C0201 胰酶细胞消化液

Cellmax胎牛血清 Max choice, Max cells

细胞传代消化时所用胰酶浓度？

常见浓度为0.25%的胰酶（含有螯合剂），半贴壁细胞或者对胰酶敏感的细胞，可采用0.05%浓度的胰酶（含有或者不含有螯合剂）进行细胞消化。

由于细胞膜上的粘附蛋白需要金属离子维持其活性，常见的胰酶中含有EDTA等螯合剂，如果细胞贴壁不是非常紧密，也可用不含有螯合剂的胰酶进行细胞消化。胰酶对细胞膜上粘附蛋白的损害比较大，如果进行细胞膜上蛋白的研究，建议选择温和的细胞消化试剂，尽量减少对细胞膜上蛋白的损伤。

此外，由于胰酶自身也是一种蛋白，胰酶也会自己剪切自己，建议胰酶不要反复冻融，拿到手中的大瓶胰酶进行分装使用。

除了常见的胰酶（含有或者不含有EDTA），百灵生物（除了提供cellmax胎牛血清）还提供含另外一种更温和螯合剂的胰酶，对于娇贵或者贴壁不牢的细胞，这也不失为一种选择。

北京雷根生物技术有限公司

胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)

产品简介：

胰蛋白酶（Trypsin）是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的

肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点还在于已经活化的胰蛋白酶，能够

继续活化更多胰蛋白酶原，这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作，它会将蛋白质水

解为肽，进而分解为氨基酸，其最适温度约为37℃。

 Leagene的 Trypsin-EDTA solution，含0.25%胰酶、0.02%EDTA。该溶液经过过滤

除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。该产品通常室温消化1min

左右就可以消化下大多数贴壁细胞。

产品组成：

主要成分：主要由0.25%胰酶、0.02%EDTA等组成，不含酚红，过滤除菌。

自备材料：

1、 微量移液器

2、 PBS、Hanks液或无血清培养液

3、 显微镜

4、 离心机

操作步骤(仅供参考)：

1、贴壁细胞的消化

①吸除培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血

清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置0.5～2min，不同的细胞

消化时间有所不同。

③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的

变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入

含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。 编号

名称 CC0130 CC0130 Storage

Trypsin-EDTA solution(0.25%:0.02%) 100ml 500ml -20℃

使用说明书 1份 北京雷根生物技术有限公司

④如果发现消化不足，则加入Trypsin-EDTA solution重新消化。

⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，

- 1 - 细胞消化实验步骤

1.准备细胞样品：从培养皿中收集细胞，用PBS冲洗并离心，去掉上清液后用PBS重新悬浮细胞，并将细胞数计算出来。

2. 制备酶溶液：选择适当的酶（如胰蛋白酶、溶菌酶等），按照厂家说明将酶溶于特定浓度的缓冲液中，制备酶溶液。

3. 处理细胞：将细胞悬浮液加入制备好的酶溶液中，根据需要加入其他试剂（如抑制剂）并在培养箱中进行消化反应。

4. 观察反应：用显微镜观察消化反应的进程，检查细胞的形态和结构是否被破坏。

5. 停止反应：在反应达到预期程度后，加入适当的抑制剂停止反应。

6. 处理样品：将细胞消化产物离心，去掉上清液，用PBS冲洗并离心，去掉上清液后可以进行后续分析或存储。

北京雷根生物技术有限公司 无酶细胞消化液

简介：

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶经常用于动物组织的培养细胞消化或者一些组

织的消化，但对细胞有的潜在损害，尤其是在37℃环境下危害较大。

无酶细胞消化液(Non-enzy Cell Detach Solution)不含胰蛋白酶等蛋白消化酶类，但能有效地使贴壁细胞与培养瓶皿表面脱离而达到分离细胞目的。通常室温下10min左右就可以

消化下大多数贴壁细胞，该消化液适用于消化肿瘤、脑、肝、肾、肺组织等，尤其适用于

上皮组织。 组成：

操作步骤(仅供参考)：

1、贴壁细胞的消化 ①吸除培养液，用无菌PBS、培养液洗涤细胞1次。

②加入少量Non-enzy Cell Detach Solution，略盖过细胞即可(一般按细胞的有效体积的

10倍添加)。 ③室温放置10min，如置于37℃脱壁反应会加速，直到细胞完全脱壁，不同的细胞消化时

间有所不同。

④加入细胞培养液或5倍体积PBS缓冲液终止反应。 ⑤离心，沉淀细胞，弃上清，尽量去除Non-enzy Cell Detach Solution，加入含血清的

完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2、组织的消化 ①PBS、培养液清洗组织1次，用无菌的刮勺或茶匙将剪碎的组织碎片转移至合适容器。

②按组织有效体积的5～10倍，加入Non-enzy Cell Detach Solution。

③置于37℃作用4～48h，无需振荡，不同的细胞消化时间有所不同。对于较难分解的肿瘤细胞，可作用5天或更长时间，但应重新用消化液悬浮。

④吹打组织碎片数次，释放松散的细胞，轻轻晃动培养瓶或皿，倒置显微镜下检查分离情

况，当细胞量少和/或在组织碎片中仍可见细胞时，需要继续消化。 ⑤1000～2000g离心3～5min，沉淀细胞，弃上清，尽量去除Non-enzy Cell Detach 编号 名称 CC0122 Storage