细菌分类鉴定规程
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细菌分类鉴定规程
杜艳、余翔、罗国升
新菌鉴定主要流程：
1、 潜在新菌的确定
拿到拼接好的16Sr RNA gene序列后，进入NCBI blastN ()或EzTaxon server 2.1 () 进行比较，同源性低于98%的序列(同源性处于98-97%之间的序列最好少于3株)，可初步判断存在新菌的可能。
2、 选择标准菌株构建进化树
选择参考菌株构建三种进化树 (NJ、MP和ML)，构建进化树是需要注意以下几点：1）所选择的序列必须都是在IJSEM上正式发表的序列，2）所选择的参考菌株必须包含新菌所在属的所有标准菌株，3）需要选择新菌所在科的一些与新种所在属相近的属的type species作为参考菌株，4）需要选择一个远源的菌株作为参考菌株，如：E. coli。
3、 购买标准菌株
根据进化树位置和同源性高低选择标准菌株作为参考菌株，联系相关保藏机构购买标准菌株。具体信息可以在 上查找。
标准菌株的选择需遵循以下几点：1)
如果要用到不同的属但不是用这些属的所有的种，则要选择这些属的模式种，并且要选择模式种的模式菌株。2) 一个属的模式种是最重要的参照微生物，如果一个新种被认为属于这个属，就一定要与该属的模式种进行比较，而其他的种可能分类时出现错误，可能将来会被重细菌分类鉴定规程
2 / 19 新分类。总之，进行种、属、甚至是科的 比较研究时，都要用模式微生物，这就涉及到模式属的模式种，模式种的模式菌。
4、 表型特征实验
培养特征：菌落特征 (如菌落的形状、大小、颜色、隆起、表面状况、质地、光泽、水溶性色素等)。
细胞形态：形态 (球形、杆状、弧形、螺旋形、丝状、分枝及特殊形状)，大小，排列(单个、成对、成链或其他特殊排列方式)。
特殊的细胞结构：鞭毛 (着生位置、数量)，芽胞(形状、着生位置、是否膨大)，孢子(孢子形状、着生位置、数量、排列)，其它 (荚膜、细胞附属物为柄、丝状物、鞘、蓝细菌的异形胞、静止细胞和连鞘体等)。
肠杆菌科的鉴定流程
嘿，咱今儿就来讲讲肠杆菌科的鉴定流程这档子事儿！
你想想啊，肠杆菌科那可是个大家族，里面成员众多。要把它们准确鉴定出来，那可得有点真本事呢！
咱先从观察开始。就像认识一个新朋友，咱得先瞅瞅他长啥样不是？看看这些细菌的形态呀，是圆圆的，还是长长的，有没有啥特别的形状。这就好比区分苹果和梨，总得先看看外观嘛。
然后呢，咱得研究研究它们的生化特性。这就像是了解一个人的性格和爱好一样。看看它们对不同的物质有啥反应，能不能分解这个，能不能利用那个。这一步可重要啦，就像判断一个人爱不爱吃甜食，能不能喝酒一样关键。
还有啊，它们的培养特性也不能忽视。不同的肠杆菌在不同的培养基上会有不同的表现呢。就好像不同的花在不同的土壤里生长情况不一样。有些可能长得特别旺盛，有些可能就不太起眼。
再说说抗原特性吧。这就像是每个人都有自己独特的标志一样，肠杆菌也有它们的“身份证”呢。通过检测这些抗原，咱就能更准确地知道它们是谁啦。
咱做这些鉴定可不能马虎呀，就跟警察破案似的，得仔细再仔细。要是弄错了，那可就麻烦啦！你说要是把一个“好人”当成“坏人”给抓了，那多冤枉呀！
说到这儿，你是不是觉得挺有意思的？其实呀，鉴定肠杆菌科就像是一场有趣的探秘之旅。每一个步骤都像是解开一个小谜团，最后把所有的谜团都解开，就能准确地知道这些小家伙们的真面目啦！
所以呀，大家可别小瞧了这肠杆菌科的鉴定流程哦。这可是个技术活，需要我们有耐心，有细心，还要有一双善于发现的眼睛。只有这样，我们才能在这个细菌的世界里游刃有余，准确地找到我们想要找的那个“它”！这不就是我们搞科研、做实验的乐趣所在嘛！
细菌鉴定流程
细菌鉴定
细菌形态学鉴定 16S rDNA 鉴定 生理生化鉴定
一、 细菌形态学鉴定
1. 从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。
2. 放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。
3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。
4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，
细菌 大小（mm） 形状 干湿 透明度 颜色 边缘
注意事项：
① 接种划线应在酒精灯旁边操作
② 培养时应倒置培养，防止污染
二、革兰氏染色
1. 涂片固定
将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。
注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2. 染色
一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
（1） 加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。
（2） 加上碘液染色1分钟，水洗。
（3） 加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。
（4） 加上蕃红后，染色1分钟，水洗。
（5） 吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。
3. 结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。
注意事项：
① 标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
② 玻片通过火焰温度不能太高。 ③ 碘液变透明，则不能使用。
④ 水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。
三、16S rDNA 鉴定
口腔细菌分离培养和鉴定流程
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