化学发光免疫分析方法是目前取代临床上应用的放免和酶联检测方(精)

血检四项化学发光法调查

目前血检四项（HBsAg、HCV、HIV、TP）的检测方法主要有酶联免疫（ELISA）、核酸扩增（PCR）、胶体金标记、以及化学发光（CLIA）。现就CLIA在血检项目中的应用情况做一调查分析。

一．化学发光免疫分析法简介。

化学发光免疫分析法(Chemiluminescence imnunoassay，CLIA)是建立在放射免疫分析技术(radioimmunoassay，RIA)理论的基础上，以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法。

CLIA是利用化学反应中释放大量自由能，产生激发态中间体，当其回到稳定的基态时发射出光子（hν），用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。

表1 化学发光法类型

类型 原理及试剂 发光类型

化学发光免疫分析（CLIA） 用化学发光物质直接标记抗原或抗体组成 吖啶酯（acrydinum esters）

化学发光酶免疫分析（CLEIA） 不用化学发光物直接标记免疫制剂。在酶免疫分析完成后加入化学发光底物，产生化学发光 1.辣根过氧化物酶(HRP)/H2O2/Luminol系统；2.碱性磷酸酶(AP)/1，2二氧乙烷稳定衍生物（AMPPD）系统

电化学发光免疫分析（ECLIA） 应用电致化学发光标记物与电化学手段相结合产生化学发光的免疫分析 三联吡啶钌（Rucbpy）32+

三丙胺氨系统

微粒子酶联免疫

（MEIA）* 微粒子作为载体，标记酶催化底物产生荧光 碱性磷酸酶作用于4_ 甲基磷酸伞型酮生成4-甲基伞型酮(MU)，MU产生出荧光，其荧光生成速率与被测物浓度相关。

- 1 - 化学发光与免疫荧光方法学对比

一、《化学发光与免疫荧光方法学对比》

1.概述

化学发光（CL）和免疫荧光（IF）是用于检测特定病原体或病原体的特异性抗体的两种测定方法。CL和IF之间的最显著差异是不同的技术原理，以及其具有不同的优势和劣势。下面将比较这两种技术的方法学、特点和限制。

2.方法学对比

化学发光和免疫荧光是两种完全不同的化学和物理技术。

（1）化学发光：CL技术使用放射性核素结合到抗体或含有特异性抗原的配体上，将其作为一种探针来检测特定目标物质。检测物质特异性结合探针后，将其照射到发射波长范围的暗室，从而得到特定的发光细胞图像。

（2）免疫荧光：IF技术通过使用荧光标记抗体或特异性抗原，以可见光范围的荧光作为探针，检测特定的抗原或抗体。被检测物质与荧光探针结合后，将其照射到可见光范围的暗室，从而得到特定的荧光细胞图像。

3.特点对比

（1）CL技术可用于快速检测特定的物质：通过使用核素，可以迅速检测出特定的物质，这种技术不受受体或抗原的数量或特性影响。

（2）IF技术可以更简单、更灵敏地检测出特定物质：在IF技术中，荧光标记的抗体和抗原可以特异性地结合，使得能够更灵敏地 - 2 - 检测出特定的物质，且不会受受体或抗原的数量或特性影响。

4.限制对比

（1）CL技术存在一定的检测限制：CL技术受探针的数量的影响，抗原和抗体的结合特异性不强，因此无法准确检测受体或抗原的特定性。

（2）IF技术存在一定限度的检测效果：IF技术受荧光标记抗体和抗原的数量以及荧光强度的影响，因此无法准确检测受体或抗原的特定性。

综上所述，化学发光和免疫荧光有许多不同的方法学特点和限制，因此它们有不同的优势和劣势。取决于检测病原体的要求，可以根据检测目标的特点，选择适合自己的技术来使用。

免疫法和化学发光法

免疫法是一种利用生物学技术测定生物样本中特定分子的方法。这种方法主要利用生物分子（例如抗原、抗体、酶等）之间的特异性反应来检测生物样本中的目标分子。免疫法被广泛用于检测临床样本中的疾病标志物、药物、毒素、微生物等物质，以及在环境、食品、水质等领域中的检测。

在免疫法中，典型的方法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光、免疫胶体金等。这些方法中，ELISA被广泛使用，具有高灵敏度和特异性的优点。它的基本原理是用酶标记的标记抗体与目标抗原结合，并通过酶的反应来测定目标抗原的存在。此外，Western blot方法常用于检测抗体对蛋白质的结合，包括特异性抗体和糖蛋白成分的检测。免疫荧光、免疫胶体金等方法也被广泛使用于病毒、微生物等的检测中。

化学发光法是一种利用光化学反应测定物质浓度的方法。这种方法主要是利用特定化学反应发出光，且光的强度与检测物质的浓度成正比。化学发光法的优点在于具有极高的灵敏度和特异性，适合于测定低浓度的分子、微生物等物质。

在化学发光法中，常用的方法包括荧光素氧化物酶发光法（luminol法）、鲁米诺发光法（luciferin-luciferase法）、电化学发光法等。这些方法中，luminol法被广泛使用，用于检测过氧化物酶、铁、镁等物质的存在。在luminol法中，用过氧化氢作为试剂将luminol氧化，发生光反应产生荧光。此外，luciferin-luciferase法也被广泛使用于检测生物样本中ATP、细胞浓度等物质的存在，它利用了luciferin和luciferase之间的化学反应产生光的原理。

总的来说，免疫法和化学发光法是一种高度敏感、特异性强且可靠的分析方法，在临床医学、环境监测、食品安全等多个领域有广泛的应用前景。

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乙肝五项指标两种常用检测方法的比较分析

作者：赵治凤 贾秋龙

来源：《中国当代医药》2012年第08期

[摘要] 目的 比较分析乙肝五项指标两种检测方法（TRFIA和ELISA）的应用价值。 方法

对501份血清分别采用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）和酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测乙肝五项指标，并统计分析两种方法的检测结果的阳性率和阳性符合率。 结果

两种方法检测血清中的乙肝五项的阳性率差异均无统计学意义（P > 0.05），乙肝五项指标的阳性符合率分别是HBsAg 99.6%、HBsAb 85.7%、HBeAg 98.2%、HBeAb 97.6%、HBcAb

97.1%。 结论 TRFIA和ELISA两种方法对检测乙肝标志物乙肝五项均有较高的特异性和敏感性，ELISA法方便快捷，更适合基层医院使用，但易出现假阳性和假阴性，TRFIA法不仅特异性强、敏感性高， 并且能够准确定量，与ELISA法相比，能更好地反映患者体内乙肝病毒复制状况、乙肝疫苗接种后免疫效果以及抗病毒药物的疗效。

[关键词] 乙肝五项指标；时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）；酶联免疫吸附试验法（ELISA）；阳性率；符合率

[中图分类号] R512.6+2[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2012）03（b）-0078-02

目前，在各级医院实验室检测乙肝病毒血清标志物开展最为广泛的项目就是乙肝五项指标[1]，乙肝五项指标俗称“两对半”，包括乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）、核心抗体（HBcAb），在许多方面如诊断乙肝、乙肝判断愈后、筛选献血员、乙肝的流行病学调查、判断人群对乙型肝炎的免疫水平，对食品、保育及饮水管理行业人员定期进行健康体检等起着重要的作用[2]。因此，选择一种特异、敏感、稳定的实验室检测方法检测乙型肝炎病毒的五项指标显得尤为重要，为此，本文选取了临床实验室较为常用的ELISA法和TRFIA法对501份肝病患者的血清标本进行了比对分析，现将结果报道如下：