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基于铁死亡和自噬研究酒精的致肝脏细胞损伤作用*祝子鹤1， 张茜茜2，3，4， 张骞骞3，4， 刘立新2，3，4△， 徐钧4，5△（1山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，山西 太原 030001；2山西医科大学第一医院消化内科，山西 太原 030001；3山西医科大学第一医院科研实验中心，山西 太原 030001；4肝损伤与消化道肿瘤防治委级重点实验室，山西 太原 030001；5山西医科大学第一医院肝胆胰外科，山西 太原 030001）［摘要］ 目的：探索不同浓度酒精作用不同时间对肝细胞、肝星状细胞和肝母细胞瘤细胞铁死亡和自噬的作用及机制。
方法：采用不同浓度（0~800 mmol/L ）酒精处理AML12小鼠肝细胞株24、48和72 h ，处理JS -1小鼠肝星状细胞株和HepG2人肝母细胞瘤细胞株24和48 h ；CCK -8法检测细胞活力；油红O 染色检测细胞脂质沉积；乳酸脱氢酶（LDH ）释放测定细胞损伤水平；Western blot 检测细胞活化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA ），细胞因子转化生长因子β1（TGF -β1），胶原沉积相关蛋白I 型胶原（Col I ），铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和铁蛋白重链1（FTH1），以及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白水平。
结果：（1）酒精抑制AML12细胞活力与时间的延长和浓度的升高相关，脂质沉积呈浓度和时间依赖性增加（P <0.05），酒精作用24 h 后LDH 释放显著增多（P <0.01），FTH1和SLC7A11蛋白表达在24 h 显著下调（P <0.01），LC3-II/LC3-I 比值随时间延长而升高（P <0.01）。
（2）50、100和150 mmol/L 酒精处理24 h 后JS -1细胞活力增强，而酒精处理48 h 后细胞活力则受到显著抑制；50和100 mmol/L 酒精处理JS -1细胞24和48 h 后TGF -β1、α-SMA 和SLC7A11蛋白表达均显著上调（P <0.05），各浓度酒精处理后Col I 蛋白表达均显著上调（P <0.01），GPX4和FTH1表达及LC3-II/LC3-I 比值随时间延长而降低（P <0.01）。
肝纤维化动物模型造模方法的研究进展I. 综述肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其病理特征为肝实质中大量纤维组织增生，导致肝脏功能受损。
肝纤维化的发生和发展受到多种因素的影响，如病毒感染、药物毒性、酒精性肝病等。
因此建立有效的动物模型对于研究肝纤维化的发病机制和治疗方法具有重要意义。
本文将对近年来关于肝纤维化动物模型造模方法的研究进展进行综述。
在构建肝纤维化动物模型时，首先需要选择合适的动物种类。
常用的动物模型包括CRISPRCas9基因敲除小鼠、自发性肝纤维化大鼠、四氯化碳(CCl诱导的肝纤维化大鼠等。
其中CRISPRCas9基因敲除小鼠是目前最为理想的肝纤维化动物模型之一，因为它可以精确地靶向特定基因进行敲除，从而有效地模拟人类肝纤维化的病理过程。
目前主要采用CRISPRCas9技术进行基因敲除。
通过构建特定的sgRNA序列，可以特异性地靶向目标基因，实现对其表达水平的抑制。
这种方法的优点是操作简便、高效，且可以精确地控制基因敲除的范围和程度。
然而CRISPRCas9技术仍存在一定的局限性，如可能导致非特异性敲除、影响其他基因的表达等。
因此未来还需要进一步优化该技术，以提高其在肝纤维化动物模型构建中的应用效果。
另一种常用的肝纤维化动物模型构建方法是通过化学物质的直接或间接作用诱导肝纤维化。
常用的化学物质包括四氯化碳(CCl、二甲基亚硝胺(DMN)、苯并芘等。
这些化学物质可以通过不同途径进入肝脏，引起肝细胞损伤和坏死，进而导致肝纤维化的发生。
然而这种方法存在一定的毒副作用，如长期暴露于高浓度的CCl4可能会导致肝癌的发生。
因此在使用化学物质诱导法构建动物模型时，需要严格控制剂量和时间，以降低实验风险。
A. 肝纤维化的定义和重要性肝纤维化是一种严重的肝脏疾病，其特征是正常肝细胞被大量的胶原纤维所替代，导致肝脏结构和功能的严重改变。
这种病变过程被称为纤维化，最终可能导致肝硬化，甚至肝癌。
因此对肝纤维化的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。
56学术硏讨CHINA RURAL HEALTH贝那普利对肝纤维化小鼠肝组织N0X4及Angll表达的影响程少波’王翠萍2（1.中国重型汽车集团有限公司医院山东济南250031）（2.山东省济宁市泗水县柘沟镇计划生育服务站山东济宁273214）【摘要】目的：为了探究肝病的治疗方式，采取在肝纤维化的小鼠身上进行相关的研究，主要通过研究贝那普利对肝纤维化小鼠肝组织N0X4及Ang II表达方式，进一步探索贝那普利可能的抗纤维化机制。
方法：选择身体状况良好，且不具备其他疾病的小鼠共计22只，通过随机的方法将其分为3组，其中正常对照组有6只小鼠，正常饲养；模型组有8只小鼠，制备16%的四氯化碳进行诱导的小鼠肝纤维化模型；贝那普利治疗组有8只小鼠，在给予四氯化碳诱导的同时还必须要进行贝那普利灌胃。
结果：模型组的小鼠相对于正常对照组的小鼠来说，其NOX4mRNA表达有明显的升高。
治疗组肝匀浆Ang II浓度较模型组有所下降，而且治疗组肝组织NOX4mRNA的表达较模型组也出现了明显的下降（P<0.05）o结论：贝那普利对肝纤维化小鼠具有一定的治疗作用，能够通过Angl I的表达来抑制其他可能会出现的不良反应，对治疗肝纤维等肝部疾病来说具有重要的意义。
【关键词】贝那普利；肝纤维化；四氯化碳由于现代人的生活质量变得越来越好，饮食种类愈加丰富，但是这样造成了很多亚健康疾病的出现，尤其是对于肝脏的损坏是极其重要的。
所谓的肝纤维化主要是由于各种各样的病因才会引起慢性反复肝损伤后的反应，主要的表现形式则是在肝脏细胞外基质（ECM）的弥漫性过度沉积。
通过对相关的临床试验和案例进行研究，能够清楚地发现在肝脏內部存在着完整的局部肾素-血管紧张素系统，也就是常说的RAS系统，由于血管紧张素会转换出大量的经典轴，这些经典轴中最为有效的效应因子就是Ang Do AngH存在于体内长时间将使会有效地刺激肝星状细胞（HSC）进行迅速的增值与活化，使得大量的炎症因子和粗纤维化因子衍生出来，造成了肝部的纤维化程度严重。
水飞蓟素抑制单核细胞来源的巨噬细胞肝脏浸润抗小鼠肝纤维化作用研究背景肝纤维化是由多种慢性肝病引起的肝脏炎症和修复失调所导致的,如病毒感染、毒物损伤、代谢紊乱和酒精滥用等,其特征是细胞外基质(extracellular matrix.ECM)过度沉积。
肝脏中的纤维沉积,尤其是I型胶原,可以保护肝细胞免受各种毒性刺激。
然而,过度的纤维沉积和调节失调会导致肝脏结构破坏、肝功能衰竭和肝硬化。
到目前为止,临床上还没有有效的治疗肝纤维化的药物。
为寻找更好的治疗靶点,近年来对肝纤维化的病理生理机制进行了深入研究。
大量的研究表明,固有免疫,特别是巨噬细胞在肝纤维化中起着关键作用。
肝巨噬细胞可通过多种途径促进肝纤维化,如释放促炎症因子,如肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6,诱导肝细胞坏死,促纤维化细胞因子,如转化生长因子(TGF)-β1直接激活肝星状细胞(HSC)。
肝脏中巨噬细胞的来源主要有两种:一种是来源于胚胎祖细胞的存活时间长、自我更新的常驻库弗细胞(KF)。
在稳定状态下,肝脏中巨噬细胞数量的平衡主要依赖于KFs细胞的自我更新和增殖。
另一种是在病理状态下从骨髓和外周血中迁移而来的单核细胞。
肝脏损伤后,外周血中的单核细胞大量趋化进入肝脏,并被活化成为巨噬细胞,释放促炎症因子和促纤维化因子,加剧了肝损伤和纤维化。
这些发现表明抑制单核细胞浸润可能是治疗肝纤维化的一个新靶点。
进一步的研究发现,单核细胞主要根据细胞表面分子Ly6C分为两大亚群:经典单核细胞(Ly6Chi单核细胞)和非经典单核细胞(Ly6C]o单核细胞)。
经典的单核细胞表达高水平的CCR2和Ly6C,并表达低水平的CX3CR1,具有促炎症和促纤维化作用。
而非经典的单核细胞表达高水平的CX3CR1和低水平的CCR2和Ly6C,具有抗炎和抗纤维化作用。
Ly6Chi单核细胞高表达的CCR2受体可与急慢性肝病时升高的趋化蛋白1(MCP-1)结合,导致Ly6Chi单核细胞向肝脏的趋化。
肝星状细胞与肝纤维化唐桂连【摘要】肝纤维化是各种慢性肝病共有的病理改变,逆转肝纤维化可阻止大多数慢性肝病进展.肝星状细胞(HSC)是肝内一种具有多功能、变化不定的非实质细胞,HSC活化是肝纤维化发生的中心环节.阐明其关系,有助于以HSC为靶点的肝纤维化方面的研究.【期刊名称】《国际消化病杂志》【年(卷),期】2012(032)005【总页数】4页(P270-273)【关键词】肝星状细胞;活化;肝纤维化【作者】唐桂连【作者单位】524008,广东海洋大学医院【正文语种】中文肝纤维化是肝脏对慢性损伤的修复反应，是各种慢性肝病共有的病理改变，以胶原等细胞外基质(ECM)在肝脏过度沉积为特征，属可逆病变。
晚期肝纤维化可导致肝硬化、门脉高压和肝功能衰竭[1]。
研究证实，HSC是ECM的主要来源，HSC激活并转化为肌成纤维细胞样细胞是肝纤维化(HF)发生、发展的核心环节。
各种致纤维化因素均把HSC作为最终靶细胞，通过使其转化为肌成纤维细胞这一共同复杂的网络系统，参与HF的发生及进展[2]。
现就HSC与HF的关系作一综述。
1 肝纤维化的发生与逆转肝纤维化的发生与逆转主要是ECM的产生、堆积及降解的过程。
在正常的肝脏中存在一层薄的、低密度的基底膜，在肝纤维化的发生过程中，一系列的酶，包括锌依赖的基质金属蛋白酶(MMP)与其抑制因子(TIMP)和一些逆转酶发生数量及功能的改变，导致ECM的数量及构成发生变化，正常的降解过程受到抑制，最终导致过多的不溶性基质堆积在肝脏中，引起肝脏发生结构的改变，并引起相应的功能异常，在失去肝脏自身代偿的情况下，形成肝纤维化甚至肝硬化。
HSC是肝损伤时生成细胞外基质的主要细胞来源，在20世纪80年代作为产生细胞外基质的主细胞并命名。
在四氯化碳(CCl4)、铁负荷及胆道阻塞诱导的肝纤维化模型中都得到了相似的证据，即HSC作为产生ECM的主要细胞在肝纤维化发生、发展中的机制中发挥了重要作用。
第４１卷第２期解剖学报Ｖ０１．４１，Ｎｏ．２２０１０年４月ＡＣＴＡＡＮＡＴＯＭＩＣＡＳＩＮＩＣＡＡｐｒ．２０１０‘３２３・肝星形细胞的研究进展张永晶１’２徐存拴１’２‘＜１．河南师范大学生命科学学院；２．河南省．科技部共建细胞分化调控国家重点实验室培育基地，河南新乡４５３００７）【摘要】肝星形细胞（ＨＳＣｓ）是肝脏中具有储存脂质特别是维生素Ａ、合成细胞外基质、调节肝窦微循环等功能的非肝实质细胞，它们与多种肝脏疾病，特别是肝纤维化密切相关。
我们简要总结了近几年有关肝星形细胞的分离、鉴定、增殖及增殖调控、在肝再生、肝病等中作用的研究进展。
［关键词］肝星形细胞；肝再生；肝纤维化；细胞分离鉴定［中图分类号】Ｑ２８［文献标志码］Ａ［ＤＯＩ】１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５２９－１３５６．２０１０．０２．０３２ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓＺＨＡＮＧＹｏｎｇ－ｊｉｎ９１ｆ－．ＸＵＣｕｎ．ｓｈｕａｎｌ・２乖（１．Ｃｏｌｌｅｇｅｏｆ啦Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｈｅ’ｎａＲＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＣｅｌｌＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎＲｅｇｕｌａｔＨｎ，Ｈｅ’ＲａＵ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００７，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＨｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅＨｓ（ＨＳＣｓ）ａｒｅａｇｒｏｕｐｏｆｎｏｎｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌｃｅＨｓｏｆｌｉｖｅｒ，ａｎｄｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｌｉｐｉｄ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｖｉｔａｍｉｎＡ—ｓｔｏｒｉｎｇ，ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｍｉｃｒｏｅｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｃｓｉｎｕｓｏｉｄ，ｅｒｅ．Ｔｈｅｙａｒｅａｌｓｏｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｌｏｔｓｏｆｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅｓ，ｅ．ｇ．ｈｅｐａｔｏｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｉｎｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗ，ｔｈｅｌａｔｅｓｔｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｏｎＨＳＣｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｉｒｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｒｏｌｅｉｎｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｈｅｐａｔｏｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｄＳＯｏｎｉｓｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｈｅｐａｔｉｃｓｌｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ；Ｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｉｏｎ；Ｈｅｐａｔｏｆｉｂｒｏｓｉｓ；Ｃｅｌｌｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ肝星形细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓ，ＨＳＣｓ）又称为Ｉｔｏ细胞（Ｉｔｏｃｅｌｌｓ）、储维生素Ａ细胞（ｖｉｔａｍｉｎＡ・ｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌｌｓ）、储脂细胞（ｆａｔ—ｓｔｏｒｉｎｇｃｅｉｌｓ）、窦周脂肪细胞（ｐｅｒｉｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｌｉｐｏｃｙｔｅｓ）、肝脏特异性周皮细胞（１ｉｖｅｒ．ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｅｒｉｃｙｔｅｓ）等，是肝脏的非实质细胞之一，有重要的生理功能。
Kupffer细胞极化和肝星状细胞活化在NAFLD相关炎症和纤维化中的作用王祺;吴惠敏;倪茜茜;华静【摘要】Background:Kupffer cells and hepatic stellate cells(HSC)play important roles in the initiation and progression of hepatic inflammation and fibrosis in chronic liver injury. Aims:To investigate the roles of Kupffer cell polarization and HSC activation in the development of hepatic inflammation and fibrosis in progression of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods:C57BL/6 mice were fed with high fat(HF)diet and methionine-choline-deficient(MCD)diet to induce experimental non-alcoholic fatty liver(NAFL)and non-alcoholicsteatohepatitis(NASH),respectively. Liver steatosis,inflammation and fibrosis were determined by histopathological examination through HE staining and Masson staining. Kupffer cell phenotypes and HSC activation were assessed by immunohistochemistry. Expressions of PPAR-γ as well as inflammation-and fibrosis-related genes were measured by real-time PCR. Results:F4/80-positive Kupffer cells, CD11c-positive M1 polarized macrophage s and α-SMA-positive HSC were significantly increased in liver tissue of mice with HF diet-induced NAFL and MCD diet-inducedNASH(P<0.05),and was more apparent in MCD diet-induced NASH(P<0.05). Expressions of TNF-α and TGF-β1 mRNA in liver tissue weresig nificantly increased in both groups(P<0.05),whereas expressions of α-SMA and Col1 mRNA were significantly increased only in NASH(P<0.05).Hepatic PPAR-γ mRNA expression was significantly increased inNAFL(P<0.05)but significantly decreased in NASH(P<0.05). Conclusions:Hepatic Kupffer cells exists a sustained M1 polarization in the development of NAFLD. Activation of HSC appears in the early stage of NAFLD,and accelerates in the progression of NAFL to NASH. Polarization of Kupffer cells and activation of HSC initiate and promote hepatic inflammation and fibrosis in NAFLD.%背景:Kupffer细胞和肝星状细胞(HSC)在慢性肝损伤炎症和纤维化的始动和持续过程中发挥重要作用.目的:研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)进展中Kupffer细胞极化和HSC活化对肝内炎症-纤维化发展的影响.方法:分别以高脂(HF)饮食和蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝(NAFL)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型.HE染色和Masson染色评估肝脏组织病理学改变,免疫组化染色检测Kupffer细胞表型和HSC活化状态,real-time PCR检测炎症、纤维化相关基因和PPAR-γ表达.结果:HF和MCD 饮食诱导的小鼠NAFL和NASH模型肝内F4/80阳性Kupffer细胞、CD11c阳性M1型巨噬细胞和α-SMA阳性HSC均较对照组明显增加(P<0.05),MCD组增加更为显著(P<0.05).NAFL和NASH时肝内TNF-α、TGF-β1 mRNA表达均显著增高(P<0.05),α-SMA、Col1 mRNA表达仅在NASH时显著增高(P<0.05).肝内PPAR-γ mRNA表达在NAFL时显著增高(P<0.05),在NASH时则显著降低(P<0.05).结论:在NAFLD进展过程中,肝内Kupffer细胞呈现持续的M1型极化,HSC在疾病早期已出现活化并随疾病由NAFL向NASH进展而加剧.Kupffer细胞极化和HSC活化促进了NAFLD中肝脏炎症-纤维化的启动和进展.【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2018(023)003【总页数】6页(P137-142)【关键词】非酒精性脂肪性肝病;Kupffer细胞;肝星状细胞;炎症;纤维化;过氧化物酶体增殖物激活受体γ【作者】王祺;吴惠敏;倪茜茜;华静【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海市消化疾病研究所200001;上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海市消化疾病研究所200001;上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海市消化疾病研究所200001;上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海市消化疾病研究所200001【正文语种】中文非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一种除外乙醇和其他明确因素所致的以肝脏异常脂质沉积为主要特征的临床病理综合征，是与胰岛素抵抗、2型糖尿病、肥胖等密切相关的代谢性肝损伤[1]。
Materials and MethodsMouse ModelsAll animal work was carried out under procedural andethical guidelines of the British Home Office. To determinethe contribution of the BM to hepatic stellate cells and myo- fibroblasts during the development of cirrhosis, we performedsex mismatched BM transplantations from male donor miceinto female recipients; 6-week-old female Balb/c mice received lethal irradiation (8 Gy in a divided dose 4 hours apart) and whole BM transplants from 6-week-old male donors. Miceimmediately received a tail vein injection of BM; unless stated, this was 1 _ 106 whole BM cells isolated from flushing thefemur, tibia, and pelvis of male donor mice with a 29-gaugeneedle containing phosphate-buffered saline (PBS)/2% fetalcalf serum (FCS). Mice were placed on acidified water, and, 4 weeks later, mice received intraperitoneal (IP) injections of 1_L per gram body weight of a CCl4/olive oil mixture (1:7ratio, Sigma-Aldrich, Gillingham, United Kingdom) every 5days. Groups of mice (n _ 4 unless stated) were killed atintervals from 0 to 12 weeks of CCl4, always at 72 hoursfollowing the last injection.To determine whether BM-derived stellate cells and myo-fibroblasts were a stable cell population after the recovery of liver injury, BM transplanted mice that had received 8 weeksof CCl4 were allowed to recover for 8 weeks prior to tissue analysis. A second model of liver damage was also used: female Balb/c mice received male BM transplants as before; 4 weekslater, TAA (Sigma, T-8531) was administered IP at 200mg/kg body weight (diluted in distilled water) 3 times eachweek for 4 weeks. Mice receiving TAA (n _ 8) and controls(no damage, n _ 4) were killed, and tissue was harvested 3days after the final dose of TAA.Cells of BM origin were tracked in liver sections throughthe use of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the Y chromosome. In addition, to confirm the FISH analysis intissue, male and female control mice and a number of mice thathad received BM transplants and 8 weeks of CCl4 had stellatecells isolated from their livers, using collagenase and pronase digestion followed by density centrifugation.25 FISH was performed on the isolated stellate cells.To assess whether the BM-derived hepatic myofibroblastswere capable of intrahepatic collagen transcription, 6-week-old female C57/B6 mice (after 10 Gy irradiation in a divided dose4 hours apart) underwent transplantation with whole BM from6-week-old male Col1a2 mice that express the _-galactosidase (_-gal) reporter gene under control of the _2(I) collagen gene enhancer, giving a direct assay of transcriptional activity for collagen type I.26 This mouse model activates the transgene following CCl4 injury.27 Control mice received BMtransplants from C57/B6 mice; all mice received 12 weeks of CCl4.To analyze whether BM-derived myofibroblasts can determinethe fibrotic phenotype in liver injury, C57/B6 micereceived BM transplants from Col 1a1rr mice (n _ 4). Thesemice have mutated collagen, which is collagenase resistant, and, when their livers are injured by CCl4, the mice develop extensive pericellular fibrosis.28 Control mice received BM transplants from C57/B6 mice (n _ 4); all mice received 8 weeks of CCl4 and were killed 1 week following the final injection.To determine whether the hepatic myofibroblasts were ofMSC or hematopoietic stem cell (HSC) origin, 6-week-oldfemale Balb/c mice were lethally irradiated and received BM from donor mice as follows: Group 1 received injections of 1.2 _ 106 enriched female MSCs and 2.3 _ 105 enriched maleHSCs (n _ 3). Group 2 received injections of 1.2 _ 106enriched male MSCs and 2.3 _ 105 enriched female HSCs (n_ 3). All mice received 6 weeks of CCl4. The contribution of each BM stem cell fraction to hepatic myofibroblast populations was assessed by performing immunohistochemistry for_-smooth muscle actin (_-SMA) together with FISH for the Y chromosome.材料与方法小鼠模型所有动物进行训练工作，根据程序和道德准则的英国家庭办公。
小鼠肝星状细胞说明书
一．产品简介
1、产品名称：小鼠肝星状细胞
2、组织来源：小鼠肝脏
3、产品规格：5×105细胞/T25cm2培养瓶
4、细胞简介：
肝星状细胞具有静止期和活化期两种状态。
正常情况下肝星状细胞处于静止状态，当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，肝星状细胞被激活，其表型由静止型转变为激活型。
肝星状细胞是细胞外基质的主要来源，静止期肝星状细胞激活并转化为肌成纤维细胞样细胞，各种致纤维化因素均把肝星状细胞作为最终靶细胞。
肝星状细胞参与了肝脏的纤维化、炎症产生和免疫紊乱等大多数病理生理过程。
本公司生产的小鼠肝星状细胞采用体外多步灌注和密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×
105/T25方瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基信息：
我们推荐使用无锡欣润生物研制的小鼠肝星状细胞专用完全培养液（产品编号：KM5002-6）作为体外培养小鼠肝星状细胞的培养基。
二．使用方法
您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养并完成后续实验。
三．注意事项
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月；
2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作；
3、由于原代小鼠肝星状细胞在体外增殖能力有限，不建议传代培养
4、该细胞只可用于科研；。
