甘蔗遗传转化中不同阶段潮霉素抗性筛选
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用 比在 诱 导 培 养 基 内更 快 、 果 更好 ， 遗 传 转 化 时 可直 接 将 Ｈｙ 效 故 ｇ用 于分 化 培 养 基 进 行 抗 性 芽 筛选 试 验 。
关 键ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ词 ： 蔗 组 织 培 养 ； 霉素 ； 性 试验 ； 传 转 化 甘 潮 抗 遗 中 图分 类 号 ： ５ ６１ ￥６． 文献标识码 ： Ａ
（ ． 南 农 业 大 学 农 学 与 生 物 技 术 学 院 ， 明 ６ ００ ；． 南 省 甘 蔗 遗 传 改 良重 点 实 验 室 ， 远 ６ １０ ） １云 昆 ５ ２ １ ２云 开 ６ ６０ 摘 要： 以新 台糖 ２ ２的 胚 性 愈 伤 组 织 为 材 料 ， 诱 导 培 养 基 、 化 培 养 基 及 生 根 培 养 基 中 ， 别 添 加 不 同 浓度 的 潮 在 分 分
霉素（ ｙ ） 选择性试剂 。 Ｈ ｇ为 以确 定甘 蔗 遗 传 转 化 时 的 最佳 筛 选 浓度 。 果 表 明 ： 霉素 对不 同 阶段 培 养 基 的 敏 感 性 存 结 潮
在 一 定 差 异 ， 甘 蔗 遗 传 转 化 时 ３种 培 养 基 的 抗 性 筛选 浓 度 分 别 以 ５ 、０３ ｍｇＬ 为佳 ； 分 化 培 养 基 内 的毒 性 作 在 ０ ３ 、０ ／ 在
２ ０钲 ０１
中 国 糖 料
Ｓｕｇ ｒ Ｃｒ ｐｓｏ ａ ｏ ｆ Ｃｈｉ ａ ｎ １ ７
第 ２期
文 章 编 号 ：０ ７ ２ ２ （ ０ ０ ０ — ０ ７ ０ １０ — ６ ４ ２ １ ） ２ ０ １ — ３
甘蔗遗传转化中不同阶段潮霉素抗性筛选
姚 丽 吴 文ｚ 千 ，才 ， 春 曾
ｌ － 方 法 ２
１ ． 培 养基 ．１ ２
（ ） 导 愈 伤培 养 基 ＭｌＭＳ ２４ Ｄｌ ／ ；２ 分化 培 养基 Ｍ ： ＋ 一 Ａ１ ／＋ Ａ ０１ ／ １诱 ： ＋ ，一 ｍｇ （ ） Ｌ ２ＭＳ ６ Ｂ ｍｇ Ｎ Ａ ． ｍｇ Ｌ Ｌ；
（） ３ 生根 培养 基 Ｍ ：， ＭＳ Ｎ Ａ１ｍ ／＋ １２ ＋ Ａ ｓＬ 蔗糖 ２ ｇＬ ０ ／ 。以上培养 基 皆为 固体培 养基 ， 未特别 注 明的则琼 脂 ７／ ｇ Ｌ，
甘 蔗 （ ａｃ ａｕ ｆ ｉａｕ ．属 禾 本科 （ ｒｍｉｅｅ 甘 蔗属 （ａｃ ａｕ ， Ｓ ｃ ｈ ｒｍ ｏ ｃｎ ｒｍ Ｌ ） ｆ Ｇａ ｎａ） Ｓ ｃｈ ｒｍ） 是重 要 的糖料 和 能 源作 物 ， 蔗
糖 约 占世 界食 糖 总产 量 的 ７ ％～ ０ 。 在我 国达 ９ ％以上 ， 蔗也 是 生产 燃料 乙醇 和一 些 天然 化合 物 的 重 ０ ８％ 而 ０ 甘
本试 验 通过 观 测新 台糖 ２ ２对 Ｈ ｇ的敏感 性 ．为 确 定甘 蔗 遗传 转 化时 各 阶段 的最 佳抗 性 筛选 浓 度提 供 ｙ
重要 依据
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
新 台糖 ２ ， ２ 由云 南 省农业 科 学 院甘蔗 研究 所提 供 。潮 霉素 Ｂ（ ｙ ） ｓ ｍ Ｈ ｇ 为 ｉ ａ公 司产 品 。 ｇ
要 原料 ， 汁后 的蔗 渣还 可用 于造 纸 Ｉ 甘蔗 更是 云南 仅 次 于烟草 的 重要 经济 作物 ， 榨 ｌ ｌ 。 也是 未来 重要 能 源作物 其 遗传 背景 较 复杂 ， 是非 整倍 性 异源 多倍 体作 物 ， 孕穗 、 花及 花期 相 遇 困难 ， 开 常规杂 交 育种难 度 大 、 期长 。 周 新 育成 的高 产优 良品系 因某 一性状 欠 佳而 不能 推 广应 用常 有发 生［ 故 采用 转 基 因技 术 迅速改 良现有 品种 的 ２ １ 研 究工 作 日益增 多 ． 已有 了相 关 成 功报 道 ［１而 能否 成 功 的关 键 因 素之 一 就 在 于 能否 确 定 适 宜 的筛选 试 且 ３． － ６ 剂 及浓 度 ． 而 淘汰 非转 化体 从 在农 杆 菌转 化 中 ， 酸转 移 酶基 因 （ ） 直作 为 有效 的标 记 基 因 ， 选 择试 剂 潮霉 素 Ｂ Ｈ ｇ ｍｙｉ 磷 如ｆ一 其 （ ｙｒ ｃ Ｂ。 ｏ ｎ 简称 Ｈ ｇ 与卡 那霉 素一 样 ， 一种 氨 基糖 苷类 抗 生 素 （ ｒ ｚ ｎ ａ ｉ，９ ３ ， ｙ） 是 Ｇ ｉ ｄＤ ｖｓ １ ８ ） 它来 源 于链 球 菌 （ｔ ｐｏ ｙｅ ｔａ Ｓｒ ｔｍ ｃｓ ｅ ｈｇｏｃｐｃ ｓ ，ｉｄ ｙ ｒｓｏ ｉｕ ） Ｌｎ ａ等 （９ ３ 从 大肠 杆 菌 中克 隆 出 ｈ ｔ转 化 到大 肠 杆菌 和 酵母 菌 中 ， 到 了潮 霉 素抗性 转 １８ ） ｐ， 得 化 子［ 从 １ ８ ７ １ 。 ９ ９年 开始 ￡ 因成为 主要 的筛 选 标记 基 因 ， 编码 的潮 霉素 磷 酸转移 酶 可将磷 酸 基 团共 价地 基 其 加 到 Ｈ ｇ的第 ４位 上 ， 过 酶促 磷 酸化 作 用 而使 Ｈ ｇ失 活 ， 而产 生 抗性 ， ｙ 通 ｙ 从 因此 在 含 Ｈ ｇ的培 养 基 中 ， 有 ｙ 含 该标 记基 因的植株 能 存活 而不 含该 标 记基 因 的植株 死 亡 。Ｈｙ 有 选择 效 率 高 、 因型差 异小 、 转化 细胞 和 ｇ 基 对 非转 化 细胞 区分 明显 、 转化 细 胞不 产 生或 很 少产 生 毒害 作用 ， 对 而且 很少 出现 白化 苗 、 生植 株 的可 育性 也 再 较好 等优 点 ， 在水 稻 、 玉米 和小 麦等 作 物上得 到 了广 泛应 用 ， 是单 子 叶植物 较 为理 想 的筛选 试剂 ” 。因此 ． 在 甘蔗 遗传 转化 前确 定 潮霉 素在 组织 培 养各 阶段 的使 用浓 度 ．对转 化 时淘 汰那 些未 转化 组织 或组 培苗 提供 了 重要 依据
蔗 糖 ３ ￣Ｌ ＡＣ０２ ，Ｈ ．。 ０／ ， ． ｐ ５８
