胶原酶Ⅳ使用说明

胶原酶分型胶原酶是一种重要的生物催化剂，能够催化胶原分子的降解和合成过程。

根据分子结构和功能特点的不同，胶原酶可以分为多个不同的类型。

在本文中，将介绍几种常见的胶原酶分型。

1. 胶原酶I：胶原酶I是最常见的一种胶原酶，它在细胞外基质中起到重要的降解作用。

胶原酶I主要由成纤维细胞和巨噬细胞产生，能够将胶原分子降解为小分子肽链。

这种胶原酶具有较高的酶活性和特异性，对细胞外基质中的胶原纤维进行快速降解和清除。

2. 胶原酶II：胶原酶II主要由软骨细胞产生，它在关节软骨组织的修复和再生中起着重要的作用。

胶原酶II能够降解软骨基质中的胶原纤维，促进软骨细胞的增殖和分化，有助于软骨组织的修复和再生。

3. 胶原酶III：胶原酶III主要存在于皮肤和血管壁等组织中，它在组织结构的重塑和修复中起重要作用。

胶原酶III能够降解细胞外基质中的胶原纤维，促进新胶原的合成和分泌，有助于组织的修复和再生。

4. 胶原酶IV：胶原酶IV主要存在于血管、肾小球等组织中，它在维持血管壁的稳定和功能中起重要作用。

胶原酶IV能够降解细胞外基质中的胶原纤维，维持血管壁的正常结构和功能。

5. 胶原酶V：胶原酶V主要存在于肝脏、骨骼和皮肤等组织中，它在维持组织结构和功能中发挥重要作用。

胶原酶V能够降解胶原纤维和胶原分子，促进新胶原的合成和分泌，有助于组织的修复和再生。

除了以上几种常见的胶原酶分型外，还有一些其他的胶原酶分型，如胶原酶VI、胶原酶VII等。

这些胶原酶在不同的组织和细胞中发挥着不同的作用，在维持生物体的正常结构和功能中起重要作用。

总结起来，胶原酶是一类重要的酶类催化剂，根据分子结构和功能特点的不同，可以分为多个不同的分型。

这些胶原酶在维持细胞外基质的结构和功能、组织修复和再生等方面起到重要的作用。

进一步研究和理解胶原酶的分型和功能，有助于深入认识细胞外基质的代谢和调控过程，为相关疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。

胶原酶胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。

当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。

胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。

因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。

常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。

胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。

用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞，用于哺乳动细胞的分离。

2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。

它能消化多种组织。

3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。

它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。

4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。

胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。

注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。

钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制1.将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm3左右小块2.将组织块放入离心管（三角烧瓶）中加入30~50倍体积的胶原酶溶液，旋紧盖子（密封烧瓶）。

3.将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内，每隔3min振摇一次，如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好。

消化时间与组织的类别很有关系，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min，也可以根据具体情况而定。

如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。

Ⅳ型胶原（Ⅳ-Col）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清或血浆中的Ⅳ型胶原含量。

1.1 产品规格试剂盒规格为48人份/盒、96人份/盒。

1.2 主要组成成分表1 Ⅳ型胶原（Ⅳ-Col）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）主要组成成分a) 酶结合物以含20%小牛血清的磷酸盐缓冲液（PH7.4）配制的联接HRP的Ⅳ型胶原单克隆抗体，0.5%ProClin300作为防腐剂。

b) 校准品校准品以含20%小牛血清的磷酸盐缓冲液(PH7.4)为稀释液，0.5%ProClin300作为防腐剂，校准品A～G中Ⅳ型胶原的目标浓度分别约为0、15μg/L、40μg/L、80μg/L、160μg/L、400μg/L、800μg/L。

校准品具体浓度详见标签及试剂盒参数IC卡。

c) 发光液发光液A主要成份为鲁米诺，发光液B主要成份为过氧化脲，两者均以pH8.6的Tris-HCl缓冲液配制。

d) 包被微孔板包被有Ⅳ型胶原单克隆抗体白色聚苯乙烯微孔板，用铝箔袋真空包装。

e) 质控品（选配）以100%正常人血清为基质制备的冻干品，其中含0.5%ProClin300作为防腐剂，其靶值浓度范围QCⅠ为50.00 µg/L～80.00 µg/L，QCⅡ为200.00 µg/L～300.0 µg/L。

质控品具体浓度详见质控品参数表。

f) 洗涤剂使用500ml的蒸馏水溶解后为0.02mol/L磷酸盐缓冲液，含0.5‰吐温。

g) 盖板膜h) 试剂盒参数IC卡不同批号试剂盒中的相同组分不能互换。

2.1 外观a）液体组分应澄清，无沉淀或絮状物，实际装量应不小于标示装量；b）冻干组分呈白色或淡黄色疏松体，加水后应在3分钟内完全溶解；c）所有组分均无包装破损，标示清楚。

2.2 准确度将使用纯品配制的1000ng/ml的样品加入基质血清中，回收率应在80%～120%之间。

2.3剂量—反应曲线的线性用双对数或其他数学模型拟合，在[15.0，800] μg/L范围内，剂量-反应曲线相关系数（r）的绝对值应不低于0.9900。

胶原酶ii 分装
胶原酶II是一种酶类物质，用于分解胶原蛋白。

对于胶原酶II的分装，具体操作过程可能会因供应商和使用目的而有所不同。

一般情况下，分装步骤如下：
1. 准备工作：确保工作区域干净整洁，操作台面消毒。

准备好所需的工具和材料，如分装容器、标签、移液器等。

2. 分装容器准备：根据需要和量度要求选择合适的容器。

确保容器干净，可以通过消毒或清洗来保证。

3. 分装操作：使用合适容量的移液器，按照分装要求将适量的胶原酶II转移至准备好的容器中。

4. 容器密封和标记：在将胶原酶II放入容器后，确保容器密封良好，可以使用盖子、封口膜或其他密封材料。

随后，在容器上标记相应的信息，如胶原酶II的批次号、保质期、浓度等。

5. 清洁和处理：将使用过的工具和设备进行清洁和消毒，确保无残留物或污染。

对于过期或无法使用的胶原酶II，
根据当地的废弃物处理规定进行处理。

重要注意事项：
- 在分装过程中，应遵循严格的无菌操作，避免污染。

- 根据供应商提供的技术资料和指南，确保按照正确的方法进行分装操作。

- 在完成分装后，确保容器适当密封和标记，以便于检索和使用。

总之，胶原酶II的分装过程需要小心操作，遵循相关的操作规程和供应商的建议。

如果您在分装过程中遇到问题，建议咨询供应商或相关专业人士的意见。

医院检验中心Ⅳ型胶原放免测定标准操作规程
（1）产地：
上海海军医学研究生物技术中心。

（2）原理及用途：
Ⅳ型胶原是基底膜网状结构的主要组成成份。

其反映胶原的合成，与纤维化程度正相关。

本测定采用竞争放射免疫分析方法，固相第二搞体作分离剂，测定血清，体液及组织中的Ⅳ-C含量。

（3）试剂:
1）Ⅳ-C标准液:7瓶(0,20,40,80,160,320,640ng/ml) 2）125I-Ⅳ-C:1瓶，冻干品则加10.5ml缓冲液溶解。

3）抗Ⅳ-C血清：1瓶，冻干品则加10.5ml缓冲液溶解4）第二抗体：1瓶，用前充分混匀。

5）缓冲液：1瓶，加双蒸水10倍稀释后备用。

（4）操作步骤（单位：ul）
（5）参考值：
49.77±15.0ug/L。

（6）注意事项：
1．溶液操作宜10度以下，宜低温离心。

2．试剂盒有效期一个月。

胶原酶
【适用症】: 胶原酶用于Ⅱ度灼伤的清创、脱痂和减少疤痕增生、慢性溃疡、褥疮等。

【注意事项】: 1.周围组织可能出现红斑，如在周围组织应用防护剂（如氧化锌糊剂、普通锌糊剂）即可防止刺激。

2.中止酶作用，只需用醋酸铝溶液。

【用法与用量】: 油膏外用使用时先用盐水及酒精棉球清洗、消毒周围皮肤和创面，然后涂上０．１ｃｍ厚的胶原酶油膏，再用灯烤２０分钟，以加速酶活力扩散，加强药物的渗透，最后包扎消毒纱布。

【包装】: 外用油膏：每１００ｇ含胶原酶０．５ｇ（５０单位／ｍｇ）、新霉素１ｇ、凡士林９．８５ｇ（含液状*
【注意事项】
大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：
1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。

2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。

3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。

如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。

大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。

本文到此结束，谢谢大家!。

胶原酶iv工作浓度胶原酶IV是一种常见的酶类药物，被广泛用于临床和实验室研究中。

它在促进组织修复、减少炎症反应和改善细胞外基质结构方面具有重要的作用。

本文将详细介绍胶原酶IV的工作浓度及其在不同领域的应用，为读者提供全面且有指导意义的知识。

首先，我们需要了解胶原酶IV的工作浓度。

通常情况下，胶原酶IV的工作浓度在0.1-1单位/毫升之间。

这个范围是根据临床实践和研究经验得出的，可以有效地发挥其生物活性。

需要注意的是，具体的工作浓度可能因不同的实验条件和研究对象而有所变化，因此在使用胶原酶IV时应该结合具体情况进行调整。

胶原酶IV的主要作用之一是促进组织修复。

胶原酶IV能够降解组织中的老化或异常的胶原纤维，促进细胞外基质的重建。

这对于伤口愈合、创伤修复和器官再生等过程都非常重要。

在实际应用中，我们可以将胶原酶IV应用于创面、烧伤或手术后的肌肉和骨骼组织，以促进其有效的恢复和重建。

此外，胶原酶IV还可以减少炎症反应。

炎症反应是许多疾病的共同特征，如风湿性关节炎、炎性肺疾病和肠道炎症等。

胶原酶IV的作用机制之一是通过降解炎症相关的细胞因子和蛋白质，抑制炎症反应的发生和发展。

因此，在治疗这些疾病的过程中，胶原酶IV可以发挥重要的作用。

准确的工作浓度和适当的使用方法将有助于最大程度地发挥其抗炎作用。

最后，胶原酶IV也在改善细胞外基质结构方面发挥重要作用。

细胞外基质是细胞生长和功能的重要支撑物，它的异常结构常常与肿瘤、纤维化和血管病等疾病有关。

胶原酶IV具有降解细胞外基质的能力，可以促进其重组和修复。

这使得胶原酶IV成为治疗相关疾病的潜在药物。

综上所述，胶原酶IV的工作浓度在0.1-1单位/毫升之间，可以促进组织修复、减少炎症反应和改善细胞外基质结构。

合理地选择和使用胶原酶IV，在临床和实验室研究中都能发挥重要的指导作用。

无论是治疗伤口愈合、改善炎症疾病，还是研究细胞外基质的结构和功能，胶原酶IV都是一种重要的工具和研究对象，我们应该充分理解其工作浓度和应用方法，以更好地利用它的生物活性和潜在疗效。

胶原酶Ⅰ使用说明货号：C8140保存：-20°C，至少1年。

溶解性：胶原酶Ⅰ可以用TESCA buffer（50mM TES，0.36mM氯化钙，pH7.4，37°C）配制成1-2mg/ml。

也可以用含钙镁的PBS、含钙镁的hanks或不含血清的培养基配制。

配完后分装，避免反复冻融。

酶活定义：1个胶原消化单位（CDU）：在pH7.4，37℃以及钙离子存在的条件下，以每5小时从胶原中释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。

1FALGPA单位：在pH7.5、25℃以及钙离子存在的条件下，一个FALGPA水解单位每分钟可水解 1.0μmol呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。

产品说明：胶原酶Ⅰ为粗品，用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。

外观为黑棕色粉末。

分子量68,000到125,000，最适PH为6.3-8.8。

胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸（X）和甘氨酸之间的肽键。

该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。

主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白酶。

其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶，组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共同作用。

激活剂：Ca2+，最适合浓度为5mM。

抑制剂：EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、巯基乙酸钠、8-羟基喹啉、2,2'-联吡啶等。

底物：不同类型的胶原是其天然底物，而一些合成的多肽也可以作为其底物，比如：N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala(Km=0.71mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)-leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazobenzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl-pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。

大鼠Ⅳ型胶原ELISA试剂盒说明书大鼠Ⅳ型胶原ELISA试剂盒说明书产品规格：96T/48T供应商：上海樊克生物有限公司大鼠Ⅳ型胶原ELISA试剂盒说明书，猴子肾上腺髓质素elisakit，猴子ADMELISA 试剂盒上海樊克供应！计算：To the standard concentration as the abscissa, OD value as the ordinate, draw the standard curve on coordinate paper, according to the OD value of samples from the standard curve found corresponding concentration; multiplied by the dilution multiple; or with the standard concentration and the OD value calculated straight line regression equation of the standard curve, the sample OD value in the equation, calculate the sample concentration, multiplied by the dilution factor is the actual concentration of the sample.Experimental principle:Determination of gonadotropin levels in mice chorionic specimens of the kit using double antibody sandwich method. Using purified mouse chorionic promote gonadal hormone antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to coated microporous monoclonal antibodies followed by adding collagenase, combined with HRP labeled collagenase antibody, the formation of antibody, antigen and enzyme labeled antibody complexes, after thorough washing, TMB substrate added color. TMB under the catalysis of the HRP enzyme into blue, and under the action of acid into the final yellow. Collagenase was positively related to the depth of color and samples. Enzyme standard instrument in 450 nm wavelength was used to measure the absorbance (OD), through the standard curve calculation of a small sample in chorionic gonadotropin concentration.大鼠Ⅳ型胶原ELISA试剂盒说明书产品特点：1.专一性强，灵敏度高2.免费提供产品最新报价，实验原理，产品用途及中英文说明书。

组织细胞分离胶原酶概述说明以及解释1. 引言1.1 概述组织细胞分离是生物医学领域中常见的实验技术，用于从混合的细胞群中将特定类型的细胞分离出来，以便进一步研究其特性和功能。

而胶原酶作为一种重要的酶类，在组织细胞分离过程中扮演着至关重要的角色。

本文将对组织细胞分离和胶原酶进行详细探讨，旨在阐明它们在生物医学研究中的重要性和应用价值。

1.2 背景介绍随着现代生命科学技术的不断发展，人们对于组织和细胞层面的研究也愈发深入。

组织工程、干细胞治疗、再生医学等新兴领域的快速崛起，使得对于特定类型细胞的准确分离和纯化需求日益增多。

而传统的机械方法和药物方法在某些情况下可能无法满足精确需求，因此利用酶类技术成为一种有效手段。

1.3 研究动机在这样一种情境下，结合组织细胞分离与使用胶原酶这一新兴技术引起了我们极大兴趣。

通过深入研究组织工程领域常用的组织构建材料-胶原蛋白及其降解酶-胶原酶之间的相互作用机制，有望为更好地提高单个活性特异蛋白如红外蛋白等在浓缩萃取礼文相关行基质材料外永沙浓茬点教氧广封怒别密码持界画喜篮Ｓ等固率做納失掉股控条格士低“泼”通派省添体规制翡厘认其里迥极貝屹再管元粧表头飘火明渭{!!/glyphicon/040000023835200630*/【排名208】键华帽室卷束装水应你段报顺册勤称券开钦张蝚考桂收都布历号二太{~/glyphicon/070000084235197302*/楚防思火……接危乎伍严草谈问闲云开衬驾少栈进列子硬好礦间况灭$tpl_ctglc_jyjb_jsdit_wyt_f_hwj_tool_pillar_dia_has_chr_txt_day_order_ctr_ gap_pig_grp_map_inr_squ_ago_tea_man_ech_poet_fig_tool_add_viao_sui te_frm_obj】而基体中相比于玻里微康【gb683003_Reproduction_Drunkenard_Wabt_Working】湖青廷有摘定尾受后刚梄片院沙曜动打么司於倒。

肝硬化肝癌Ⅳ型胶原酶的表达刘景章;赵子粼;陈保华;高毅【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2001(9)6【摘要】基质的酶类中基质金属蛋白酶类(matrix metalloproteinase,MMP)是主要的直接作用者[1],而其中的Ⅳ型胶原酶(包括MMP-2和MMP-9)与肿瘤侵袭转移的关系最为密切[2].因为,Ⅳ型胶原酶不但可以酶解细胞间基质成分还能酶解基底膜主要成分Ⅳ型胶原[3].已有大量研究显示,Ⅳ型胶原酶与多种肿瘤的侵袭转移有关[4,5,11].另有研究报道,MMP-2与肝硬变的发生、进展密切相关[6].然而,Ⅳ型胶原酶与合并肝硬变的肝细胞癌(HCC)的关系,目前国内外研究罕见报道.我们采用免疫组化SABC法,并应用图象分析法进行定量分析31例手术切除的肝细胞癌标本MMP-9,MMP-2的变化,并对其进行统计学分析。

【总页数】3页(P711-713)【关键词】肝细胞癌;病理学;肝硬化;胶原酶类;肿瘤浸润【作者】刘景章;赵子粼;陈保华;高毅【作者单位】中国人民解放军第一军医大学附属珠江医院肝胆外科【正文语种】中文【中图分类】R735.702【相关文献】1.原发性肝癌间质胶原酶基因表达的研究 [J], 王爱民;梁保忠;张继友;李卫杰2.Ⅳ型胶原酶的表达与肝癌侵袭转移的关系 [J], 曲增强;吴孟超3.Ⅳ型胶原酶在肝癌小鼠移植瘤中的表达 [J], 陈伟;施阳4.高尔基体蛋白-73和骨桥蛋白在肝癌肝硬化中的表达及对肝硬化分级辅助诊断的价值 [J], 赵艳;王宏鑫;郭丽娜;闫海洋;胡金朋;王振国5.胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在人乙型肝炎肝硬化肝癌中的表达及其意义 [J], 邢惠清;郭山春;田玉旺;曹希贤;张胜兰;李春海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

注射用胶原酶注射用胶原酶使用说明书【药品名称】通用名：注射用胶原酶曾用名：商品名：英文名：Collagenase for Injection汉语拼音：Zhesheyong Jiaoyuanmei本品为胶原酶加适量稳定剂和赋形剂的无菌冻干品。

【性状】本品为白色或类白色的冻干块状物或粉末。

【药理毒理】本品为酶类药。

在生理ph和温度下，具有水解天然胶原蛋白的作用。

从而能溶解椎间盘突出的髓核和纤维环。

【药代动力学】在正常人体内就存在胶原酶，它的代谢途径为一般的蛋白质代谢。

【适应症】用于经保守疗法无效的腰椎间盘突出症。

【用法用量】临用前，用氯化钠注射液2ml溶解，椎间孔内硬膜外或椎间盘内注射一次1200单位。

注射方法：患者侧卧，从脊柱后侧旁进针，在X光电视屏幕透视下，针沿腰椎横突插入L4-L5或L5-S1的椎间孔内硬膜外或椎间盘内注射。

【不良反应】部分患者可有腰痛加剧。

必要时可注射镇痛剂缓解。

【禁忌症】严重心血管病。

严重肝、肾功能不全及孕妇禁用。

已知对本品过敏者禁用。

【注意事项】1、为防止过敏反应，在注射本品前应先静脉注射用50%葡萄糖注射液20ml稀释的地塞米松磷酸钠注射液5mg。

2、本品仅供经过专业培训的医师使用。

注射时，应严密观察准确的注射部位，严禁损伤神经根及周围组织。

【孕妇及哺乳期妇女用药】孕妇禁用。

【儿童用药】尚不明确【老年患者用药】尚不明确【药物相互作用】胶原酶最佳的ph值范围是6-8，或高或低的ph值将降低酶的活性。

酶的活性也受一些清洁剂、重金属离子，如汞和银的影响，它们被用在一些防腐剂中，当怀疑已经接触了这些金属离子时，在使用胶原酶之前应该用生理盐水仔细地反复冲洗。

还应避免含有金属离子和酸性溶液的浸泡，因为这样会带有金属离子，ph值会偏低。

清洁材料如双氧水、达金溶液、生理盐水与胶原酶互溶。

【药物过量】用药过量而没有发生全身或局部反应的现象，在临床调查和临床应用中已被证实。

【规格】（1）600单位（2）1200单位【贮藏】遮光，在冷处（2-10℃）保存。

小鼠Ⅳ型胶原 (Col IV)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0317（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。

本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。

适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col IV浓度。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。

用抗小鼠Col IV抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col IV会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。

依次加入生物素化的抗小鼠Col IV抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。

抗小鼠Col IV抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col IV结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。

加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。

用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col IV浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col IV的浓度。

标本收集:1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。

避免使用溶血，高血脂标本。

3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

胆管癌组织Ⅳ型胶原酶的表达及其在癌浸润和转移中的意义王曙光;彭志明;韩本立【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】1997(19)4【摘要】目的：探讨Ⅳ型胶原酶在胆管癌浸润和转移中的意义，以期了解胆管癌浸润和转移机理。

方法：用免疫组化方法和图像分析系统观察胆管癌原发灶和转移灶标本切片癌细胞Ⅳ型胶原酶的表达。

结果：Ⅳ型胶原酶免疫反应物呈棕色，弥漫性地分布于细胞浆内。

正常胆管及胆囊腺瘤均无阳性反应物存在。

无转移的原发灶切片癌细胞呈弱阳性染色反应，合并转移的原发灶切片和转移灶切片呈强阳性染色。

转移灶及合并转移的原发灶切片免疫反应物平均光密度显著大于无转移的原发灶切片。

结论：Ⅳ型胶原酶是胆管癌浸润和转移过程中参与降解细胞外基质的重要蛋白酶之一，提示未来在抗转移治疗中通过抑制Ⅳ型胶原酶及其它水解酶的活性，有可能获得显著的进展。

【总页数】3页(P329-331)【关键词】胶原酶;胆管肿瘤;肿瘤转移【作者】王曙光;彭志明;韩本立【作者单位】第三军医大学附属西南医院肝胆外科中心【正文语种】中文【中图分类】R735.806【相关文献】1.VEGF-C和VEGF-D在肝内胆管癌组织中的表达与淋巴结转移的关系及临床意义[J], 吴碧川;曾虎;张杰军;朱晋峰2.组蛋白甲基转移酶G9A在肝外胆管癌组织中的蛋白表达及其临床意义 [J], 陈勇军;陈波;王剑明;邹声泉3.尿激酶型纤溶酶原激活物mRNA的表达与食管癌浸润和转移的关系及临床意义[J], 薛月华;谢匡成;葛垒;阮征4.DNA甲基转移酶1基因在人肝外胆管癌组织和细胞中的表达及意义 [J], 左石;邹声泉;孙诚谊5.上皮型钙粘蛋白在胆管癌组织中的表达及意义 [J], 张峰伟;左云芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Collagenasefrom Clostridium histolyticum Product Number C5138 Storage Temperature −0 °CProduct DescriptionCAS Number: 9001-12-1Molecular Weight: This collagenase obtained from the culture filtrate of Clostridium histolyticum. The culture filtrate that is obtained is thought to contain at least7 different proteases ranging in molecular weight from 68-130 kDa.1Many references exist for using collagenase to digest various tissues. The choice of one technique over another is often arbitrary and based more on past experience than on an understanding of why the method works and what modifications could lead to better results. Concentrations typically vary from0.1 to 5 mg/ml, and digestion time is something that should be experimentally monitored using a very gentle agitation system to check for tissue dissociation. Collagenase treatment can cause some cells to die. Satisfactory efficiency of cell dissociation without causing too much cell death typically is achieved from 15 minutes to several hours, but can fall outside of this range if the concentration is unusual. The preferred buffer to use is Krebs Ringer Buffer with calcium and BSA. Zn2+ is required for activity, but it is tightly bound to the collagenase during purification. Additional Zn2+ should not be necessary as long as no chelator is added to the solution during digestion. When this enzyme is tested for suitability for the release of hepatocytes, the collagenase is used at approximately 1 mg/ml in a total volume of 100 ml for each rat liver.If excessive cell death is observed with concentrations previously used, the new lot used might have a higher specific activity. Lowering the enzyme concentration and/or adding BSA or serum (0.5% and 5-10%, respectively) is recommended. These components are added to stabilize the cells to futher digestion by the enzyme. To sterile filter solutions of collagenase, first centrifuge the solution or filter through a 0.8 µm filter to remove insolubles. This will remove particulates and reduce the probability of clogging the 0.2 µm filter during sterile filtration.Radiolabeled gelatin has been used to measure the activity and mechanism of collagenase digestion.2Mandl units have the same description as Sigma collagen digestion units. The conversion factor for Mandl units/Wuensch units to Sigma units is approximately 1000-2000 to 1.Most of the proteases in this preparation may be inhibited by a combination of benzamidine hydrochloride (Product No. B6506) and TLCK (Product No. T7254) without affecting the activity of collagenase. However, there is no guarantee that all the proteases will be inhibited. For general applications, the working concentrations for benzamidine hydrochloride is about 1 mM and TLCK is 0.100-0.135 mM. If a collagenase with no significant protease activity is required, Product No. C0773 is recommended, since this product has been tested for any residual protease activity and found to contain less than 1 unit of neutral protease per mg protein. Precautions and DisclaimerFor Laboratory Use Only. Not for drug, household or other uses.Preparation InstructionsFor enzymatic activity measurement, an enzyme stock solution is prepared by dissolving 0.05 - 0.1 mg/ml collagenase in 50 mM TES buffer, pH 7.4, (37 °C) containing 0.36 mM calcium chloride. Final concentrations in the reaction mixture are 50 mM TES, 0.36 mM calcium chloride, 25 mg collagen (Product No. C9879), and 0.005-0.01 mg collagenase.Storage/StabilitySolutions at neutral pH and with adequate calcium ion (0.3-0.5 mM) will retain activity for at least 5 hours at 37 °C.Solutions at -20 °C are stable for several months.3 References1. Angleton, E.L., et. al., Preparation andreconstitution with divalent metal ions of class Iand class II Clostridium histolyticumapocollagenases. Biochemistry, 27, 7406-7412(1988).2. Mookhtiar, K.A., et al., Properties of radiolabeledtype I, II, and III collagens related to their use assubstrates in collegenase assays. Anal.Biochem., 158, 322-333 (1986).3. Schomburg, D., et al., Enzyme Handbook,(Springer-Verlag Berlin Heidelberg:1991), pp. 1-6.MWM/NSB 5/06Sigma brand products are sold through Sigma-Aldrich, Inc.Sigma-Aldrich, Inc. warrants that its products conform to the information contained in this and other Sigma-Aldrich publications. Purchaser must determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply. Please see reverse side ofthe invoice or packing slip.。

Collagenase,TypeI胶原酶I型使用说明书消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶以及透明质酸酶，透明质酸酶多数情况下与胰蛋白酶或胶原酶联合应用；胰蛋白酶作用较强，容易造成平滑肌细胞损坏；胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶。

胶原酶(Collagenase)从溶组织梭菌（Clostridium histolyticum）提取的一种酶粗提物，也叫梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A），不仅含有胶原酶，还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等。

这些成分分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质。

该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用PBS和含血清的培养液配制，既操作简便又可提高细胞成活率，最终浓度200u/mL，此酶消化作用缓和，无需机械振荡。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。

通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；3）胶原酶III（Type IIICollagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

使用方法1.胶原酶储存液的配制向每管100mg的胶原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成1g/ml（即1000×）的储存液。

人Ⅳ型胶原(Col-IV)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T1μg/L -48μg/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中Ⅳ型胶原(Col-IV)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Ⅳ型胶原(Col-IV)水平。

用纯化的人Ⅳ型胶原(Col-IV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅳ型胶原(Col-IV)，再与HRP标记的Ⅳ型胶原(Col-IV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的Ⅳ型胶原(Col-IV)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Ⅳ型胶原(Col-IV)浓度。

试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。