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伊文思蓝检测血脑屏障(BBB)通透性

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1、
测定血脑屏障完整性原理
伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小与血浆白蛋白相近，而且在血 液中与
血浆白蛋白有很高的亲和力， 由于正常状态下血浆白蛋白无法透过血脑屏障， 所以染
色时，如神经系统是完整的，与血浆白蛋白结合的依文思蓝无法使其着色。 相反如果神经系
统血脑屏障被破坏，依文思蓝就可以进入神经系统并使其着色。在荧光波长 470与540 nm
各有一强峰，680 nm处有一弱峰。其在组织中的含量常使用化学透析法和比色法进行检测。

脑组织中血脑屏障的破坏，可以引起毛细血管的通透性增加，结合 EB的白蛋白可通过
BBB进入脑组织，应用化学比色法甲酰胺测定脑组织 EB渗出量，可以反映血脑屏障的开放
程度，并在此基础上进一步探讨不同细胞移植干预与 BBB通透性的效应关系。
伊文思蓝灌注染色法结合共聚焦激光扫描显微镜观察脑切片中 EB荧光强度，可以检测
血脑屏障中血管形态的改变，同时对脑组织中渗入的 EB含量进行定量分析。
两者结合可以从形态学、组织定量上相互补充完善。

2
、实验准备

试
2%EB 1%戊巴比妥钠、0.9%氯化钠、20U/ml肝素钠、二甲基甲酰胺

器材：冰冻切片机、共聚焦激光扫描显微镜、分光光度计、恒温箱、离心机、注射器、输液 器、解剖
器械等

3
、测定方法

1、 各组动物处死前 0.5h （也有的为1h、2h）尾静脉（或股静脉）注入 2%EB（2ml/kg，也 有的
用3、4ml/kg ）（剂量与提前时间成反比？）
2、 1%戊巴比妥钠 30-40 mg/kg麻醉后打开胸腔，心内灌注肝素生理盐水（ 0.9%氯化钠
+20U/ml肝素钠）200-300ml （有文献提出当右心房流出液体变清澈时即可停止灌注），断
头取脑作矢状切取半脑分离海马，一半脑组织进行冰冻切片，应用冰冻切片机行 10-20卩m
切片，于共聚焦激光扫描显微镜下观察 EB通透情况。
3、 另一半脑组织称重，剪碎置于二甲基甲酰胺（ 1ml/100mg脑组织，也可用 三氯乙酸、甲
酰胺）60C孵育24h, 1000r/min离心5min （有的作者认为脑组织在甲酰胺中匀浆呈胶状， 上清液
不能通过离心取得，水浴后直接取上清液比色），用分光光度计检测波长为 620 nm
的吸光度。
4、 采用软件（Oringen7.0）进行数据分析，根据绘制的 EB标准曲线计算EB含量。

4
、试剂购买

EB
二甲基甲酰胺
素材和资料部分来自网
（专业文档是经验性极强的领域， 无法思考和涵盖全面,

络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）

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急性和慢性帕金森病大鼠血脑屏障通透性变化的研究

急性和慢性帕金森病大鼠血脑屏障通透性变化的研究

急性和慢性帕金森病大鼠血脑屏障通透性变化的研究【摘要】目的通过观察帕金森病大鼠在不同时间点脑组织中伊文斯蓝(EB)含量变化来探讨急性和慢性PD大鼠血脑屏障通透性的变化。

方法脑立体定向将羟基多巴胺注入大鼠右侧纹状体建立PD模型。

将大鼠随机分成对照组和模型组，后者又分为6 h，12 h，24 h，4周组，最后一组为慢性PD组。

按BELAYEV法使用EB测定BBB通透性。

结果急性PD大鼠BBB通透性在6 h达到高峰，12 h逐渐下降，持续至24 h，慢性PD大鼠与对照组相比无明显差异。

结论急性PD时伴有BBB的通透性增加，而慢性PD时BBB的通透性未见改变。

【关键词】帕金森病；血脑屏障；伊文斯蓝Abstract：ObjectiveTo study the alteration of blood-brain barrier (BBB) with parkinson diseasemeasured by EB content in the brain tissue of rats withacute and chronic parkinson parkinson disease model was established by direct injection of 6-OHDA into the right striatum rats were randomly divided into control group and model rats in model group were killed at hour 6, hour 12, hour 24 and week last group was chronic parkinson Disease rat BBB permeability was assessed by Belyaev‘s BBB permeability reached the peak at hour 6 after 6-OHDA acute lesion,then decreased at hour 12,lasted until 24 h.The BBB permeability of chronic parkinson disease rats had no significant difference as compared with control group. ConclusionThe permeability of BBB will increase in acute parkinson disease rats but has no change in chronicity parkinson disease rats.Key words： Parkinson Disease; Blood-brain barrier; Evens Blue帕金森病是一种常见的中老年性疾病，主要病理学特征是中脑黑质部位多巴胺(dopamine，DA)能神经元变性死亡［1］，引起纹状体内DA递质含量显着降低。

药物对血脑屏障的渗透性影响

药物对血脑屏障的渗透性影响

药物对血脑屏障的渗透性影响血脑屏障（Blood-Brain Barrier，BBB）是由血管内皮细胞和神经胶质细胞构成的特殊物理和生化屏障，其主要功能是限制外界物质的自由进入大脑，从而保护中枢神经系统的正常功能。

然而，某些药物可以渗透血脑屏障，进入脑组织，对中枢神经系统产生影响。

本文将探讨药物对血脑屏障的渗透性影响，并就此进行解析。

一、血脑屏障的结构与功能血脑屏障由紧密连接的内皮细胞组成，这些细胞构成了脑微血管的血脑屏障功能。

此外，脑血管基底膜和富含胶质细胞的脑室表面也起到了保护与筛选作用。

血脑屏障的主要功能包括：限制外源性物质如药物的进入、维持大脑内环境的稳定、防止神经毒性物质进入中枢神经系统、增强免疫功能防御以及参与神经发育和修复。

二、药物对血脑屏障的渗透性取决于其化学性质、分子大小、药物的溶解度、药物在体内的蛋白结合率以及BBB生理状态等因素。

1. 脂溶性药物脂溶性药物能够直接通过血脑屏障，并且其渗透性较高。

这是因为血脑屏障主要由脂质组成，脂溶性药物可以通过脂质溶解的方式渗透进入脑组织。

典型的脂溶性药物包括麻醉药物、镇静药物等。

2. 水溶性药物与脂溶性药物相比，水溶性药物的渗透性较差。

这是因为血脑屏障具有严格的选择性对水分子进行筛选，能够有效阻止大部分水溶性物质的通过。

然而，某些水溶性药物可以通过BBB的特定转运系统实现渗透，如肽类药物经由氨基酸转运系统。

3. 通道介导的药物转运血脑屏障上存在多种通道，通过这些通道可以实现特定分子的穿越。

例如，钙离子通道、钾离子通道、氯离子通道等。

某些离子型药物可以通过这些通道进入脑组织。

4. 合成药物近年来，研究者们通过改变药物的结构进行荟萃，合成出更具渗透性的新型药物。

这些合成药物能够利用血脑屏障上的特定转运系统或通道进行渗透，实现药物的靶向治疗。

三、药物渗透血脑屏障的影响因素除了药物本身的性质外，其他因素也会影响药物对血脑屏障的渗透性。

1. 梗阻物质一些物质可以干扰药物的渗透过程，降低其穿越能力。

咪唑克生对EAE小鼠血脑屏障通透性及对MMP-9／TIMP-1的影响

咪唑克生对EAE小鼠血脑屏障通透性及对MMP-9／TIMP-1的影响

咪唑克生对EAE小鼠血脑屏障通透性及对MMP-9／TIMP-1的影响王新施;曾庆意;朱振国;朱攀;徐惠琴;郑荣远【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2014(000)012【摘要】目的：观察咪唑克生（ idazoxan，IDA）对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（ experimental autoimmune encephalomyelitis， EAE）时血脑屏障（ BBB）通透性及脊髓内的MMP-9／TIMP-1表达的影响。

方法：选用36只8周左右的C57BL／6小鼠，随机分为空白对照组、EAE组和IDA干预组，每组12只，采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（ MOG35-55）诱导经典EAE模型，干预组采用IDA 2 mg／kg腹腔注射，每天2次，共15 d。

观察每组大鼠发病情况并进行神经功能障碍评分，采用HE染色和LFB髓鞘染色观察病理改变，采用伊文思蓝荧光定量方法检测BBB通透性的变化，并用Western blotting法检测MMP-9和TIMP-1的表达。

结果：空白对照组无一发病，与EAE组比较， IDA 干预组神经功能障碍评分明显下降，炎性病灶明显减少，BBB通透性明显降低，MMP-9的表达和MMP-9／TIMP-1比值明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论：IDA可能通过下调MMP-9，降低MMP-9／TIMP-1比值，减轻血脑屏障的降解破坏，从而稳固BBB，降低BBB通透性，减缓小鼠EAE的发病。

【总页数】5页(P2254-2258)【作者】王新施;曾庆意;朱振国;朱攀;徐惠琴;郑荣远【作者单位】温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江温州325000;温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江温州325000;温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江温州325000;温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江温州325000;温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江温州325000;温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R363;R774.5+1【相关文献】1.咪唑克生对体外血脑屏障炎症模型通透性的影响 [J], 王新施;朱攀;朱振国;夏念格;李佳;郑荣远2.MRS2179对大鼠缺血性脑卒中后MMP-9表达及血脑屏障通透性的影响 [J], 张秋佳;杨锦珊;刘阳;王伟3.黄体酮对脑梗死大鼠脑部MMP-9、TIMP-1表达及血脑屏障通透性的影响 [J], 郝玉金;王建平;刘春岭;李昕;蒋超;陈宁宁4.咪唑克生干预对EAE脊髓免疫细胞及IFN-γ与IL-10水平的影响 [J], 朱振国;郑荣远;陈国钱;韩钊;邱伟文;殷为勇5.咪唑克生对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠血脑屏障紧密连接的影响 [J], 王新施;方恢林;朱振国;朱攀;曾庆意;郑荣远因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小胶质细胞ZEB1的上调改善急性缺血性卒中后的脑损伤

小胶质细胞ZEB1的上调改善急性缺血性卒中后的脑损伤


Cre／loxP系统来源于F1噬菌体，可以介导位点特异的DNA重组。该系统含有 两种成分：①一段长34bp的DNA序列，这段34bp序列是重组酶识别的位点， 被称为loxP位点。②Cre重组酶(cyclizationrecombination)，它是一种由343个 氨基酸组成的单体蛋白，可以引发loxP位点的DNA重组。任何序列的DNA， 当其位于两个loxP位点之间的时候，在Cre重组酶的作用下要么被缺失(两个 loxP位点的方向相同)，要么方向发生倒转(两loxP位点的方向相反)，如图所示。
发现ZEB1-KD小鼠ZEB1 mRNA和蛋白水平均下调。然而，脾单核细胞中 的ZEB1表达没有下调。
与ZEB1-KD小鼠不同，ZEB1-TG小鼠中的小神经胶质ZEB1表达与野生型 （WT）相比上调。 Z
EB1-KD和ZEB1-TG小鼠发育正常，没有明显的神经系统疾病，不育或行 为异常征象。大脑结构或星形胶质细胞，小胶质细胞和神经元的数量也没 有差异。流式细胞分析显示小胶质细胞ZEB1的差异表达不影响外周免疫 细胞亚型的数目。
最后，我评估小胶质细胞的细胞凋亡和增殖速率。 在这个实验中，小胶 质细胞被称为CD11b + CD45low。 检查小神经胶质细胞凋亡和增殖的程 度揭示WT，ZEB1-TG和ZEB1-KD小鼠之间无差异。
总体而言，这些数据表明，在缺血性中风后，ZEB1与具有更多分枝形 态和较少反应性表型的小胶质细胞相关联。
ZEB1过表达介导小胶质细胞反应，通过TGF-b1依赖途径抑制星形胶质细胞 CXCL1的产生。 CXCL1降低导致嗜中性粒细胞浸润入大脑减少，从而减少CNS炎 症。我们的研究结果表明了ZEB1在小胶质细胞神经炎症中的重要性，并提出了减 少中风引起的神经损伤的潜在手L1