肝阳上亢型高血压模型及评价初探

浙江中医药大学学报２００８年９月第３２卷第５期　

肝阳上亢型高血压模型及评价初探　

胡淑平。。　吕圭源　于平野　陈素红　张　园　张跃文　Ｉ．温州医学院　温州　３２５０３５　２．浙江中医药大学　

摘要：为更好的应用于疾病实验研究，预期达到病症结合的目的，对肝阳上亢型高血压模型的建立方法进行总结并对其评价指　标予以归纳和探索。　关键词：肝阳上亢；高血压；模型；评价　中图分类号：Ｒ２８５．５文献标识码：Ａ文章编号：１００５—５５０９（２００８）０５　０６９８—０４　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｔ０　Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ　Ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　Ｈｙｐｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｉｖｅｒ　Ｙａｎｇ　Ｈｕ　Ｓｈｕｐｉｎｇ．Ｌｖ　Ｇｕｉｙｕａｎ．Ｙｕ　Ｐｉｎｇｙｅ．ｅｔ　ａｌ　Ｗｅｎｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌ—　ｌｅｇｅ（３２５０３５）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｂｅｔｔｅｒ　ｓｅｒｖｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ｒｅａｃｈ　ｆｏｒｅｃａｓｔｅｄ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ，ｉｔ　ｓｕｎｌｓ　ｕｐ　ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｈｙｐｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　Ｙａｎｇ，ａｎｄ　ｍａｋｅｓ　ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｉｔｓ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｉｎ—　ｄｅｘ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｈｙｐｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　Ｙａｎｇ；ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ；ｍｏｄｅｌ；ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　从历年来文献中报道过的具有“病证结合”特征　时间缩短、痛阈降低、肾小动脉硬化等近似人类高血　

的高血压肝阳上亢证动物模型，并总结其评价指　压病肝阳上亢证的特征。是一种操作简单，重复性　标～…一症状和体征、组织学检查、相关生化指标和神　好，具有“病”“证”结合特征的动物模型。这种模型　

经递质检测和方药测证。　建立的方法，被模仿的最多，但ＳＨＲ的价格比普通　

１　模型的建立　的大鼠高近ｌ０倍。　１．１　黄文权等　采用多巴胺静脉注射法模拟肝阳　１．４何纲等　采用慢性束缚应激法　结合悬吊应　亢证实验动物模型，并以生理盐水作为对照，方法　激法ｌ。　造成肝。肾阴虚证，用双肾双夹法制备肾血管　

简便易行，是国内外公开报道的首例，但该模型维持　性高血压。所有模型大鼠均血压明显升高；出现烦　

时间短，各观测指标均于停药３～４ｄ后完全恢复正　躁、易激惹、眼结膜深红、头晕、口渴、大便干结等症　常，因而其应用受到很大限制。　状或体征。束缚应激大鼠模型ｌ。　是一种心理性应激　

１．２　肖纯等　。　采用双肾双夹加灌附子汤复制的高　模型。中医学形神统一观认为，形受束缚则情志易　

血压肝阳上亢证模型，基本符合肝阳上亢证的病因　郁怒，故理论上认为该模型符合人类肝气郁结病因　

病机，且出现了类似肝阳上亢证临床表现，如眩晕、　病机。乔明琦等¨７　对束缚应激大鼠的整体反应及疏　

口渴、烦躁易怒等症状和血浆去甲肾上腺素（ＮＥ）、　肝理气中药疗效观察结果表明，该模型的中医证型　

肾上腺素（Ｅ）显著升高，脑干ＮＥ明显增高等神经递　为肝气郁结。包天桐　研究表明，悬吊应激小鼠具　质指标，该模型具有“疾病”、“证状”、“病理生理”结　有类似中医“肾虚证”的某些病理变化，可用于补。肾　

合特征，但手术损伤较大，容易造成动物死亡。　药及其他补益药的研究。因此，本研究中对大鼠实　

Ｉ．３　鄢东红等　选用自发性高血压大鼠（ｓＨＲ）加　施束缚加悬吊应激，试图模拟人类肝气郁结证一肝　灌单昧附子汤４周，造成高血压肝阳上亢证模型。　肾阴虚证的发生、发展过程。该模型能够部分模拟　附子乃辛甘大热之品，能温一身之阳，久用必耗伤精　人类高血压肝阳上亢证的病因病机和发病特点。　

血，夺肝肾之阴而致肝肾阴虚，阴不潜阳而肝阳偏　１．５　王钦茂［８　等采用温里药、麻黄碱和盐水复合法　

亢，因此采用灌服附子汤４Ｗ的方法是依据肝阳上　给大鼠造模，前者为“肝阳上亢”证所设，不能引起高　

亢证的病因病机设计的。ＳＨＲ肝阳上亢证模型具有　血压；盐水则相反。又因麻黄属解表药，与证型不符　血压稳定升高、易激惹程度增加、饮水量增加、旋转　而选用麻黄碱，它可升压又有拟交感作用，但单用时　

基金项目：同家自然科学基金支助项目（Ｎｏ：９０７０９０２６）　Ｆｕｎｄ　ｐｒｏｊｅｃｔ：Ｉｔｅｍ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（Ｎｏ．９０７０９０２６）　

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模型成功率较低，且动物死亡率高。三种因素综合　应用后，大鼠除血压升高外，出现烦燥不安、易激怒、　

尖叫，同笼动物相互撕打、咬人等攻击行为，并且饮　

水量和排尿量增加，尿内儿茶酚胺类物质升高，具有　

交感一肾上腺髓质功能增强表现，以及ｃＡＭＰ升高，　及６一酮前列腺素Ｆ１ａ／血栓素Ｂ　比例下降等三项主　

要指标的改变，与临床上基本一致。造模无需手术，　其成功率约８Ｏ　，时间为４周左右，此后血压趋向稳　

定。　

可见模型的建立基本可以归纳为以下两个方　

面，一方面是制造肝阳上亢模型的方法，包括①使用　

一种或几种温里药、②应激法、③儿茶酚氨类等具有　

拟交感作用的物质（多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺　素或者麻黄碱）的使用；另一方面是高血压模型获得　

的方法　］。这方面的研究已经比较成型，主要种类　

有①肾性高血压模型；②内分泌性高血压模型；③神　

经原性高血压模型；④遗传性高血压模型。当这两　

方面相结合时，就获得了征型结合的肝阳上亢型高　

血压模型。　

２模型的评价　分成两方面，其一是对高血压模型的评价，国内　

外已广泛使用各种测量动物血压的仪器，测量和评　

价方法也比较成熟［９　；其二是检测动物肝阳上亢模　

型的形成。　

２．１　ｌ临床具体症状指标及评定方法　２．１．１　陈华德等　中医辨证标准　参照《中医临　

床诊疗术语证候部分》（国家技术监督局１９９７年发　

布），主要证候为眩晕、头痛、面红目赤或面部烘热、　

烦躁易怒、口苦而渴、脉弦。具有以上６项中４项主　

症者，无或兼ｌ～２项肝肾阴虚症状者即可辨为肝阳　

上亢证。这是被普遍肯定的评价方法。　２．１．２张亚东等　副参考《实用中医内科学》所制定　

的辨证标准ｌ１　，通过临床观察及流行病学调查，参照　

现代医学的方法，将证候分为主症和次症两类，制定　

出肝阳上亢证的辨证标准。即主症：眩晕，头痛，面　

部烘热，烦躁或情绪易激动，脉弦；次症：口干苦，耳　鸣，肢麻，失眠，舌红或绛，苔黄或腻，脉细数有力。　

认为在上述病症中若有４项主症合２项次症，或２项　

主症合３～４项次症，即可辨为肝阳上亢证。此法包　

括的症状较多但临床应用不多。　２．１．３陈国林等口　制定的肝阳上亢证辨证标准为　

①眩晕；②头痛；③面部烘热；④烦躁易怒；⑤口苦而　

渴；⑥脉弦。以上６项中具有４项，无或兼有１４２项　

肝肾阴虚症状（记分不超过３分以便与肝肾阴虚证　

鉴别）辨证项记分超过１０分。记分标准为：将症状　

６９９　程度分为无、轻、中、重、严重５级，分别记０、１、２、３、４　

分，无法记分的症状如味觉、面色等记有无，分别记　

１、０分，舌脉与证相符的记１分，不相符的记０分。　此方法虽然选用记分的方法以求量化，但因为症状　

等级区分难以确定而不很实用。　

２．２据上而拟定实验动物模型的筛选症状指标为：　

２．２．１外观和性情变化（与其对应的人的症状为第　

④项烦躁易怒）　

２．２．１．１　外观　指毛色是否有光泽及双眼结合膜　颜色是否加深变红ｌ２　

２．２．１．２性情变化　根据文献报道的分类方法主　要有３种，易激惹程度都分为３级。方法一（　。］：　

Ｉ级指捉持颈部时尖叫、惊跳；Ⅱ级指捉持颈部时咬　

人；Ⅲ级指提尾时尖叫、惊跳甚至咬人或同笼大鼠频　繁打斗；方法二［　：１级：喜跳跃；２级：在ｌ级基础上　

加喜抓铁笼；３级：在２级基础上加咬人、咬铁笼。方　法三［１　：Ｉ级指活动增加、经常有跳跃和咬铁笼行　

为；Ⅱ级指在工级基础上，兼有捉持颈部时尖叫、惊　

跳；Ⅲ级指在Ⅱ级基础上，兼有同笼大鼠频繁打斗行　

为。　

２．２．２饮水量　¨　（与其对应的人的症状为第⑤　

项口苦而渴）每个鼠笼放大鼠１只，用相同容积的水　

瓶供水，２４ｈ前后水瓶重量的变化值即为每日饮水　

量。　２．２．３痛阈（与其对应的人的症状为第②项头痛）　采用热板测痛法口　，热板温度为５５．０℃±０．５。Ｃ，从　

大鼠放人开始到舔后足底／后脚爪或跳跃运动所经　

历的时间为痛阈。或采用尾电刺激法口　］，用痛阈测　

量仪作方波脉冲电流刺激：频率８Ｈｚ，波宽２ｍｓ，电压　从零开始，由低到高直至大鼠出现嘶叫，以此时的电　

压值为痛阈。　

２．２．４周围血管充盈（与其对应的人的症状为第③　项面部烘热）分为Ⅲ级ｌ１］：Ｉ级：双耳及头颈部毛细　

血管充盈，Ⅱ级：在工级基础上加躯干部毛细血管充　

盈，Ⅲ级：在Ⅱ级基础上加四肢毛细血管充盈，腹壁　

静脉轻度怒张。　２．２．５心脏血流动力学测定ｒ１。　其中的心率即脉搏　

数（与其对应的人的症状为第⑥项脉弦）氨基甲酸乙　

酯ｉｐ麻醉，分离右侧颈总动脉，插入充满肝素生理盐　

水导管至左心室，另股动脉插管测血压。联压力换　

能器，同步输入多功能信号处理系统。记录心率　

（ＨＲ）、收缩压（ＳＡＰ）、舒张压（ＤＡＰ）、左室压　（ＬＶＳＰ）、左室最大变化速率（±ｄｐ／ｄｔｍａｘ）、左室舒　

张期末压（ＬＶＥＤＰ）等指标。此外，经颅多普勒检测　

大脑中动脉平均血流速度、收缩峰血流速度增高。　盛　菇　

嘏　

奄蛩＿匕　煌　旨Ｊ

匮灌嗤　盛　菇　

－　嘏　高血压肝阳上亢证白天血压高于夜间Ｌ１　６￣＿。　

２．２．６旋转时问（与其对应的人的症状为第①项眩　

晕）根据文献　方法自制旋转平台，将大鼠置于旋　转平台上，分３次每隔１０ｓ调速１次，转速分别为　

ｌ５、３０、４５ｒ／ｍｉｎ，记录跌下时间，若２ｍｉｎ仍不跌下则　

停止测试。　２．２．７其他　可以观察大便性状、舌象ｌ『１　；尿量Ｅｓ］；　

心、肾脏器检测，计算脏器系数，并作肾脏病理组织　学观察　Ｊ：先１Ｏ　福尔马林固定，再石蜡包埋，切片　

（５Ｉ　ｍ），常规ＨＥ染色，在光镜下观察有无肾人球小　

动脉硬化及肾小球萎缩等。　

２．２．８模型的神经递质及生化指标　

为更加全面客观的评价模型，可以参考的神经　

递质及生化指标有。　２．２．８．１　血浆ＮＥ、Ｅ及脑干ＮＥ、５　ＨＴ测定　肝阳　

上亢证最主要的病理生理基础为外周交感——肾上　腺髓质功能偏亢　。　，表现为血、尿儿茶酚胺增高，肖　

纯等　纠实验发现肝阳上亢组模型大鼠出现与此相同　

的病理生理变化，血浆ＮＥ、Ｅ显著升高。脑内ＮＥ、　

５一ＨＴ的动态平衡与中枢痛阈的升降变化及情绪波　动有密切关系Ｅ２１　：当脑内ＮＥ明显升高和（或）５－ＨＴ　

明显下降时，将使痛阈明显下降造成头痛，并出现烦　躁易怒、躁狂、攻击行为等，本模型大鼠脑内ＮＥ明显　

升高、５－ＨＴ明　下降，可能是肝阳上亢证发生头痛、　烦躁易怒等证侯的重要机制。所有动物均于实验第　

８周末断头处死，将血液在４℃３　０００ｒ／ｒａｉｎ离心　

１５ｍｉｎ，分离出　浆，放一８Ｏ℃冰箱中保存待测，采血