细胞生物学实验六 小鼠肝细胞线粒体的超活染色 山东大学实验报告

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察-实验报告姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验题目】小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1、掌握线粒体的超活染色原理及方法。

2、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。

【实验材料与用品】1. 试剂：0.02%的詹纳绿B染液、Ringer试剂2. 器具：解剖盘、镊子、剪刀、双凹片、小烧杯、载玻片、盖玻片、胶头滴管、显微镜等3. 材料：小鼠【实验原理】I.线粒体线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包裹的细胞器，直径在0.5-10微米左右；线粒体是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的主要场所，为细胞的活动提供了能量，有“细胞动力工厂”之称。

线粒体在代谢活动旺盛的细胞，如肌肉细胞，肝细胞，神经细胞等中大量存在；线粒体的数量差异巨大，如在肝脏细胞中有1000-2000个线粒体，而有些细胞只有一个线粒体，如酵母菌细胞的大型分支线粒体，大多数哺乳动物成熟红细胞不具有线粒体。

线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基端，在精子中分布在鞭毛中区。

姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察II.超活染色实验原理超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法；超活染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡。

应用活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。

活体染色根据染色剂的性质和染色方法不同分为：体内活染（注入、固定、堆积）、体外活染（分离、浸染、固定）1）体内活染：是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的作用。

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察
实验目的：1、掌握线粒体活体染色技术
2、观察和了解活细胞内线粒体的形态、结构与分布特点
实验材料：小鼠、解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯、双凹片、载玻片、盖玻片、胶头滴管、詹纳斯绿B溶液、Ringer溶液
实验原理：詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。

这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保
持氧化状态（即有色状态——蓝绿色）；而线粒体周围的细胞质中，
这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）
实验步骤：1、断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝组织。

选取边缘较薄的肝组织0.5cm³，放入小烧杯中，用Ringer溶液冲洗
去血污
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再
将肝组织块移入染液中，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上
面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易
被染色。

当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染20~30min）
3、吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加
Ringer溶液0.5ml，用剪刀充分剪碎制悬液。

4、去上述细胞悬液滴片加盖玻片，高倍镜下观察
实验结果：肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色
分析与讨论：视野中除肝细胞外还有很多红细胞，红细胞比肝细胞小，且没被染上蓝绿色。

线粒体活染色实验报告实验目的通过活染色技术观察和研究线粒体在细胞中的形态结构、数量和分布情况，进一步了解线粒体在细胞生物学过程中的功能和作用。

实验原理活染色是一种通过活体显微镜观察染色物在细胞中的分布和变化情况。

线粒体是细胞中重要的能量产生器，通过染色可以更直观地观察和研究线粒体的特征和状态。

本实验使用的线粒体活染色试剂为Mitotracker，它是一种荧光染料，可选择性地标记线粒体。

Mitotracker可以通过细胞膜进入细胞内，随着线粒体的活动而移动，通过检测荧光信号的分布和强度，可以直接观察线粒体在细胞中的运动和分布情况。

实验步骤1. 培养细胞：选择合适的细胞系，将其培养在含有适宜培养液的培养皿中，使细胞处于良好的生长状态。

2. 处理细胞：将培养好的细胞分为两组，一组为实验组，一组为对照组。

实验组细胞加入适量的Mitotracker活染试剂，对照组细胞不添加Mitotracker。

3. 孵育：将培养皿放入恒温培养箱中，以37C恒温孵育2小时，使Mitotracker 能充分进入细胞内，与线粒体结合。

4. 观察：将培养皿取出，用荧光显微镜观察细胞的荧光信号分布，并拍摄图像进行记录。

5. 分析：对实验组和对照组的观察结果进行比较分析，观察线粒体的数量、形态结构和分布情况变化。

实验结果通过荧光显微镜观察，我们发现实验组细胞中线粒体呈现出强烈的红色荧光信号，分布均匀且较为集中。

而对照组细胞中，没有观察到红色荧光信号，线粒体无特别明显的分布。

实验讨论1. 通过荧光显微镜观察线粒体荧光信号的数量、分布和形态结构变化，我们可以初步推测线粒体的活动程度和数量是否发生变化。

2. 通过与对照组细胞的比较，我们可以更准确地判断线粒体的特征和状态是否发生了变化。

3. 本实验结果表明，线粒体活染色技术可以用于研究线粒体在细胞功能和生物学过程中的作用和功能。

实验总结线粒体活染色技术是一种快速、准确的观察线粒体形态和特征的方法。

细胞生物学实验报告题目：小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察姓名：刘恋学号：201000140049 系年级：10级生科2班一、【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。

2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。

二、【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。

2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。

活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。

碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。

但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。

一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。

【实验目的】掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。

【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿 B（ Janus green B）和中性红（ neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

【实验用品】1、材料：小白鼠肝脏、睾丸2、试剂：Ringer 溶液： NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl 2 0.03g + 蒸馏水 100ml；1%、1/5000 詹纳斯绿 B 溶液：称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml Ringer 溶液中， 30-40 ℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为 1%原液。

科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】1．掌握线粒体的超活染色原理及方法。

2．观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。

【实验原理】1．线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。

2．活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。

活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。

碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。

但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。

一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。

实验五：小鼠肝细胞线粒体超活染色及观察一、实验目的1、掌握解剖小鼠的基本技术与方法；2、掌握线粒体的超活染色原理及方法；3、观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量与分布。

二、实验原理1、线粒体线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。

细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。

活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。

詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。

线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

不同细胞中线粒体的形态和数目不同。

在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。

线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。

线粒体的细胞色素氧化酶能使詹纳新绿染料始终保持在氧化状态而呈蓝色，周围细胞内的染料却被还原成无色的色基，在进行细胞的体外染色时，至少要使材料在詹纳斯绿染料中染色15min后再盖上盖玻片，以使材料充分氧化。

2、活体染色活体染色是指用燃料标记生活有机体的细胞或组织但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示活细胞内的某些结构，同时即不影响细胞的生命活动也不会产生任何物理、化学变化导致细胞的死亡。

活染技术可用来研宄生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起作用。

碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子；而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们被此就发生了吸引作用。

但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料配成稀的溶液来使用。

一般以碱性染料最为常用，因为碱性染料具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，如中性红、詹钠斯绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等。

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验报告精编实验目的：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的形态、数量和功能，以进一步了解线粒体在细胞代谢中的作用。

实验材料：实验步骤：1.提取小白鼠肝细胞：a.将小白鼠宰杀，取出肝脏。

b.肝脏放入含有适量预冷PBS的离心管中，进行冲洗，去除血液。

c.肝脏切成细胞块，加入适量的胰蛋白酶，37℃消化2小时。

d.消化结束后，加入适量的DMEM培养基，通过滤网过筛，得到小白鼠肝细胞悬液。

2.超活染色：a.取适量的小白鼠肝细胞悬液，离心收集细胞沉淀。

b.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除细胞培养基。

c.加入超活染色试剂盒中的线粒体荧光探针，荧光增强剂混合液，混匀，孵育30分钟。

d.用预冷PBS洗涤细胞沉淀，去除多余试剂。

3.观察实验：a.将上述细胞沉淀均匀涂抹在显微镜载片上。

b.覆盖显微镜盖玻片，用封口胶固定。

c.将载片放入显微镜镜台上，使用适当放大倍数的镜头观察。

实验结果：通过超活染色技术观察小白鼠肝细胞线粒体的结果如下：1.形态观察：线粒体呈现椭圆形或长圆形，大小约为1-2微米，分布于细胞质中。

2.数量观察：通过观察细胞中的线粒体数量，可以初步了解细胞的代谢活跃程度。

代谢活跃的细胞通常线粒体数量较多，而代谢不活跃的细胞线粒体数量较少。

3.功能观察：通过观察线粒体荧光的亮度和分布情况，可以初步判断线粒体的功能状态。

荧光亮度较高且均匀分布的细胞表明线粒体功能正常，而荧光亮度较低或不均匀分布的细胞则可能存在线粒体功能缺陷。

实验结论：通过上述实验可以初步了解小白鼠肝细胞中线粒体的形态、数量和功能。

进一步的研究可通过比较不同疾病模型下线粒体的状态来探究线粒体在疾病发生发展中的作用，为研究疾病的治疗和预防提供理论基础。

此外，超活染色技术的应用也有助于深入了解线粒体在细胞代谢中的具体机制。

线粒体和液泡系的超活染色与观察实验报告实验目的：
1. 了解超活染色的原理；
2. 掌握超活染色的方法；
3. 观察线粒体和液泡系的结构特点；
4. 学习常用的显微镜操作技巧。

实验步骤：
1. 取一份新鲜叶片，用透明胶带轻轻压住叶片，将透明胶带带上的叶片剥离下来。

2. 将剥离下的叶片放在载玻片上，加一滴超活染色溶液，并用盖玻片盖住。

3. 用粗目显微镜观察叶片上染色体的变化情况，观察细胞器的数量和形态特征，用细目显微镜进行进一步观察和记录。

实验结果：
经过超活染色处理后，我们可以清晰地观察到叶片细胞的结构特点。

其中，线粒体是细胞内重要的细胞器之一，其形态大小各异，常常呈圆柱状，且有许多线粒体。

而液泡是细胞内的囊状体，它可以储存水分、营养物质、色素等，体积大小不一，可见度较低，需要用高倍显微镜进行观察。

实验分析：
超活染色是一种能够使细胞有机物分解的过程中的酶不会破坏细胞结构和细胞器的染色方法。

该方法对细胞膜和细胞器的染色效果非常好，有助于观察和研究细胞的生理和功能，尤其是在细胞形态变化研究和药物筛选方面有着广泛的应用。

实验总结：
本次实验，通过超活染色，我们成功地观察到了植物叶片细胞内线粒体和液泡系的形态特点。

同时，我们也掌握了常用的显微镜操作技巧，对现代生命科学领域中细胞结构和功能的研究提供了帮助。

第1篇一、实验目的1. 了解线粒体在细胞中的分布和形态；2. 掌握线粒体荧光染色的原理和方法；3. 观察线粒体在细胞中的动态变化。

二、实验原理线粒体是细胞内的能量工厂，其主要功能是通过氧化磷酸化产生能量。

线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。

三、实验材料1. 细胞样本：小鼠成纤维细胞；2. 荧光染料：线粒体荧光染料（例如，MitoTracker Green FM、Mitochondria Red FM等）；3. 实验器材：荧光显微镜、离心管、移液器、吸管、培养皿、细胞培养箱等。

四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养至对数生长期。

2. 线粒体荧光染色：取对数生长期的细胞，用磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）洗涤2次，弃去上清液。

3. 加入线粒体荧光染料：向细胞中加入适量的线粒体荧光染料，轻轻振荡均匀，使染料充分与细胞结合。

4. 遮光处理：将细胞置于避光环境中，静置30分钟，使染料与线粒体充分结合。

5. 洗涤：用PBS洗涤细胞2次，弃去上清液。

6. 荧光显微镜观察：将细胞置于荧光显微镜下，使用适当波长的激发光和发射光，观察线粒体的荧光。

7. 数据采集：使用图像采集系统采集线粒体的荧光图像，并进行统计分析。

1. 在荧光显微镜下，观察到细胞内的线粒体呈绿色荧光，表明线粒体已被成功染色。

2. 通过图像采集系统，得到线粒体的荧光图像，可以进行线粒体形态、分布、数量的统计分析。

3. 观察线粒体在细胞中的动态变化，发现线粒体在细胞内不断运动，具有一定的流动性。

六、实验讨论1. 线粒体荧光染色是一种常用的细胞生物学实验技术，通过特异性染色剂与线粒体结合，使线粒体在荧光显微镜下发出荧光，从而实现对线粒体的观察。

2. 本实验中，使用线粒体荧光染料对小鼠成纤维细胞进行染色，成功观察到细胞内的线粒体。

细胞生物学实验报告小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察1.实验目的：学习超活染色的原理及方法，用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。

2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片（2）实验药品：蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）活体染色又称超活染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。

这种染色方法常用的是化学染料。

目的：显示生活中细胞的某种结构，不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。

应用：研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。

（2）通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。

体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学” 特性。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。

一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。

（3）选择活体染料的原则：①性质：有电化学特性②低毒、无毒③低浓度：如实验中使用的是1/5000的詹纳斯绿B染液④专一、特异性：中性红可特异性地对植物液泡染色⑤常以碱性染料为主，因为碱性染料多可溶于类脂，容易穿膜。

4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。

剪开腹腔，取出肝脏。

线粒体活体染色及观察小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察一、实验目的掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。

二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织着色但又无害的一种染色法。

它的目的是显示生活细胞内某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

三、实验用品1.材料：小白鼠肝脏2.试剂：Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。

取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即为1/5000工作液装入棕色瓶中备用。

3.器材：显微镜、解剖盘、剪刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸四、实验步骤1.用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取出肝脏，选取边缘较薄的肝组织0.5cm2，放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。

2.滴加1/5000詹纳斯绿B溶液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移入染液，染色20-30分钟，以细胞块边缘被染成蓝绿色为准。

（注意：染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可完全淹没，以便使线粒体酶系得到氧化）3.吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀将组织充分剪碎制悬液。

4.取上述细胞悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。

五、实验结果在高倍镜下观察到了小鼠肝细胞，每个细胞中都有一些被染成蓝绿色的球状结构，为线粒体。

如下页图所示：高倍镜下线粒体超活染色图六、分析与讨论1.在取肝脏时要注意大小，大概为指甲盖的1/3左右为宜，且不宜太厚，防止里面的线粒体不宜被染色，影响实验结果的观察。

山东大学实验报告2018年4月16日________________________________________ _________________________姓名：丁志康系年级：2016级组别：周一下午科目：细胞生物学实验题目：小鼠肝细胞及精子线粒体的超活染色及观察学号：201600140055一、目的要求1. 掌握线粒体的超活染色原理及方法2. 观察动物肝细胞内线粒体的形态、数量和分布3. 观察小鼠精子的形态并尝试寻找畸形精子4. 观察小鼠精子中线粒体的分布二、实验原理1、线粒体线粒体(mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，被称为“power house”。

其直径在0.5到1.0微米左右。

除了溶组织内阿米巴、篮氏贾第鞭毛虫以及几种微孢子虫外，大多数真核细胞或多或少都拥有线粒体，但它们各自拥有的线粒体在大小、数量及外观等方面上都有所不同。

线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。

除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。

不同生物的不同组织中线粒体数量的差异是巨大的。

有许多细胞拥有多达数千个的线粒体（如肝脏细胞中有1000-2000个线粒体），而一些细胞则只有一个线粒体（如酵母菌细胞的大型分支线粒体）。

大多数哺乳动物的成熟红细胞不具有线粒体。

一般来说，细胞中线粒体数量取决于该细胞的代谢水平，代谢活动越旺盛的细胞线粒体越多。

线粒体分布方向与微管一致，通常分布在细胞功能旺盛的区域：如在肾脏细胞中靠近微血管，呈平行或栅状排列；在肠表皮细胞中呈两极分布，集中在顶端和基部；在精子中分布在鞭毛中区。

在卵母细胞体外培养中，随着细胞逐渐成熟，线粒体会由在细胞周边分布发展成均匀分布。

线粒体在细胞质中能以微管为导轨、由马达蛋白提供动力向功能旺盛的区域迁移。

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察【实验目的】一、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。

二、学习一些细胞器的超活染色技术。

【实验原理】活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞舶死亡。

活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。

体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。

体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。

活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。

碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。

但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。

一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。

詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。

詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体面围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。

【实验用品】一、器材显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀、载玻片、凹面载玻片、小烧杯二、试剂1．Ringer溶液氯化钠0.85g(变温动物用0.65g)氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml2．1％、1/5000詹纳斯绿B溶液称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30～40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1％原液。

一、实验名称小鼠染色体标本的制备、观察二、实验目的1、熟悉动物生殖细胞减数分裂过程及各个时期特点。

2、掌握小鼠睾丸减数分裂标本的制作方法。

3、学习染色体的染色和观察过程。

三、实验原理1、染色体染色体是细胞内具有遗传性质的遗传物质深度压缩形成的聚合体，易被碱性染料染成深色，所以叫染色体（染色质）。

染色体的分析往往是选择细胞处于活跃增殖状态，或者经过各种处理后细胞进入分裂的动物组织。

2、细胞分裂及其观察细胞的有丝分裂可以大体分为五个阶段：前期、前中期、中期、后期、末期，每一个时期都有它特定的形态和行为特征。

分裂前期：染色体凝集，间期细长、弥散分布的线性染色质，经过进一步螺旋化、折叠和包装等过程，逐渐变短变粗，形成光镜下可辨的早期染色体结构。

随着染色质的凝集，核仁缩小消失。

分裂极确立: 复制了的中心体分离，向两极移动。

纺锤体装配：从中心体形成星体微管和极微管。

前中期：核膜崩解；纺锤体完成装配，前期星体的形成和向两极的运动标志着纺锤体组装的开始。

随着核膜的解体，由纺锤体两极发出的一些星体微管可进入“核”内，通过其正极端捕获染色体，形成动粒微管。

至此，纺锤体基本完成组装；染色体整列，在动粒微管的作用下，染色体列队到赤道板。

中期：染色体排列在赤道板上，也是该实验的重点观察时期。

后期：姐妹染色单体分离并向细胞两极移动。

后期A，动粒微管变短，牵动染色体向两极运动；后期B，极微管长度增加，两极之间的距离逐渐拉长。

末期：：两子细胞核形成，染色体去浓缩，核膜重建，核仁重现。

在正常动物体内，骨髓和睾丸是处于不断分裂的组织。

给动物注射一定剂量的秋水仙素即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。

在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素，这此方法对于动物的核型分析是非常有用的。

本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。

因此睾丸和骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。

山东大学实验报告科目：细胞生物学实验题目：小鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察实验指导：张尚立老师王德诚 201300140087 日期：2015.11.09【实验目的】1.掌握细胞器活体染色方法；2.观察和了解活细胞内线粒体的结构与分布特点。

【实验原理】第一部分线粒体在动植物细胞中，线粒体是一种高度动态的细胞器，呈颗粒状或短线状，直径为0.3-1μm，长度为1.5-3.0μm。

线粒体在细胞内的分布与细胞内的能量需求密切相关。

能量需求集中的区域线粒体分布密集，反之分布密度较小。

动植物细胞中的线粒体时刻处于依赖细胞骨架和马达蛋白的运动之中。

无论线粒体在细胞中表现为随机分布还是极性分布，均是线粒体在运动方向和运动速率上受到调控的一个综合结果。

细胞中线粒体的数目同样呈现动态变化并接受调控。

不同类型真核生物细胞中线粒体的数目相差较大，而同一类型真核细胞中线粒体数目则相对比较稳定。

红藻、衣藻及酵母等简单真核细胞每个细胞只含有一个线粒体，而高等动物细胞内含有数百到数千个线粒体，说明细胞中线粒体的数目受到物种遗传信息的调控。

在同一种高等动植物体内，细胞内线粒体数目与细胞类型相关，说明细胞内线粒体的数目随着细胞分化而变化。

虽然线粒体形态和大小变化多样，但其基本结构均是由内外两层单位膜封闭包裹而成。

线粒体外膜（outer membrane）结构平展，起界膜作用；内膜（inner membrane）则向内折叠形成嵴。

存在于内外膜之间的空间被称为膜间隙（intermembrane space）。

线粒体内膜之内的空间称为基质（matrix）。

图1 线粒体超显微结构模式图第二部分超活染色超活染色也称活体染色，是指对生命有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

超活染色的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理病理状态。