HBV血清学标记物与HBV-DNA定量检测的相关性及临床意义

・　２９２　・　国际检验医学杂志２００９年３月第３Ｏ卷第３期Ｉｎｔ　Ｊ　ｂＭｅｄ，Ｍａｒｃｈ　２００９，ＶｏＬ　３０，Ｎｏ．３　

ＨＢＶ血清学标记物与ＨＢＶ—ＤＮＡ定量检测的相关性及　

临床意义　

张金花　肖邦毛黎　

【摘要】目的探讨ＨＢＶ血清学标记物（ＨＢＶ—Ｍ）定量与ＨＢＶ－ＤＮＡ定量检测的相关性及其　

对肝病患者诊断、预后的意义。方法　分别使用化学发光微粒子免疫分析技术（ｃＭＩＡ）和荧光定量　

ＰＣＲ（ＦＱ－ＰＣＲ）对１８６例患者的乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ—ＤＮＡ）和乙肝两对半进行定量检测。结果　

１８６例患者的血清学模型包括下列４种：组合Ｉ　ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）８３例，血清　ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性率为９５．１８　，ＤＮＡ平均含量为１．０１×１Ｏ　拷贝／ｍＬ。组合ｌＩ　ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｂ　

（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）９３例，血清ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性率为４９．４６　，ＤＮＡ平均含量为８．１ｌ×１Ｏ　拷贝／ｍＬ。　

组合１１１　ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）３例，血清ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性率为３３．３　，ＤＮＡ平均含量为５．３７×１０　

拷贝／ｍＬ。组合ＩＶ　ＨＢｓＡｂ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）７例，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为０　，ＤＮＡ平均含量小于　

５．０×１０　拷贝／ｍＬ。在组合Ｉ中ＨＢｅＡｇ定量＞１　０００的ｅ抗原均值为１２８７．７７，血清ＨＢＶ—ＤＮＡ含量　

对数均值为７．４８０，ＨＢｅＡｇ定量＜１　０００的ｅ抗原均值为３２９．２２，血清ＨＢＶ—ＤＮＡ含量对数均值为４．　

９１３。两小组的ＨＢｅＡｇ含量与荧光定量ＰＣＲ结果进行独立性检验、差异性检验Ｐ值＜Ｏ．０５，４种组　

合ＤＮＡ阳性率为组合Ｉ＞组合Ⅱ＞组合Ⅲ＞组合Ⅳ。４种组合ＨＢＶ的ＥＬＩＳＡ的阳性模式与荧光　

定量ＰＣＲ结果进行独立性检验、差异性检验Ｐ值均小于０．０５。结论ＨＢＶ—ＤＮＡ含量与ｅ抗原具有　

显著相关性，选择乙肝两对半血清学标志和ＨＢＶ—ＤＮＡ定量检测，对于临床乙肝感染、复制及其传染　

性和抗病毒治疗效果的嘧测具有重要意义。　

【关键词】肝炎病毒，乙型；ＤＮＡ；　临床实验室技术　

中图分类号：Ｒ４４６．６１；Ｒ５１２．６２　文献标识码：Ｂ　文章编号：１６７３—４１３０（２００９）０３—０２９２—０２　

ＨＢＶ感染主要在非洲和亚洲国家流行，我国属高地方性　

流行地区　。ＨＢＶ血清学标记物（ＨＢＶ　ｍａｒｋｅｒｓ，ＨＢＶ　Ｍ）　

检测和Ｈｌ３Ｖ　ＤＮＡ定量检测足目前临床诊断、治疗、分析和判　

断乙肝病毒感染者病程及传染性的重要指标。本组采用化学　

发光微粒子免疫分析技术（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ　ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ　ｉｍ—　

ｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＣＭＩＡ）和荧光定量ＰＣＲ（ＦＱ—ＰＣＲ）定量检测　

ＨＢＶ—Ｍ和ＨＢＶ—ＤＮＡ含最，探讨两者之间的相关性，现报道　

如下。　’　

资料与方法　

１．标本来源　血清标本１８６例，选自２００６年１２月至　

２００７年２月川Ｉ北医学院附属医院住院的乙肝患者及门诊患　

者，其中男性１３１例，女性５５例，年龄６～７１岁。　

２．试剂与方法　１）乙肝两对半定量检测：采用ＣＭＩＡ　

法，试剂购自美国Ａｂｂｏｔｔ公司。仪器为美国Ａｂｂｏｔｔ公司生产　

的Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ　ｉ２０００　ＳＲ全自动化学发光免疫分析仪。阳性标　

准：ＨＢｓＡｇ￣０．１１　ＩＵ／ｍＩ　；ＨＢｓＡｂ＞９．９９　ＭＩＵ／ｍＬ；ＨＢｅＡｇ＞　

０．９９　ｓ／ｃｏ；ＨＢｅＡｂ＞０．９９　ｓ／ｃＯ；ＨＢｃＡｂ＞０．９９　ｓ／ｃｏ。２）　

ＨＢＶ—ＤＮＡ含量：检测所用仪器系德国Ｒｏｃｈｅ公司生产的　

ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ自动荧光ＰＣＲ仪；ＨＢＶ—ＤＮＡ　ＦＱ—ＰＣＲ试剂盒由　

深圳匹基生物工程公司提供。严格按试剂说明书操作。ＨＢＶ－　

ＤＮＡ％５．０×１０　拷贝／ｍＩ　者为阴性，ＨＢＶ　ＤＮＡ＞５．０×１０　拷　

贝／ｍＬ者为阳性。　

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３：４１３０．２００９．０３．０４０　作者单位：６３７０００　四川南充川北医学院附属医院检验科（张金花、　

毛黎）；５６３００３遵义医学院基础部（肖邦）　・经验交流・　

３．数据处理　对血清学模型与ＨＢＶ－ＤＮＡ定量结果的　

两两比较以及ｅ抗原与ＨＢＶ—ＤＮＡ定量结果的比较数据处理　

采用ｔ检验。　

结　果　

１．ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝两对半检测结果　经过统计分析，　

ＨＢｖ　ＤＮＡ和乙肝两对半检测结果大三阳与小三阳、ＨＢｓＡｇ　（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）、ＨＢｓＡｂ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）之间均为Ｐ＜０．０５，　

差异有统计学意义。小三阳与ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）、ＨＢ—　

ｓＡｂ（＋）ＨＢｃＡｂ（＋）之间Ｐ％Ｏ．０５，差异有统计学意义。其他　

差异均无统计学意义（见表１）　表１　ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝两对半检测结果　

注：组合Ｉ与组合Ⅱ、组合Ⅲ、组合Ⅳ的ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性率与定量　

结果差异性检验Ｐ＜Ｏ．０５。　

２．ｅ抗原与ＨＢＶ—ＤＮＡ定量检测结果　经过统计分析，　

ｅ抗原与ＨＢＶ—ＤＮＡ定量检测结果ｅ抗原大于１　０００模式与ｅ　

抗原小于１　０００模式ＨＢＶ—ＤＮＡ定量结果之（下转第２９４页）

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推出的小型五分类血细胞分析仪对异常白细胞的敏感度达到　

９６．０　，漏诊的情况是极少发生的；而特异性（６８．５　）比其他　

仪器略低［６一，一方面可能与仪器白细胞分类原理有关，更主要　

的可能与检测标本有关。儿科疾病中以感染性疾病多见。各　

种感染会造成患儿血细胞形态的改变，如非洲淋巴细胞瘤病毒　（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ　ｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）感染后外周血出现大量的异型淋巴　

细胞；严重细菌感染时，中性粒细胞会出现毒性变化和／或核左　

移现象，外周血中可出现幼稚粒细胞；结核杆菌、支原体等感染　

后出现单核细胞胞浆空泡等。这些现象都给仪器在白细胞分　

类时带来混乱，如异型淋巴细胞的胞核染色质比成熟淋巴细胞　

疏松，染色时结合的荧光染料多，仪器往往会将其划到单核细　

胞内，这也是该仪器在分析儿科血液标本时单核细胞偏高的原　

因。从表２可以看出异淋两种方法符合率最低，一种可能是例　

数偏少，另一种可能是部分病例中出现幼稚型异淋，仪器当作　

原始／幼稚淋巴细胞了；而异型淋巴细胞、有核红细胞和原始细　

胞符合率不高可能与以下因素有关：１）机器分类测定２０　０００　

个细胞，手工分类２人各数２００个白细胞，并且异常细胞的比　

例较小，所以存在手工漏检的可能。２）部分细胞形态镜下不明　

确，而机器可以通过染色识别，也可出现机器分类高于手工分　

类的情况。３）机器分类的染色方法与手工方法存在差异，也是　

原因之一。４）理化因素。病理状态下极度变形的细胞，机器分　

类可能出现分类偏差。因此，在血细胞分类方面，血细胞分析　

仪并不能完全取代显微镜检查［　，异常结果的镜检复片是必不　

可少的。　

综上所述，ＸＳ－８００ｉ血液分析仪对于异常白细胞有较高的　

检出率，这可以大大减轻工作人员的工作量，但对异常白细胞　

的分辨并不完全准确，各实验室应根据人工镜检复片与仪器分　类结果对比制定各自的复检标准，以便为临床提供更准确的　

信息。　

参　考　文　献　

［１］Ｊｏｎｅｓ　ＲＧ，Ｆａｕｓｔ　ＡＭ，Ｍａｔｔｅｈｅｗｓ　ＲＡ．Ｑｕａｌｉｔｙ　ｔｅａｍ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｉｎ　ｅ—　ｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｔｈｒｅｅ　ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ　ａｎａｌｙｚｅｒｓ　ｗｉｔｈ　ｆｉｖｅ－ｐａｒｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｐａｔｈｏｌ，１９９５，１０３（２）：１５９—　

１６６．　１－２３　Ｇｒｉｍａｌｄｉ　Ｅ，Ｓｃｏｐａｃａｓａ　Ｆ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｂｂｏｔｔ　Ｃｅｌｌ—Ｄｙｎ　４０００　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ　ａｎａｌｙｚｅｒ［Ｊ］．Ａｍ　ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｐａｔｈｏｌ，２０００，１１３（４）：４９７—　

５０５．　［３］Ｐｉｃａｒｄ　Ｆ，Ｇｉｃｑｕｅｌ　Ｃ，Ｍａｒｎｅｔ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　

ｎｅｗ　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ　ａｎａｌｙｚｅｒ　ＣＯＵＬＴＥＲ？ＧＥＮ——Ｓ　ｉｎ　ａ　ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｈｏｓ——　ｐｉｔａｌ　ＥＪ－Ｉ．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，１９９９，３７（６）：６８１—６８６．　［４３　Ａｍｏｕｒｏｕｘ　Ｉ，Ｂａｌａ　ＹＭ，Ｍａｒｆａｉｎｇ　ＫＡ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ａｎａ—　ｌｙｚｅｒ　Ｂｅｃｋｍａｎ　Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｌ　Ｈ　７５０：ａｎａｌｙｔｉｃ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｄｅｃｉｓｉｏｎ　ｒｕｌｅｓ　Ｉ－Ｊ］．Ａｎｎ　Ｂｉｏｌ　Ｃｌｉｎ（Ｐａｒｉｓ），２００３，６１（５）：５７６—５８４．　Ｅｓ］张杰，徐以南，钱敏，等．ＡＢＸ　Ｐｅｎｔｒａ　１２０血液分析仪性能评估　［Ｊ］．临床检验杂志，２００３，２１（６）：３８２　３８３．　［６］凌励，沈茜，周道银，等．ＸＥ一２１００血液分析仪白细胞分类功能评　价ＥＪ］．上海医学检验杂志，２００３，１８（６）：３９１—３９３．　Ｅ７３邓明风，王昌富，肖秀林，等．血液分析仪白细胞分类报警阈值的　ＲＯＣ由线分析［Ｊ］．检验医学，２００６，２１（３）：２６５—２６８．　Ｅ８３艾红梅，肖秀林，王昌富，等．血细胞分析仪异常警示与镜检的比　

较分析ＥＪ］．国际检验医学杂志，２００６，２７（２）：１８３—１８４．　［９３李顺义．应重视血常规检验中的形态学观察［Ｊ］．中华检验医学杂　

志，１９９９，２２（１）：２２—２３．　

（收稿日期：２００８—０５　２０）　

（上接第２９３页）　

间Ｐ％０．０５，差异有统计学意义（见表２）。　

表２　ｅ抗原与ＨＢＶ－ＤＮＡ定量检测结果　

注：两组模式ｅ抗原与ＨＢＶ—ＤＮＡ定量检测结果的差异性检验Ｐ　

＜０．０５。　

讨　论　

研究结果表明，ＨＢｅＡｇ阳性患者ＨＢＶ—ＤＮＡ的阳性率明　

显高于ＨＢｅＡｇ阴性患者，而且在ＨＢｅＡｇ　５Ｉｔ性患者中，ｅ抗原　

的含量与ＨＢＶ－ＤＮＡ的定量结果有着显著的相关性，表明　

ＨＢｅＡｇ阳性患者体内的病毒复制比ＨＢｅＡｇ阴性患者的活跃，　

传染性更强。另外，ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ阳性患者中　

ＨＢＶ—ＤＮＡ的阳性率为４９．４６　，其平均含量为８．１１×１０　拷　

贝／ｍＬ，仍有较高含量，说明ｅ抗体的出现并不表示乙肝患者　

体内病毒复制消失，这与以往的一些报告相符，这种情况可能　

与前Ｃ区突变有关　；有关资料报道，这可能也与肝功能损　

害程度有一定的相关性　Ｊ。　

ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数＞５．０　Ｘ　１０　拷贝／ｍＬ时病毒含量与　

ＨＢｅＡｇ的相关性不大，分析可能是由于ＨＢｅＡｇ高度可变，ｃ　

基因突变可形成一种不分泌ＨＢｅＡｇ的ＨＢＶ突变体，阻止　

ＨＢｅＡｇ形成或影响ＨＢｅＡｇ的分泌和抗原性，逃避了宿主免疫　系统的识别和对病毒的消除，实际上ＨＢＶ仍在复制。这种情况　

也可能是因为荧光定量ＰＣＲ的检测上限是５．０Ｘ　１０　拷贝／ｍＬ，　

超过上限需要对血清标本进行稀释，而在临床标本中本组未进