mL,按"1.6.2"制备,"1.4.2"条件测定计算,平均回收率为101.53,RSD为2.5.lI7.5线性试验因为薯蓣皂苷元在指纹图谱中出峰较晚,线性不佳,所以将配好的薯蓣皂苷元标品溶液按照"1.4.2"含量测定的色谱条件分别上样(2,4,6,8,10,12,14,16,18,20ffL).结果显示,薯蓣皂苷元在0.2278～1.8224I内线性良好,回归方程:y:32087X-t-3463.8(R一0.9994)表2方法学数据计算结果Table2Thedataresultsofmethodology2期赵欣等:黄精的高效液相色谱指纹图谱2结果与分析2.1指纹图谱的建立与分析按照"1.6.1"方法处理8批采自陕西杨凌的黄精样品,按照"1.4.1"色谱条件测定分析,比较其色谱图,确定16个共有峰.以14号峰为参照峰,计算其他各峰相对保留时间.结果表明,16个共有峰相对保留时间的RSD均在2以下,且不同样品间共有峰光谱图较一致,表明16个共有指纹峰确认结果较可靠,可用于建立黄精药材主要成分对照指纹图谱(图1).因为这8批黄精样品里无异常样本,故选择共有模式生成法],采用平均矢量算法,生成对照指纹图谱各共有峰相对保留时间为0.416,0.443,0.465,0.500,0.584,0.678,0.705,0.838,0.869,0.873,0.953,0.961,0.966,1.000,1.076,1.083,标品确认15号峰为薯蓣皂苷元.对测定的8批黄精药材指纹图谱共有峰进行相似性计算l_】,夹角余弦值和相关系数计算结果显示,各批次间的相似性均在0.99以上,表明这8批次黄精药材间相似性良好¨l.2.2黄精指纹图谱的比较由图2可见,陕西杨凌黄精药材确定的16个共有峰在这8个产地的黄精药材中均能检测到, 证明这8个产地的黄精药材中含有的主要活性成分种类相似,14号,16号2个指纹峰在每个产地的黄精光谱图中峰面积都很大,说明14,16号2种成分在黄精中所占比例比较大,在黄精药材中地位较为主要.l,5,6,7,13,15号峰各产地差异较明显.对薯蓣皂苷元含量分析结果(图3)表明,河北产黄精中未水解的薯蓣皂苷元含量最高, 陕西汉中,陕西杨凌,湖南产黄精紧随其后,且这4个产地测得的未水解的薯蓣皂苷元较其他文献_5含量要高,河南产黄精中薯蓣皂苷元含量最少.分析总峰面积,结果表明,河北产黄精总峰面积最大,陕西汉中,湖南,陕西杨凌产黄精紧随其后,河南产黄精总峰面积最小.相似性是评价有效成分间相对含量一致性的重要指标,以16个共有指纹峰的峰面积为基本参数,以相关系数和夹角余弦系数为相似性测度指标,对8个产地黄精的相似性进行评价,只有四川和河南产黄精间相似度2种方法的结果均在0.9以下,而四川和贵州,贵州和湖南产黄精的相似系数结果在0.9以下,夹角余弦值在0.9以上,其他各地黄精间相似性均在0.9以上,说明其他5个产地黄精问各主要成分相对含量比较相似.时间/minTime图1杨凌黄精药材指纹图谱Fig.1FingerprintofPolygonatumsibiricunRed.crudedrugsinYangling口一对.I0日o_Iu0雹《\恒鹫西北农业15.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.0060.0065.0070.00时间/rainTime谱图中从上到下原产地依次为云南,湖南,四川,贵州,陕西汉中,河南,陕西杨凌,河北.FromtoptobottomorderoftheGrowingareainfingerprintare:Yunnan,Hunan,Hebei,Guizh ou,Sichuan,Henan,YanglingofShaanxi,HanzhongofShaanxi.图2不同原产地黄精的指纹图谱Fig.2FingerprintofdifferentspeciesPolygonatumsibiricunRed.crudedrugs莛蔷萎蔓坤g'茜蓦器黧～茎蛊sG一YauglingHunanYunanHanzhOng1cnuan'HeDe1uulznoul-Ienan产地Growingarea图3不同产地黄精的薯蓣皂苷元含量Fig.3TheDiosgenincontentofPolygonatumsibiricunRed.indifferentgrowingareaarecom pared3讨论3.1通过比较试验,摸索出黄精供试品制备方法和黄精指纹图谱色谱条件,建立陕西杨凌黄精的高效液相色谱(HPIc)指纹图谱,方法学结果显示,该方法建立的黄精高效液相色谱(HPIC)指纹图谱较为可靠.利用摸索出的制备方法与色谱条件,分析了8个产地黄精主要活性成分,结果显示,不同地区黄精中均检测到了16个共有指纹峰,各成分问相对峰面积比值较为相似,仅以指纹图谱很难对黄精质量作出正确的评价,应该同时结合多糖,多指标成分定量分析,对各地黄精综合评价.黄精药材在《中国药典》中收录了3种原生药,其中黄精在陕西,河北,等地分布较为广泛,本研究结果表明,以薯蓣皂苷元单一指标成分评价,河北黄精品质最优,其次是陕西汉中,陕西杨凌和湖南产黄精,河南产黄精品质较差.以峰总面积评价,8个产地中河北产黄精品质最优,陕西汉中,湖南,陕西杨凌紧随其后,河南品质较差.综合评价陕西汉中,陕西杨凌的黄精质量较优,该结果提示,陕西较为适宜黄精的生长,应该加强汉中略阳黄精基地的发展.本研究发现,14,16号峰在每个产地黄精指纹图谱中所占峰面积都很大,提示今后关于l4,16号峰的结构研究和物质确定对进一步研究完善黄精质量标准有重要的意义.3.2在其他有关黄精的文献'".报道中,多数加:2∞如柏"如加:2:兮0:宝OOOOOOOOOOOOOOO口矗日∞0目0kuo雹f1\恒磐柏如加:兮2期赵欣等:黄精的高效液相色谱指纹图谱是用加热回流方法提取黄精的有效成分,但考虑到加热回流时间长,温度高,会破坏有些成分的结构,而超声提取法快,方便,且超声波破碎过程是一个物理过程,浸提过程中无化学反应,可避免因结构改变产生错误的结论.故本试验选用超声提取方法作为黄精药材指纹图谱供试品溶液的提取方法.取同一产地黄精药材2g多份,以相同色谱条件下的色谱峰数目为考察指标,提取溶液((D一50乙醇,(D一60乙醇,(D一70乙醇,—8O乙醇,(D一9O乙醇,无水乙醇),超声提取时间(15,30,45,60,75,90rain),提取次数(1,2,3),提取溶液与样品量比(10倍,15倍,20倍,25倍),试验结果表明,黄精药材用2O倍其质量的(D一70% 乙醇60C超声提取30min,同条件提取2次,效果较好.].3.3用Waters1525二元高效液相色谱仪,wa—ters2996二极管列阵检测器联用考察不同波长下(19O～400nm)黄精供试品溶液的色谱谱图,结果显示,在200nm处检测到的峰数目较其他多,峰的分离度也较好,所以确定200nm为本研究的检测波长,条件确定后检测器改为WatersUV一2487紫外检测器.3.4用甲醇水和乙腈水两种体系不同比例进行等度洗脱,所得色谱峰堆积,分离度差,并且色谱峰数目较少,采用以上溶剂体系进行梯度洗脱时谱图比上述等度洗脱体系有较大改善.结果显示,甲醇一水梯度洗脱仍然难以将峰分离很好,而以乙腈一水溶液作为流动相梯度洗脱峰形较好,分离度好,色谱峰信息较多,所以选用乙腈水溶液系统作为本研究的流动相,同时还考察了不同柱温对分离的影响,结果显示在30℃下分离最好.参考文献:[1]国家药典委员会.中国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:215.[2]国家药典委员会.中国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2Ol0.[3]胡敏,王琴,周晓东,等.黄精药理作用研究进展及其l临床应用[J].广东药学,2005,15(5):68—71.E4]陈兴荣,王成军,李龙星,等.滇黄精的化学成分及药理研究进展EJ].时珍国医国药,2002,13(9):560561.E53陈立娜,高艳坤,都述虎.黄精质量标准的研究[J].中药材, 2006,29(16):l367一l369.[6]杨先国.湖南地道药材玉竹的高效液相指纹图谱[D].长沙: 湖南中医学院,2004.[7]蒋美洪,高中洪,杨向良.RPHPIC法测定金刚藤中薯蓣皂苷元的含量[J].中国药学杂志,2005,40(4):29923011.E8]中国药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)[s],2000.[9]DongfengYang,ZongSUOLiang.Qulityassessmentofcar—diotonicpillsbyHPICfingerprintingEJ].Chromatograph—ia,2007,66,509514.[1o]梁宗锁,杨东风.中药指纹图谱相似性评价研究进展[J]. 现代中药研究与实践2006,2O(5):5559.[11]徐德平,孙婧,齐斌,等.黄精中三萜皂苷的提取分离与结构鉴定EJ].中草药,2006,37(10):14701472.[12]祝凌丽,徐维平.黄精总皂苷和多糖的药理作用及其提取方法的研究进展[J].安徽医药,2009(7):719722.[13]魏永春,张卫,李冲.皂苷提取工艺及纯化研究进展[J].广东化工,2008,35(11):5861.[14]宋晓凯.天然药物化学EM].北京:化学[业出版社,2004.。

黄精化学成分及提取检测方法探究发表时间：2016-03-04T14:28:16.090Z 来源：《中国药房》2015年12月第26卷第S2期供稿作者：杨菊妹[导读] 浙江磐安人民医院黄精是我国的传统中药，其药用历史已有2 000多年，在古代常被视为“长生不老和延年益寿”药用植物。

（浙江磐安人民医院，322300）中图分类号 R283.1 文献标志码 A 文章编号 1008-0408（2015）2-0054-03摘要黄精化学成分，主要包括多糖、甾体皂苷、三萜、生物碱、木脂素、黄酮、植物甾醇及挥发油等，目前对多糖和皂苷的提取检测方法研究比较多。

试图选择一种提取纯化黄精多糖效果好、成本低、简便、快速的方法关键词黄精；化学成分；提取检测方法黄精(Polygonatum sibiricum)为百合科(Liliaceae)黄精属多种植物的干燥块茎。

黄精是我国的传统中药，其药用历史已有2 000多年，在古代常被视为“长生不老和延年益寿”药用植物。

全世界有40余种，我国有31种，分布于全国各地。

自20 世纪80 年代开始，国内外学者对黄精的化学成分进行了广泛研究，发现了多种化学成分，主要包括多糖、甾体皂苷、三萜、生物碱、木脂素、黄酮、植物甾醇及挥发油等，其中多糖和甾体皂苷类成分在黄精中含量较大，为其主要药效成分。

浙江省主要以多花黄精为主。

为此，对浙江产的多花黄精化学成分及其检测方法进行研究，以期为黄精的开发利用和临床应用提供依据。

1 化学成分1.1 黄精多糖糖类是黄精含量最多的成分，经鉴定其组分主要是黄精多糖和黄精低聚糖(按结构差异分为甲、乙、丙3种)黄精多糖甲、乙、丙由葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸(6：26：1)组成，其糖链以2—6线性连接为主链，分子量均大于20万；黄精低聚糖分别由不同数目的果糖与葡萄糖聚合而成。

低聚糖甲分子量为1630，果糖和葡萄糖摩尔比为8：1；低聚糖乙分子量为862，果糖和葡萄糖摩尔比为4：1；低聚糖丙分子量为474，果糖和葡萄糖摩尔比为2；1 [1] 。

黄精多糖提取工艺的研究
黄精多糖是一种具有广泛应用前景的天然高分子物质，具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。

因此，黄精多糖的提取工艺研究具有重要的意义。

黄精多糖的提取工艺主要包括以下几个步骤：原料处理、提取、分离、纯化和检测。

其中，原料处理是关键的一步，它直接影响到后续步骤的效果。

一般来说，黄精的根茎部分是黄精多糖的主要来源，因此需要对其进行清洗、切碎、烘干等处理，以便于后续的提取。

提取是黄精多糖提取工艺的核心步骤，目前常用的提取方法有水提法、酸提法、碱提法、酶解法等。

其中，水提法是最常用的方法，其优点是操作简单、成本低廉，但提取效率较低。

酸提法和碱提法可以提高提取效率，但需要注意控制酸碱度，以免对多糖的结构产生影响。

酶解法是一种新兴的提取方法，可以提高提取效率，但需要选择合适的酶种和酶解条件。

分离和纯化是为了去除杂质和提高多糖的纯度，常用的方法有沉淀法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法等。

其中，离子交换层析法是最常用的方法，可以根据多糖的电荷性质进行分离和纯化。

检测是为了确定提取的多糖的含量和质量，常用的方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法、核磁共振法等。

其中，紫外分光光度法是最常用的方法，可以通过测定多糖的吸收峰来确定其含量和质量。

黄精多糖的提取工艺研究是一个复杂的过程，需要综合考虑多种因素，如原料处理、提取方法、分离和纯化方法、检测方法等。

只有通过不断的实验和改进，才能得到高效、低成本、高纯度的黄精多糖提取工艺，为其广泛应用提供有力的支持。

黄精九蒸九晒炮制过程中药效化学成分动态变化郭涛１ꎬ王荣靖１ꎬ宋艺君２ꎬ叶建２ꎬ焦慧２ꎬ于代杰２ꎬ常晖３(１.空军第九八六医院ꎬ陕西西安７１００５４ꎻ２.陕西中医药大学药学院ꎬ陕西咸阳７１２０４６ꎻ３.陕西步长制药有限公司ꎬ陕西西安７１００７５)摘要:目的㊀对黄精九蒸九晒炮制过程中药效化学成分的含量变化进行分析ꎬ为黄精古法炮制提供理论依据ꎮ方法㊀分别采用清蒸法和酒蒸法进行九蒸九晒炮制ꎬ参照«中国药典»２０２０年版方法测定炮制品中多糖和浸出物的含量ꎬ参照文献方法测定炮制品中总皂苷和５－羟甲基糠醛(５－ＨＭＦ)的含量ꎮ结果㊀多糖含量分别从第一次炮制的１０.７６％㊁１０.０６％下降至第九次炮制的８.２０％㊁８.００％ꎬ但某些炮制中间品的含量上升ꎻ５－羟甲基糠醛含量分别从第一次炮制的０.０８％㊁０.０６％上升至第九次炮制的０.４９％㊁０.４８％ꎬ但某些炮制中间品的含量下降ꎻ总皂苷含量分别从第一次炮制的２４.８６％㊁２５.２６％下降至第九次炮制的１５.６７％㊁１５.４４％ꎻ浸出物含量分别从第一次炮制的５２.３７％㊁５３.７５％下降至第九次炮制的５０.７４％㊁５１.６１％ꎬ但某些炮制中间品的含量上升ꎮ结论㊀黄精九蒸九晒炮制过程中多糖㊁５－羟甲基糠醛含量呈现先上升后下降ꎬ多糖整体呈下降的趋势ꎬ５－羟甲基糠醛整体呈上升的趋势ꎻ总皂苷的含量呈缓慢下降ꎻ浸出物含量无明显变化ꎮ关键词:黄精ꎻ多糖ꎻ５－羟甲基糠醛ꎻ总皂苷中图分类号:Ｒ２８３㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２２)０４－０２２０－００６ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２２.０４.００３ＣｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｄｙｎａｍｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｒｏｏｔｏｆＰｏｌｙｇｏｎａｔｉＲｈｉｚｏｍａｄｕｒｉｎｇａｎｉｎｅ－ｔｉｍｅｒｅｐｅａｔｏｆｔｈｅｓｔｅａｍｉｎｇａｎｄｓｕｎ－ｄｒｙｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓＧＵＯＴａｏ１ꎬＷＡＮＧＲｏｎｇｊｉｎｇ１ꎬＳＯＮＧＹｉｊｕｎ２ꎬＹＥＪｉａｎ２ꎬＪＩＡＯＨｕｉ２ꎬＹＵＤａｉｊｉｅ２ꎬＣＨＡＮＧＨｕｉ３(１.Ｘｉｊｉｎｇ９８６ＨｏｓｐｉｔａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔꎬＦｏｕｒｔｈＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＸｉᶄａｎ７１００５４ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＳｈａａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＸｉａｎｙａｎｇ７１２０４６ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＳｈａａｎｘｉＢｕｃｈａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＬｉｍｉｔｅｄＣｏｍｐａｎｙꎬＸｉᶄａｎ７１００７５ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｔｈｅｎｉｎｅ－ｔｉｍｅｒｅｐｅａｔｏｆｔｈｅｓｔｅａｍｉｎｇａｎｄｓｕｎ－ｄｒｙｉｎｇｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆＰｏｌｙｇｏｎａｔｉＲｈｉｚｏｍａꎬａｎｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅａｎｃｉｅｎｔｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｗａｙｏｆＰｏｌｙｇ￣ｏｎａｔｉＲｈｉｚｏｍａ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｓｔｅａｍｉｎｇａｎｄｗｉｎｅｓｔｅａｍｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓａｒｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｎｉｎｅ－ｔｉｍｅｒｅｐｅａｔｏｆｔｈｅｓｔｅａｍｉｎｇａｎｄｓｕｎ－ｄｒｙｉｎｇｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐｒｏｃｅｓｓꎬｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｅｘｔｒａｃｔｓｉｎｐｒｏｃｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅ２０２０ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａꎬｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓａｎｄ５－ＨＭＦｉｎｐｒｏｃｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓａｃ￣ｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ１０.７６％ａｎｄ１０.０６％ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｐｒｏｃｅｓｓｔｏ８.２０％ａｎｄ８.００％ｉｎｔｈｅｎｉｎｔｈｐｒｏｃｅｓｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｂｕｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｏｍｅｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓｒｉｓｅｎꎻＴｈｅ５－ＨＭＦｃｏｎｔｅｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ０.０８％ａｎｄ０.０６％ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｐｒｏｃｅｓｓｔｏ０.４９％ａｎｄ０.４８％ｉｎｔｈｅｎｉｎｔｈｐｒｏｃｅｓｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｂｕｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｏｍｅｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓｄｅｃｒｅａｓｅｄꎻＴｈｅｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｃｏｎｔｅｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ２４.８６％ａｎｄ２５.２６％ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｐｒｏｃｅｓｓｔｏ１５.６７％ａｎｄ１５.４４％ｉｎｔｈｅｎｉｎｔｈｐｒｏｃｅｓｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎻＴｈｅｅｘｔｒａｃｔｃｏｎｔｅｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ５２.３７％ａｎｄ５３.７５％ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｐｒｏｃｅｓｓｔｏ５０.７４％ａｎｄ５１.６１％ｉｎｔｈｅｎｉｎｔｈｐｒｏｃｅｓｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｂｕｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｏｍｅｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓｒｉｓｅｎ.Ｃｏｎｃｌｕ￣ｓｉｏｎ㊀Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅａｎｄ５－ＨＭＦｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｎｉｎｅ－ｔｉｍｅｒｅｐｅａｔｏｆｔｈｅｓｔｅａｍｉｎｇａｎｄｓｕｎ－ｄｒｙｉｎｇｔｒａｄｉ￣ｔｉｏｎａｌｐｒｏｃｅｓｓｏｆＰｏｌｙｇｏｎａｔｉＲｈｉｚｏｍａｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｉｒｓｔａｎｄｔｈｅｎｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｔｒｅｎｄｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓｄｅｃｌｉｎｉｎｇꎬｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｔｒｅｎｄｏｆ５－ＨＭＦｗａｓｒｉｓｉｎｇꎻＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｓｈｏｗｅｄａｇｒａｄｕａｌｄｅｃｌｉｎｅꎻＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｈａｎｇｅｉｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｃｏｎｔｅｎｔ.㊀基金项目:陕西省科技厅青年项目(Ｎｏ.２０２１ＪＱ－７３６)ꎻ国家自然科学基金项目(Ｎｏ.８２１０４３９５)ꎻ陕西省科技厅项目(Ｎｏ.２０２１ＳＦ－３８９)㊀作者简介:郭涛ꎬ男ꎬ主管药师ꎬ研究方向:中药炮制研究ꎬＥ－ｍａｉｌ:１６５３９６３６０７＠ｑｑ.ｃｏｍＫｅｙｗｏｒｄｓ:ＰｏｌｙｇｏｎａｔｉＲｈｉｚｏｍａꎻＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅꎻ５－ＨＭＦꎻＴｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓ㊀㊀黄精为百合科植物黄精(ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｓｉｂｉｒｉｃｕｍＲｅｄ.)㊁多花黄精(ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｃｙｒｔｏｎｅｍａＨｕａ)㊁滇黄精(ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｋｉｎｇｉａｎｕｍＣｏｌｌ.ｅｔＨｅｍｓｌ.)的干燥根茎[１]ꎬ始载于«名医别录»ꎬ被列为上品ꎮ生黄精味甘性平ꎬ具有补气养阴㊁健脾㊁润肺㊁益肾的功效ꎮ生黄精具麻味ꎬ刺人咽喉ꎮ蒸后补脾㊁润肺㊁益肾的功能增强ꎬ并可除去麻味ꎬ以免刺激咽喉ꎮ用于脾胃虚弱ꎬ肺虚燥咳ꎬ肾虚精亏ꎮ如治肾虚精亏㊁头晕足软的枸杞丸[１]ꎮ酒黄精能助其药势ꎬ使其滋而不腻ꎬ更好地发挥补益作用ꎮ如用于治疗气血两亏的九转黄精丹及用于肾虚阳痿ꎬ梦遗滑精的海马保肾丸[１]ꎮ黄精主要含多糖㊁皂苷㊁生物碱㊁木脂素㊁黄酮㊁植物甾醇以及挥发油等成分[２－３]ꎬ具有抗氧化抗衰老㊁抑制老年痴呆和改善学习记忆㊁降血糖㊁抗动脉粥样硬化㊁抗菌抗病毒㊁抗肿瘤㊁免疫调节等药理作用[４－５]ꎮ近年来ꎬ黄精生品对咽喉的刺激性受到人们的重视ꎬ研究发现[６－８]ꎬ黄精炮制品与生品在化学特征㊁药效㊁刺激性方面均存在较大差异ꎮ九蒸九晒又称九蒸九曝[９－１０]ꎬ是古代常用的一种传统炮制方法ꎮ该法起源于南朝«雷公炮炙论»中的 单蒸法 ꎬ到唐«千金翼方»的 双蒸法 ꎬ在不同特性药物应用之后ꎬ 九蒸九晒 炮制法逐步形成ꎮ黄精是 四大九蒸货 之一ꎮ唐代ꎬ«食疗本草»首次提出九蒸九晒炮制黄精ꎬ记载: 取瓮子去底ꎬ釜上安置令得ꎬ所盛黄精令满ꎻ密盖ꎬ蒸之ꎮ令气溜ꎬ即曝之ꎮ第二遍蒸之亦如此ꎬ九蒸九曝 ꎮ宋代ꎬ«日华子诸家本草»云: 黄精单服ꎬ九蒸九曝ꎬ食之驻颜断谷 ꎮ明代ꎬ«本草原始»云: 黄精去须ꎬ九蒸九晒用ꎬ每蒸一次ꎬ必半日方透 ꎮ清代ꎬ«青阳县志»云: 以天然黄精为原料ꎬ经过九蒸九晒ꎬ成品内赤外黄ꎬ味香甜 ꎮ传统认为ꎬ九蒸九晒后的黄精ꎬ一方面药性发生改变ꎬ有效成分累积ꎬ可增强其补脾润肺㊁温补肾阳的作用ꎻ另一方面可消除生黄精的刺激性ꎬ认为[１１]生黄精含有的黏液质会刺激咽喉ꎬ通过反复蒸晒ꎬ黏液质被分解ꎬ从而消除生黄精的刺激性ꎬ达到减毒的目的ꎮ随着现代饮片行业大生产的发展ꎬ黄精炮制工艺逐步简化ꎬ现在多采用一蒸一晒法ꎮ在«中国药典»２０２０年版ꎬ采用酒蒸或酒炖的炮制方法ꎬ与传统的九蒸九晒炮制方法差异很大[１２－１４]ꎮ本文基于黄精 九蒸九晒 的传统炮制方法ꎬ以黄精中多糖㊁总皂苷㊁５－羟甲基糠醛(５－ＨＭＦ)和浸出物含量为评价指标ꎬ对其炮制过程中主要化学成分的动态变化规律进行分析ꎬ意欲深入探究黄精九蒸九晒的炮制机制ꎬ以揭示黄精炮制过程内在质量变化规律和最佳炮制方法ꎬ进一步阐明黄精现代炮制方法简化的合理性ꎮ１㊀仪器与试药１.１㊀仪器㊀ＳＰ－１９２０型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器公司)ꎻＡｇｉｌｅｎｔ１２６０高效液相色谱仪(安捷伦有限公司)ꎻＭＳ１０５型十万分之一电子天平(瑞士梅特勒－托利多公司)ꎮ１.２㊀试药㊀黄精药材购自陕西汉中黄精基地ꎬ经陕中医药学院胡本祥教授鉴定为百合科植物黄精(ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｓｉｂｉｒｉｃｕｍＲｅｄ.)的干燥根茎ꎮ葡萄糖对照品(批号:１１０８３３－２０１７０７ꎬ纯度:９９.９％)㊁５－ＨＭＦ对照品(批号:１１１６２６－２０１７１１ꎬ纯度:９９.２％)㊁薯蓣皂苷对照品(批号:１１２８０９－２０１９０４ꎬ纯度:９９.９％)均购于中国食品药品检定研究院ꎻ黄酒(绍兴黄酒酿造有限公司ꎬ批号:２０１９１２０２)ꎻ甲醇采用色谱纯ꎬ水采用纯净水ꎬ其余试剂均为分析纯ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀黄精不同炮制程度样品的制备㊀清蒸－九蒸九晒制黄精[１２ꎬ１５]:取生黄精ꎬ蒸锅蒸制６ｈꎬ熄火闷润一夜(８ｈ)ꎬ次日取出置６０ħ烘箱至外皮微干ꎬ为蒸晒一次的制黄精ꎬ反复９次蒸晒ꎬ分别得到蒸晒不同次数的制黄精ꎮ切制ꎬ干燥ꎬ依次记为Ｍ１~Ｍ９ꎮ酒蒸－九蒸九晒制黄精[１２ꎬ１５]:取生黄精ꎬ加黄酒拌匀(黄酒和药材的配比为２０ʒ１００)ꎬ待黄酒吸收后ꎬ按清蒸－九蒸九晒制黄精的制法操作得到样品ꎬ依次记为ＭＣ１~ＭＣ９ꎮ第一次蒸制黄酒用量为黄酒总量的２０％ꎬ以后每次蒸制黄酒用量为黄酒总量的１０％ꎮ２.２㊀多糖定量测定[１６]２.２.１㊀对照品溶液的制备㊀取葡萄糖对照品２４ｍｇꎬ精密称定ꎬ置量瓶中ꎬ加水溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ即得０.４８ｍｇ ｍＬ－１的对照品溶液ꎮ２.２.２㊀供试品溶液的制备㊀取本品细粉０.２５ｇꎬ精密称定ꎬ放置圆底烧瓶中ꎬ将８０％乙醇１５０ｍＬ加入ꎬ置水浴中加热回流１ｈꎬ滤过ꎬ将剩余残渣用８０％热乙醇洗涤３次ꎬ每次１０ｍＬꎬ然后将残渣及滤纸置烧瓶中ꎬ加水１５０ｍＬꎬ沸水浴中加热回流１ｈꎬ趁热滤过ꎬ将残渣及烧瓶用热水洗涤４次ꎬ合并滤液与洗液ꎬ转移至２５０ｍＬ量瓶中ꎬ加水至刻度ꎬ摇匀ꎮ２.２.３㊀最大吸收波长的确定㊀取 ２.２.１ ２.２.２ 项下对照品溶液２００μＬ㊁供试品溶液２ｍＬꎬ按 ２.２.４ 项下方法显色ꎬ以相应试剂为空白ꎬ分别将上述对照品和供试品溶液在分光光度计全波长扫描ꎬ结果对照品和供试品均在５８３ｎｍ处出现最大吸收ꎮ故选择波长５８３ｎｍ进行检测ꎮ２.２.４㊀线性关系考察㊀精密量取５００㊁４００㊁３００㊁２００㊁１００㊁５０μＬ对照品溶液ꎬ分别置１０ｍＬ具塞刻度试管中ꎬ加水至２.０ｍＬꎬ摇匀ꎬ冰水浴中缓缓滴加０.２％蒽酮－硫酸溶液至刻度ꎬ摇匀ꎬ放冷后９８ħ水浴保温１０ｍｉｎꎬ取出ꎬ置０ħ冰水浴冷却１０ｍｉｎꎬ取出ꎬ以相应试剂为空白ꎬ按照可见分光光度法(通则０４０１)ꎬ在５８３ｎｍ波长处依法测定吸光度ꎮ以吸光度(Ｙ)为纵坐标ꎬ浓度(Ｘ)为横坐标绘制标准曲线ꎬ得回归方程Ｙ＝７.７４５４Ｘ＋０.００３２ꎬｒ＝０.９９９９ꎮ试验结果表明ꎬ葡萄糖在２.４~２４.０μｇ ｍＬ－１范围内与吸光度呈良好的线性关系ꎮ２.２.５㊀精密度试验㊀取同一供试品溶液(Ｍ１)ꎬ精密吸取２ｍＬꎬ按 ２.２.４ 项下条件测定吸光度ꎬ重复测定６次ꎬ结果ＲＳＤ为０.６１％ꎬ表明本方法精密度良好ꎮ２.２.６㊀稳定性试验㊀取同一供试品溶液(Ｍ１)ꎬ精密吸取２ｍＬꎬ按 ２.２.４ 项下测定方法ꎬ分别在样品制备好后０㊁１０㊁２０㊁３０㊁４０ｍｉｎ测定吸光度ꎬ得到ＲＳＤ为０.７９％ꎬ表明供试品溶液在４０ｍｉｎ内稳定ꎮ２.２.７㊀重复性试验㊀取同一样品(Ｍ２)６份ꎬ按照 ２.２.２ 项下方法制备供试品溶液ꎬ每份供试品溶液精密吸取１ｍＬꎬ按照２.２.４项下方法测定吸光度ꎬ得到ＲＳＤ为３.１１％ꎬ表明本方法重复性良好ꎮ２.２.８㊀加样回收率试验㊀取已知多糖含量的样品９份ꎬ每份０.１２５ｇꎬ按照样品多糖含量的１２０％㊁１００％㊁８０％依次加入葡萄糖对照品溶液ꎬ每个质量浓度平行３份ꎬ按 ２.２.２ 项下方法制备供试品溶液并测定吸光度ꎬ得到平均回收率为９８.４２％ꎬＲＳＤ为１.１４％ꎬ结果表明本方法回收率良好ꎮ２.２.９㊀样品测定㊀取 ２.２.２ 项下制备的Ｍ１~Ｍ９及ＭＣ１~ＭＣ９供试品溶液ꎬ依法进行测定ꎬ结果见表１ꎬ多糖含量变化趋势见图１ꎮ由表１㊁图１可以看出ꎬ经过９次蒸晒后ꎬ总体来说黄精饮片中多糖含量下降ꎬ对于清蒸－九蒸九晒黄精和酒蒸－九蒸九晒黄精减量分别达到２３.８％和２０.５％ꎻ伴随黄精蒸晒次数的增加ꎬ对于清蒸－九蒸九晒黄精和酒蒸－九蒸九晒黄精ꎬ其多糖含量呈现先上升后下降趋势ꎻ清蒸－九蒸九晒黄精多糖含量先呈逐渐增大趋势ꎬ第四次蒸晒后多糖含量达到最大值ꎬ其后五蒸含量降低ꎬ而且清蒸和酒蒸两组含量变化一致ꎬ两者在第九次蒸晒后多糖含量仍符合药典要求ꎮ表１㊀黄精中各类成分随蒸晒次数的动态变化情况(ｎ＝３)蒸晒次数浸出物(％)多糖(％)５－ＨＭＦ(％)总皂苷(％)ＭＭＣＭＭＣＭＭＣＭＭＣ１５２.３７５３.７５１０.７６１０.０６０.０８０.０６２４.８６２５.２６２５４.０１５５.５３１２.５７１１.６７０.１００.０８２２.８６２３.２５３５４.３４５５.８４１４.０５１４.８７０.２５０.２８２２.４９２２.６３４５１.７３５２.８９１６.８４１６.８７０.３８０.３６２１.６８２１.９５５５０.７８５１.９７１３.５８１３.３２０.５２０.５４１８.３６１７.７２６５２.０２５２.７４１２.３５１２.４８０.６４０.６７１７.７６１７.３３７５２.５４５２.６８８.４０８.５００.５６０.５８１６.３９１５.９３８５３.９８５４.０７８.９０８.２００.５２０.５０１５.９５１５.７１９５０.７４５１.６１８.２０８.０００.４９０.４８１５.６７１５.４４图１㊀黄精九蒸九晒过程中多糖的含量变化趋势２.３㊀总皂苷定量测定[１７]２.３.１㊀对照品溶液的制备㊀取薯蓣皂苷对照品３.７５ｍｇꎬ精密称定ꎬ置１０ｍＬ容量瓶ꎬ加甲醇溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ得０.３７５ｍｇ ｍＬ－１的对照品溶液ꎮ２.３.２㊀供试品溶液的制备㊀取黄精粉末１ｇꎬ加１５倍量８０％乙醇ꎬ超声３０ｍｉｎ(２次)ꎬ过滤ꎬ合并滤液至５０ｍＬ容量瓶ꎬ加溶剂稀释至刻度ꎬ摇匀ꎮ２.３.３㊀最大吸收波长的确定㊀取 ２.３.１ ２.３.２ 项下所得样品溶液３０μＬ㊁对照品溶液２００μＬꎬ水浴蒸干ꎬ按 ２.３.４ 项下方法显色ꎬ以相应试剂为对照ꎬ分别将上述样品和对照品溶液在分光光度计全波长扫描ꎬ结果样品和对照品均在４８５ｎｍ有最大吸收ꎮ故选择检测波长４８５ｎｍꎮ２.３.４㊀线性关系考察㊀精密吸取对照品溶液５００㊁４００㊁３００㊁２００㊁１００㊁５０μＬꎬ置具塞刻度试管中ꎬ水浴挥干ꎬ加入５％香草醛－冰醋酸溶液０.２ｍＬ㊁高氯酸０.８ｍＬꎬ摇匀ꎬ６０ħ水浴加热１５ｍｉｎꎬ然后冰浴５ｍｉｎꎬ取出ꎬ加５ｍＬ冰醋酸ꎬ以相应试剂为空白对照ꎬ于４８５ｎｍ处测定吸光度ꎮ以吸光度(Ｙ)为纵坐标ꎬ薯蓣皂苷质量浓度(Ｘ)为横坐标作标准曲线ꎬ得回归方程Ｙ＝５.６７８６Ｘ＋０.００４７ꎬｒ＝０.９９９９ꎬ试验结果表明ꎬ总皂苷在３.１３~３１.２５μｇ ｍＬ－１范围内与吸光度有良好的线性关系ꎮ２.３.５㊀精密度试验㊀取对照品溶液ꎬ按照 ２.３.４ 项下条件测定吸光度ꎬ重复测定６次ꎬ结果ＲＳＤ为０.５２％ꎬ试验结果表明仪器精密度良好ꎮ２.３.６㊀稳定性试验㊀取供试品溶液Ｍ１ꎬ精密吸取２００μＬꎬ按 ２.３.４ 项下方法ꎬ分别在样品制备好后０㊁１０㊁２０㊁３０㊁４０ｍｉｎ测定吸光度ꎬ得到ＲＳＤ为０.６８％ꎬ表明供试品溶液在４０ｍｉｎ内基本稳定ꎮ２.３.７㊀重复性试验㊀取同一样品(Ｍ２)６份(每份１ｇ)ꎬ按照２.３.２项下方法制备供试品溶液ꎬ每份精密吸取２００μＬꎬ按照 ２.３.４ 项下条件测定吸光度ꎬ得到ＲＳＤ为２.０８％ꎬ表明本方法重复性良好ꎮ２.３.８㊀加样回收率试验㊀取平行样品９份(已知总皂苷含量)ꎬ每份０.５ｇꎬ按照样品总皂苷含量的８０％㊁１００％㊁１２０％依次加入薯蓣皂苷对照品溶液ꎬ每个质量浓度平行３份ꎬ按照 ２.３.２ 项下方法制备供试品并测定吸光度ꎬ得到平均回收率为９７.９２％ꎬＲＳＤ为１.１４％ꎬ结果表明本方法回收率良好ꎮ２.３.９㊀样品定量测定㊀取 ２.３.２ 项下制备的Ｍ１~Ｍ９及ＭＣ１~ＭＣ９供试品溶液ꎬ依法进行测定ꎬ结果见表１ꎬ总皂苷含量变化趋势见图２ꎮ图２㊀黄精九蒸九晒过程中总皂苷的含量变化趋势㊀㊀从图２和表１可以看出ꎬ随着黄精蒸晒次数的增加ꎬ总皂苷含量呈缓慢下降趋势ꎬ第九次炮制品与第一次炮制品比较ꎬ清蒸－九蒸九晒黄精和酒蒸－九蒸九晒黄精减量分别达到３７.０％和３８.９％ꎻ从一蒸一晒到四蒸四晒ꎬ酒蒸黄精的总皂苷含量均高于清蒸黄精ꎬ而从五蒸五晒到九蒸九晒ꎬ清蒸黄精总皂苷含量均高于酒蒸黄精ꎮ２.４㊀５－ＨＭＦ定量测定[１８]２.４.１㊀色谱条件㊀ＨｙｐｕｒｉｔｙＣ１８色谱柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎬ柱温:３０ħꎬ流动相水－甲醇(９２ʒ８)ꎬ流速:１.０ｍＬ ｍｉｎ－１ꎬ检测波长:２８０ｎｍꎬ进样量:１０μＬꎮ５－ＨＭＦ对照品和样品的ＨＰＬＣ图谱见图３ꎮ２.４.２㊀对照品溶液的制备㊀取５－ＨＭＦ对照品ꎬ精密称定ꎬ加甲醇溶解得到１００μｇ ｍＬ－１的对照品溶Ａ.对照品ꎻＢ.样品㊀１.５－ＨＭＦ图３㊀５－ＨＭＦ色谱图液ꎮ取上述５－ＨＭＦ对照品１ｍＬꎬ用甲醇稀释定容至５ｍＬ容量瓶ꎬ得到２０μｇ ｍＬ－１的对照品溶液ꎮ２.４.３㊀供试品溶液的制备㊀取样品０.２ｇꎬ精密称定ꎬ置锥形瓶中ꎬ加入８０％甲醇２５ｍＬꎬ称重ꎬ水浴加热回流１ｈꎬ放冷ꎬ二次称重ꎬ用８０％甲醇补足减失重量ꎬ摇匀ꎬ过滤ꎬ取续滤液ꎬ即得供试品溶液ꎮ２.４.４㊀线性关系考察㊀取对照品溶液( ２.４.２ 项下)ꎬ依次取８０㊁４０㊁２０㊁１０㊁５㊁２μＬ进样ꎬ以峰面积为纵坐标(Ｙ)ꎬ进样量为横坐标(Ｘ)绘制标准曲线ꎬ得到方程Ｙ＝７ˑ１０６Ｘ－４７４９７ꎬｒ＝０.９９９８ꎬ结果表明５－ＨＭＦ在０.０４~１.６μｇ范围内与峰面积有良好线性关系ꎮ２.４.５㊀精密度试验㊀吸取对照品５－ＨＭＦ溶液１０μＬꎬ按 ２.４.１ 项下方法连续进样６次ꎬ得到５－ＨＭＦ峰面积的ＲＳＤ为０.７２％ꎬ表明本方法精密度良好ꎮ２.４.６㊀稳定性试验㊀按 ２.４.３ 项下方法制备Ｍ１供试品溶液ꎬ分别在样品制备好后０㊁４㊁８㊁１２㊁２４ｈ依法测定ꎬ结果得到５－ＨＭＦ峰面积的ＲＳＤ为０.７８％ꎬ表明供试品溶液在２４ｈ内稳定性良好ꎮ２.４.７㊀重复性试验㊀取Ｍ２样品６份(每份０.２ｇ)ꎬ按照 ２.４.３ 项下条件制备供试品溶液ꎬ依法测定峰面积ꎬ得到５－ＨＭＦ峰面积的ＲＳＤ为１.２２％ꎬ表明本方法重复性良好ꎮ２.４.８㊀加样回收率试验㊀取已知５－ＨＭＦ含量的样品９份(每份０.１ｇ)ꎬ按照５－ＨＭＦ含量的１２０％㊁１００％㊁８０％ꎬ分别加入一定量的对照品溶液ꎬ每个质量浓度平行３份ꎬ按 ２.４.３ 项下条件制备供试品溶液ꎬ测定峰面积ꎬ得到平均回收率９７.８２％ꎬＲＳＤ为１.３１％ꎬ结果表明本方法回收率良好ꎮ２.４.９㊀样品定量测定㊀取 ２.４.３ 项下制备的Ｍ１~Ｍ９及ＭＣ１~ＭＣ９供试品溶液ꎬ依法测定ꎬ结果见表１ꎬ５－ＨＭＦ含量变化趋势见图４ꎮ图４㊀黄精九蒸九晒过程中５－ＨＭＦ的含量变化趋势㊀㊀由表１㊁图４可以看出ꎬ经过九次蒸晒后ꎬ总体来说黄精饮片中５－ＨＭＦ含量上升ꎬ对于清蒸－九蒸九晒黄精和酒蒸－九蒸九晒黄精增量分别达到５倍多和８倍ꎻ伴随黄精蒸晒次数的增加ꎬ对于清蒸－九蒸九晒黄精和酒蒸－九蒸九晒黄精ꎬ其５－ＨＭＦ含量先呈逐渐增大趋势ꎬ六蒸六晒后５－ＨＭＦ含量达到最大值ꎬ最后三蒸含量降低ꎬ至第九次蒸晒后５－ＨＭＦ含量分别为０.４９％和０.４８％ꎮ２.５㊀浸出物定量测定[１６]㊀按照«中国药典»２０２０年版(四部)２２０１项下(浸出物测定的热浸法)依法测定醇溶性浸出物ꎮ测定结果见表１ꎬ浸出物含量变化趋势见图５ꎮ图５㊀黄精九蒸九晒过程中浸出物的含量变化趋势㊀㊀由表１㊁图５可以看出ꎬ伴随黄精蒸晒次数的增加ꎬ其浸出物的含量变化无明显规律ꎬ且大致保持在一定范围内ꎮ此外ꎬ黄精每蒸晒一次制得的炮制品均可达到«中国药典»２０２０年版要求ꎮ３　讨论本文较系统分析了黄精清蒸和酒蒸品从一蒸一晒到九蒸九晒成品炮制全过程ꎬ测定不同炮制程度制黄精中多糖㊁总皂苷㊁５－ＨＭＦ和浸出物的含量ꎬ从而评价黄精九蒸九晒的炮制终点ꎮ结果表明黄精在六蒸六晒后已达到传统外观质量要求ꎬ也符合现行版«中国药典»性状要求ꎬ黄精中这几类成分在六蒸六晒时达到拐点ꎬ后逐渐趋于稳定ꎮ六蒸六晒品与一蒸一晒品相比ꎬ多糖含量升高ꎬ５－ＨＭＦ含量最高ꎬ总皂苷含量降低ꎬ浸出物含量基本不变ꎮ因此从多糖㊁５－ＨＭＦ和总皂苷含量的角度上ꎬ六蒸六晒品既是黄精炮制过程中的拐点ꎬ又是九蒸九晒的终点ꎬ但其药理作用和临床功效是否与九蒸九晒黄精㊁生品黄精存在差异ꎬ有待进一步深入研究ꎮ黄精九蒸九晒品的炮制要反复蒸制ꎬ以 亮如油ꎬ色如漆ꎬ甘如饴 为传统经验指标[１０]ꎮ九蒸九晒炮制方法虽然会导致多糖含量降低ꎬ但却是黄精的传统经典炮制方法ꎬ而«中国药典»２０２０年版仅规定以多糖作为其含量限度指标ꎬ其方法专属性差ꎬ难以反映黄精的真实质量[１９]ꎮ因此ꎬ在黄精九蒸九晒炮制过程中ꎬ如何控制蒸制时间㊁次数等ꎬ是优先把握蒸制时间的长短还是优先把握蒸制次数ꎬ并结合黄精炮制过程中其他成分的变化ꎬ来制定其质量控制标准ꎬ需要进行进一步深入研究ꎮ参考文献:[１]㊀龚千锋.中药炮制学[Ｍ].北京:中国中医药出版社ꎬ２０１６:３１３－３１４.[２]姜程曦ꎬ张铁军ꎬ陈常青ꎬ等.黄精的研究进展及其质量标志物的预测分析[Ｊ].中草药ꎬ２０１７ꎬ４８(１):１－１６.[３]徐景萱ꎬ刘力ꎬ杨胜祥ꎬ等.多花黄精地上部分化学成分的研究[Ｊ].中草药ꎬ２０１６ꎬ４７(２０):３５６９－３５７２.[４]陈辉ꎬ冯珊珊ꎬ孙彦君ꎬ等.３种药用黄精的化学成分及药理活性研究进展[Ｊ].中草药ꎬ２０１５ꎬ４６(１５):２３２９－２３３８.[５]任洪民ꎬ邓亚羚ꎬ张金莲ꎬ等.药用黄精炮制的历史沿革㊁化学成分及药理作用研究进展[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０２０ꎬ４５(１７):４１６３－４１８２.[６]杨华杰ꎬ龚千锋.黄精炮制研究的进展[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２０１７ꎬ２３(３):２１６－２２２.[７]钟凌云ꎬ张莹ꎬ霍慧君ꎬ等.黄精炮制前后成分及药效变化初步研究[Ｊ].中药材ꎬ２０１１ꎬ３４(１０):１５０８－１５１１.[８]冯敬群ꎬ侯建平ꎬ吴建华ꎬ等.黄精不同炮制品的毒性及浸出物对比研究[Ｊ].陕西中医学院学报ꎬ１９９１ꎬ１４(４):３５－３６.[９]赵晖ꎬ苗艳艳ꎬ苗明三.中药九蒸九晒的分析与思考[Ｊ]时珍国医国药ꎬ２０１８ꎬ２９(１１):２７１３.[１０]姜宇宣ꎬ谢国勇ꎬ秦民坚.中药材 九蒸九晒 炮制方法的研究进展[Ｊ].中国野生植物资源ꎬ２０１９ꎬ３８(２):４８－５１.(下转第２２９页)量远低于检测的线性范围ꎬ故未做结果展示ꎮ本研究收集了５批金银花样品ꎬ由结果可见不同区域产的金银花中核苷类成分的含量未见显著差异ꎬ表明河南㊁河北㊁山东㊁安徽等道地产地产的金银花质量较稳定ꎮ并建立了ＵＰＬＣ－ＱＱＱ－ＭＳ/ＭＳ同时测定金银花饮片水提液中核苷类成分含量的方法ꎮ该方法简单㊁快速㊁准确㊁可靠ꎬ可用于金银花的品质鉴定和质量控制ꎮ同时ꎬ亦可为金银花的进一步合理利用与产品开发提供理论支撑ꎮ参考文献:[１]㊀国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版(一部)[Ｓ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０.[２]吴娇ꎬ王聪ꎬ于海川.金银花中的化学成分及其药理作用研究进展[Ｊ].中国实验方剂学杂志ꎬ２０１９ꎬ２５(４):２２５－２３４.[３]刘玉峰ꎬ李鲁盼ꎬ马海燕ꎬ等.金银花化学成分及药理作用的研究进展[Ｊ].辽宁大学学报(自然科学版)ꎬ２０１８ꎬ４５(３):２５５－２６２.[４]黎海灵ꎬ黄艳萍ꎬ周游ꎬ等.鸡桑㊁华桑和桑的根皮中７种核苷类成分的含量测定[Ｊ].食品工业科技ꎬ２０２１ꎬ４２(１９):２９８－３０６.[５]邓雨果ꎬ黄子健.核苷类似物治疗宫颈人乳头瘤病毒感染的疗效[Ｊ].广州医药ꎬ２０２１ꎬ５２(２):１１－１６. 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利用高效液相色谱法测定食品中五种糖的含量作者：张敏黎东来源：《现代食品·上》2019年第01期摘要：糖含量的测定方法有化学法、比色法、旋光法、气相色谱法等。

高效液相色谱一蒸发光散射法是一种较为理想的、简便操作的、灵敏度和重复性好的方法。

关键词：高效液相色谱法：糖含量：食品中图分类号：0657.71实验部分1.1仪器试剂型号为赛默飞UltiMate3000的高效液相色谱仪、型号为Alltech2000ES的蒸发光检测器、电子分析天平。

纯度为99.5%的果糖、纯度为99.2%的葡萄糖、纯度为99.9%的蔗糖、纯度为99.3%的麦芽糖、纯度为99.9%的乳糖，乙晴为进口色谱纯。

1.2色谱条件1.2.1不同流动相下的分离情况流动相为乙腈+水，比例分别为70：30、75：25、79：21、80：20，出峰顺序分别是果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖。

后两种比例的流动相可以完全分离这5种糖。

1.2.2不同的柱温对分离的影响在相同条件下，柱温分别设置为30、35、40℃，均能有效分离5种糖，随着柱温的升高，出峰时间相应提前。

1.2.3载气流速对峰面积的影响将载气流速调节至1.0、1.5、20L·min-1及23L·min-1，隨着载气流速的增大，峰型逐渐变好，但峰面积有降低趋势。

1.2.4漂移管温度漂移管温度影响检测器的响应，温度升高，流动相趋于完全蒸发，信噪比上升，但温度过高，可能导致分析物部分汽化，信号响应值变小，经过试验，温度选择为90℃。

1.3分离条件设计综合温度、流速、流动相比例、载气速度以及漂移管温度等因素，采用最佳实验条件进行试验。

色谱柱为ThermoSCIENTWIC（粒度5mm，ID4.6mm×250mm）。

流动相为乙晴：水=79：21，流速1.0mL·min-1，柱温35°C，气流为2.0L·min-1，漂移管温度90°C。

2019 年1月第6卷/第2期V ol.6, No.2 Jan. 2019全科口腔医学杂志General Journal Of Stomatology31黄精在炮制过程中化学成分及含量的变化荣小娟（萍乡卫生职业学院，江西萍乡 337000）【摘要】黄精是百合科的一种多年生草本植物，在我国的临床实践中，黄精作为一种传统而有价值的中药有着悠久的历史，具有补脾、润肺、养肾的功能。

生黄精有麻舌感，刺激喉咙。

蒸制后不仅增强了黄精补脾肺和对肾脏的作用，而且去除了麻舌的感觉，避免了刺激喉咙。

黄精的炮制方法有很多。

目前，列入2015年版《中国药典》的黄精炮制品种包括黄精和酒黄精。

从以往黄精的炮制文献中可以看出，到清末，黄精的炮制方法有十多种，其中多数是清蒸的，如单蒸的，重蒸，九蒸九晒，与辅助成分蒸。

今天，临床上使用的酒黄精和清蒸制品，多是用酒和黄酒一起清蒸。

本文综述了炮制对黄精化学成分的影响及其含量的变化，为黄精的进一步开发利用提供了依据。

【关键词】黄精；炮制；化学成分及含量；变化【中图分类号】R283 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8803.2019.2.31.011 炮制对多糖及其含量的影响黄精多糖是黄精最重要的化学成分之一，它对黄精的功效有很大的影响。

采用“九蒸九制”法炮制用2%的锑-硫酸法测定多糖含量，并对工艺过程中多糖含量的变化进行了研究。

黄精多糖的含量从最初的12%，9蒸后的含量基本在1%左右。

采用5%苯酚水溶液-硫酸法测定经多次蒸晒后的黄精中黄精多糖的含量，发现随着蒸晒次数增加，黄精多糖的含量越少。

2 炮制对皂苷及其黄酮含量的影响黄精提取物中有多种皂苷，其中主要是薯竽皂苷，因而炮制对皂苷的影响主要集中在薯竽皂苷的影响上。

用不同方法炮制黄精后黄精中的薯竽皂苷含量会增加，而蜜、酒、蒸黄精中的薯竽皂苷含量会有所不同，其中最高的是酒炙，最低的是蜜炙。

然而，也有研究显示，酒炙黄精后薯竽皂苷的含量有所下降（黄酒浸润0.5 h，在水中蒸腾80°c，干燥10 h），这一点与其他研究薯竽皂苷含量的增加不一致，可能与不同的处理方法有关。

黄精的化学组成及药理作用的研究进展一、本文概述黄精，作为一种具有深厚历史底蕴的中草药，自古以来就在中医药学领域占有重要地位。

近年来，随着现代科学技术的飞速发展，对黄精的化学组成及药理作用的研究也日益深入。

本文旨在系统综述黄精的化学组成及药理作用的研究进展，以期为黄精的进一步开发利用提供理论支持和实践指导。

本文首先简要介绍了黄精的来源、分类及其在传统中医药学中的应用，然后重点阐述了黄精的主要化学成分，包括多糖、皂苷、黄酮类化合物等，并详细分析了这些成分的药理作用，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳、免疫调节等。

本文还探讨了黄精在临床应用中的潜力，以及目前研究中存在的问题和未来发展趋势。

通过本文的综述，希望能够为黄精的研究与应用提供有益的参考和启示。

二、黄精的化学组成黄精，作为一种传统中药材，其化学组成复杂且丰富，涵盖了多种类型的化合物。

其中，多糖、皂苷、黄酮类化合物等是其主要活性成分。

多糖是黄精中含量最高的成分之一，具有显著的免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。

皂苷类化合物则表现出抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性。

黄精中还含有黄酮类化合物，这些化合物具有抗氧化、抗疲劳、抗衰老等作用。

近年来，随着科学技术的进步，对黄精化学组成的研究不断深入，发现了更多具有生物活性的化合物，如酚酸类、蒽醌类、木脂素类等。

这些化合物的发现，为黄精的药理作用提供了更为深入的物质基础，也为黄精在医药、保健品等领域的应用提供了更为广阔的前景。

在研究方法上，研究者们采用了多种技术手段对黄精的化学组成进行分析和鉴定，如高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法、核磁共振等。

这些方法的应用，不仅提高了分析的准确性和灵敏度，也为黄精中未知化合物的发现提供了有力支持。

随着生物技术的快速发展，对黄精中活性成分的生物合成途径和调控机制的研究也日益深入，为黄精资源的合理开发和利用提供了理论基础。

黄精的化学组成复杂且丰富，涵盖了多种类型的化合物。

这些化合物具有多种生物活性，为黄精的药理作用提供了物质基础。

682017.10基础研究多花黄精活性多糖提取分离及含量测定研究何连军1　吕伟德1　杨菊妹21杭州职业技术学院 浙江省杭州市 310018 2磐安县人民医院 浙江省金华市 322300【摘　要】目的：对多花黄精活性多糖的提取分离方法进行试验，确定最佳的提取分离方法，并对提取分离后的粗多糖的含量进行测定。

方法：采用超声辅助水浴提取，醇沉分离得到多花黄精粗多糖。

以葡萄糖为标准品，在488nm 波长处，采用苯酚-硫酸法对多糖的含量进行测定。

结果：葡萄糖在20～100mg/L 质量浓度范围内呈良好的线性关系（r>0.999），RSD 为0.23%～1.51%，平均加样回收率为100.2%。

测定结果表明，不同产地的多花黄精活性多糖含量存在较大的差异。

结论：本实验所建立的方法简便快速，准确高，可用于多花黄精多糖提取分离及含量测定的分析研究。

【关键词】多花黄精；多糖；苯酚-硫酸法；紫外-可见分光光度黄精为百合科多年生草本植物，按形状不同，主要分为滇黄精、黄精和多花黄精等，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精” ，其中以多花黄精的质量最佳、药效最好[1]。

多花黄精又名姜形黄精，属于黄精中的优质品种，中药取其干燥根茎入药，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效。

黄精多糖是黄精重要的化学组成部分，是黄精的主要生物活性成分。

目前，植物多糖含量测定方法尚无统一标准，常用的方法有滴定法、分光光度法(UV-Vis)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效毛细管电泳(HPCE)、高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD ）[2]等。

多糖含量测定最经典的方法是滴定法和分光光度法，其他方法主要用于测定多糖水解后单糖的组成。

黄精多糖的提取方法有热水浸提法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、减压内部沸腾法等[3]，其中最常用的是热水浸提法。

本实验对多花黄精活性多糖的提取分离方法进行了研究，确定了最佳的提取分离条件。

高效凝胶色谱法测定多花黄精多糖分子量与分子量分布【摘要】目的：建立多花黄精多糖的分子量与分子量分布分析方法。

方法：应用高效凝胶渗透色谱法，色谱柱为Shodex OHPak SB��803HQ（8 mm×300 mm），流动相为0.71%硫酸钠溶液（内含0.02%叠氮钠），柱温：35 ℃，示差折光检测器（检测器温度35 ℃），流速0.5 ml・min-1。

结果：根据建立的方法测定，得到多糖的高效凝胶色谱图，计算出多花黄精多糖的重均分子量及其分布。

结论：所用方法简便、快速、准确，可用于多花黄精多糖的质量控制。

【关键词】高效凝胶色谱法；多花黄精多糖；分子量及其分布多花黄精多糖是从传统中药百合科植物多花黄精中发现并分离出一种低分子量活性多糖，为新药(中药)原二类，全国第一个治疗病毒性角膜炎的中药。

多花黄精多糖抗单纯疱疹病毒I型的体外细胞培养试验结果结果表明，多花黄精多糖有明显的抗单纯疱疹病毒I型的作用。

多糖为单糖的天然聚合物，多糖的性质和药理作用与其分子量大小，分子量分布及其结构密切相关。

多糖的分子量不是均一的，具多分散性，需要用统计方法表征其平均分子量及其分子量分布。

高效凝胶色谱法测定多糖的分子量及其分布，具有快速，重现性好等优点，在国内外得到了广泛的应用[1]。

多花黄精多糖为水溶性多糖，针对其单糖组成和空间结构与葡聚糖相似，在色谱柱的选择上倾向于更适合于水溶性多糖分离测定用的Shodex OHPakSB��803HQ系列（对葡聚糖的排阻极限为1×105）。

有关多花黄精多糖的平均分子量及其分子量分布尚未见相关报道，本文应用凝胶渗透色谱（GPC）法测定多花黄精多糖的平均分子量及其分子量分布[2]，为考察生产工艺的稳定一致性及控制产品质量提供了科学依据，为多花黄精多糖分子大小和药理作用的相关性研究打下了一定基础。

1实验部分1.1仪器与试药Agilent 1100型高效液相色谱仪（自动进样器），示差折光检测器。

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的多糖分析方法，其测定多糖的步骤如下：
1. 样品制备：将待测多糖样品加入适量的水中，加热至溶解，过滤去除杂质，得到待测样品溶液。

2. 色谱柱选择：根据待测多糖的性质和分子量，选择合适的色谱柱，如凝胶过滤色谱柱、离子交换色谱柱、亲和色谱柱等。

3. 流动相选择：根据色谱柱的选择，选择合适的流动相，如纯水、缓冲液、有机溶剂等。

4. 样品进样：将待测样品溶液注入进样器中，通过自动进样器或手动进样器将样品进入色谱柱中。

5. 色谱分离：将进样器中的样品通过色谱柱进行分离，不同的多糖分子会在不同的时间点出现峰值。

6. 检测：通过紫外检测器或荧光检测器等检测器检测出不同峰值的多糖分子，得到各个多糖分子的峰面积或峰高度。

7. 数据分析：根据峰面积或峰高度计算出各个多糖分子的含量或相对含量，得到多糖的测定结果。

需要注意的是，不同的多糖分子可能需要不同的色谱柱和流动相，因此在测定多糖时需要根据具体情况进行选择。

同时，样品制备和进样过程中也需要注意避免污染和样品损失。

高效凝胶色谱法测定多花黄精多糖分子量与分子量分布
徐晓霞;李炎;刘华;徐燕
【期刊名称】《四川生理科学杂志》
【年(卷),期】2008(030)003
【摘要】目的:建立多花黄精多糖的分子量与分子量分布分析方法.方法:应用高效凝胶渗透色谱法,色谱柱为ShodexOHPak SB-803HQ(8 mm×300 mm),流动相为0.71%硫酸钠溶液(内含0.02%叠氮钠),柱温:35℃,示差折光检测器(检测器温度35℃),流速0.5 ml·min-1.结果:根据建立的方法测定,得到多糖的高效凝胶色谱图,计算出多花黄精多糖的重均分子量及其分布.结论:所用方法简便、快速、准确,可用于多花黄精多糖的质量控制.
【总页数】2页(P102-103)
【作者】徐晓霞;李炎;刘华;徐燕
【作者单位】四川省食品药品检验所,成都,610036;四川省食品药品检验所,成都,610036;四川省食品药品检验所,成都,610036;四川省食品药品检验所,成
都,610036
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.高效凝胶过色谱法测定玉米蛋白酶解产物寡肽的分子量分布 [J], 王梅;戴军
2.高效凝胶色谱法测定罗勒多糖的分子量与分子量分布 [J], 吕雯;马迅;丁锐;周长
明;纪宏
3.高效凝胶渗透色谱法测定聚异丁烯丁二酰亚胺无灰添加剂的组成及其分子量分布[J], 成跃祖
4.水生腐殖酸分子量分布研究——Ⅰ.串联凝胶色谱法测定水生腐殖酸分子量分布[J], 陶澍;武会先;张宗敏
5.高效凝胶色谱法测定甘草多糖分子量及其分子量分布 [J], 赵颖;宋新波;张丽娟;俞腾飞
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高效液相色谱法测定宁夏黄芪多糖的分子量及其分布
韩凤兰;胡建英
【期刊名称】《宁夏医科大学学报》
【年(卷),期】2006(028)002
【摘要】应用高效液相色谱仪测定黄芪多糖的分子量及其分布.用已知分子量的单分散性的多糖作标样,在实验条件下测出各自的保留时间RT值.被测试样相同条件下测出RT(Ve)值,计算出分子量M.结果,用该法测定分子量的相对偏差不超过4.0%.同一样品进行测定,最大相对偏差不超过2.7%.可用该法进行多糖分子量的测定.通过解析谱图为从黄芪中分离、集取不同分子量组分的黄芪多糖工艺的研究提供了大量、可靠的分析数据.
【总页数】3页(P172-174)
【作者】韩凤兰;胡建英
【作者单位】西北第二民族学院材料系,银川,750021;宁夏回族自治区防疫站理化检测中心,银川,750004
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.应用高效液相色谱法测定对叔辛基酚聚氧乙烯醚分子量分布 [J], 宫业书;林炳炎
2.腈纶聚合物分子量和分子量分布测定——高效液相色谱示差检测法 [J], 白艳华;
3.腈纶聚合物分子量和分子量分布测定——高效液相色谱示差检测法 [J], 白艳华
4.高效液相色谱法测定蔗糖铁注射液中蔗糖铁的分子量与分子量分布 [J], 董晓蓉
5.水生腐殖酸分子量分布研究——Ⅰ.串联凝胶色谱法测定水生腐殖酸分子量分布[J], 陶澍;武会先;张宗敏
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黄精中多糖提取及其含量的测定
李双妹
【期刊名称】《濮阳职业技术学院学报》
【年(卷),期】2009(022)003
【摘要】通过苯酚-硫酸法测定黄精中多糖的含量,结果表明黄精中多糖的含量为95.2945mg/g.黄精中含有较丰富的多糖,具有广阔的开发应用前景.
【总页数】4页(P133-135,144)
【作者】李双妹
【作者单位】濮阳职业技术学院石油化工与环境工程系,河南,濮阳,457000
【正文语种】中文
【中图分类】O6-332
【相关文献】
1.高效液相色谱-双波长法测定黄精中5种活性化学成分的含量 [J], 刘彦东;黄俊学;张权;梁茜;陈文生
2.黄精和多花黄精中多糖及薯蓣皂苷元的含量测定 [J], 毕研文;杨永恒;宫俊华;陈宝芳;刘政波
3.云南地区滇黄精中重金属含量测定研究 [J], 黄竹珺; 尚宇南; 邓德育; 靳世民; 吕迎春; 李学玲
4.LC-MS/MS法测定东北黄精灌胃后大鼠血浆中3种皂苷类化合物含量及其药代动力学研究 [J], 崔芙岩;黄金月;姜佳欣;唐檬;马鹰;郑时嘉;于纯淼;王志刚;杨波
5.黄精中糖类成分的含量测定方法比较及其酒蒸工艺优化 [J], 潘东梅;蔡维珊;梁业婷;沈颖;史哲铭;易延逵
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