红水樱桃种子玻璃化超低温保存

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收 稿 日 期 :2018-11-30 基金项目:贵州省自然科学技术基金(黔科合J字[2015]2007号);贵 州 省 高 效 优 秀 科 技 创 新 人 才 支 持 计 划(黔 教 科 合 KY 字 [2013]143 号);贵 阳 市
科技局贵阳学院专项资金资助(GYU-KYZ[2018]02-04);贵阳市财政支持 贵 阳 学 院 学 科 与 硕 士 点 建 设 项 目;贵 州 省 生 态 环 境 中 优 势 农 产 品残留农药降解关键技术研究重点实验室项目资助。 作 者 简 介 :宋 常 美 (1981— ),女 ,贵 州 遵 义 人 ;博 士 ,副 教 授 ,主 要 从 事 植 物 生 物 技 术 研 究 ;E-mail:gzgyscm@。
T1=(100-W )/100; T2=[W 2-W 1·(1-T1)]/W2。 1.2.2 实验设计 本实验分别 探 讨 了 种 子 不 同 含 水 量 [25%、30%、 35% 及 45% (T 1)]、不 同 装 载 时 间 [0、20、40 及 60 min]、不同玻璃化时间[0、30、60 及 90min]及 去 留 种 壳 对 超 低 温 保 存 的 影 响 (表 1)。 含水 量 实 验:将 带 种 壳 种 子 于 4 ℃ 经 60%PVS2 (PVS2:0.15mol/L 蔗 糖=60∶40)装 载 20min,然 后 室 温下经 PVS2(30% 甘 油 +15% 乙 二 醇 +15%DMSO+ 0.4mol/L 蔗 糖)玻 璃 化 60min,更 换 PVS2 后 立 即 投 入液氮。 装载时 间 实 验:将 含 水 量 30% 的 带 种 壳 种 子 于 4℃经60%PVS2 处 理 相 应 时 间,然 后 室 温 下 经 PVS2 玻璃化60min,更换 PVS2 后立即投入液氮。 玻璃化时间实验:将含水 量 30% 的 带 种 壳 种 子 于 4℃经60%PVS2 装载20min,然后室温下经 PVS2 处 理相应时间,更 换 PVS2 后 立 即 投 入 液 氮。 装 载 和 玻 璃 化 处 理 时 设 置2个 对 照 ,探 讨 冰 冻 保 护 剂 对 种 子 的
1 材料与方法
1.1 材 料 红水樱 桃 种 子 于 2015 年 4 月 下 旬 采 自 贵 州 安 顺
镇 宁 县 ,去 果 肉 晾 干 后 置 于 4 ℃ 冰 箱 保 存 4 个 月 备 用 。 1.2 方 法 1.2.1 种子含水量测定
绝对含水量(T1):将100g种子置于 105 ℃ 恒温 干燥箱中快速干燥至恒重 W ;相对含水量(T 2):将 一 定重 量 种 子 (W 1)置 于 30 ℃ 恒 温 干 燥 箱 中 干 燥 至 一 定重量(W 2)。
常见的种质资源 保 存 为 离 体 保 存,常 规 的 离 体 保 存有体细胞无性系变 异 情 况,而 超 低 温 保 存 是 将 材 料 储存在液氮中保 存 数 百 年 甚 至 更 长 时 间[1],是 目 前 唯 一可行的长期保 存 方 式[2],至 今 已 有 许 多 关 于 种 子 超 低温保存的报道。蓝药花[1]、黑杨[3]、玉簪 和 [4] 中 国 红 豆杉 等 [5] 均已获 得 成 功。 樱 桃 种 子 超 低 温 保 存 方 面, Chmielarz等 对 [6] 欧洲野樱桃进行了超低温保存,而中 国樱桃在此方面却 未 见 报 道。 众 所 周 知,同 一 植 物 品 种 不 同 离 体 保 存 条 件 亦 有 差 异 ,因 此 ,考 虑 红 水 樱 桃 市 场价值较大和适应性 强 的 特 点,对 其 种 子 进 行 超 低 温 保存实验,以期为育 种、砧 木 繁 殖 等 提 供 物 质 保 障,同 时对中国樱桃种质资源长期保存提供方法参考。
种 子 (Seed)
第38卷 第4期 2019年4月 Vol.38 No.4 Apr. 2019
红水樱桃种子玻璃化超低温保存
宋常美1, 文晓鹏2, 李庆宏3 (1.贵阳学院生物与环境工程学院, 贵阳 550003; 2.贵州大学农业生物工程重点实验室, 贵阳 550025;
3.贵阳市农业试验中心, 贵州 贵阳 550003)
4℃下处理20min为 宜;玻 璃 化 以 PVS2 室 温 下 处 理 60min为
宜 ;种 壳 决 定 保 存 效 果 ,带 种 壳 可 获 得 100% 成 活 率 ,而 去 种 壳 后
几乎不萌发,污 染 严 重。种 子 成 活 率 检 测 用 离 体 萌 发 法,经 43
℃水浴3min解 冻 后 接 种 到 1/2MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L
CryopreservationofSeedofPrunuspseudocerasu L.‘Hongshui’byVitrification
SONG Changmei1,WEN Xiaopeng2,LIQinghong3
摘 要:从含水量、装载时间、玻璃化时 间 和 种 壳 4 方 面 探 究 红
水樱桃(Prunuspseudocerasu L.Hongshui)种子玻 璃 化 超 低 温 保存。结 果 显 示,含 水 量 以 30% 为 好;装 载 以 60% PVS2 在
IBA+2.0mg/LGA+3.0% 蔗 糖 +0.7% 琼 脂 粉 培 养 基 上 。
关键词: 红水樱桃;种子;玻璃化;超低温保存
DOI编码: 10.16590/ki.1001-4705.2019.04.156
中图分类号: S662.5
2019)04-0156-03
红水樱桃 (Prunuspseudocerasu L.‘Hongshui’) 是贵州省安顺市镇宁 县 主 栽 中 国 樱 桃 品 种 之 一,在 当 地 具 有 很 强 的 适 应 性 ,市 场 销 量 大 ,具 有 一 定 的 经 济 价 值。有关红水樱桃的 研 究 较 少,尤 其 是 种 质 资 源 长 期 保 存 方 面 ,至 今 未 见 报 道 。