HPLC法测定不同产地大黄中四种蒽醌类化合物含量

蒽醌

2.1标准曲线的绘制：精密量取上述标准溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别至于25ml容量瓶中，在水浴上挥净乙醚，放凉，分别加5%氢氧化钠—2%氢氧化铵混合碱液至刻度，摇匀，以5%氢氧化钠—2%氢氧化铵混合碱液为空白对照，在490nm下，以1cm比色杯测定吸光度，用回归法求标准曲线方程。

2.2供试品溶液的制备及总蒽醌含量的测定：取本品50粒，倾出内容物，精密称定供试品内容物3g，于250ml烧瓶中，加5N硫酸45ml，直火加热水解2h，加入氯仿40ml，萃取3次（40ml，30ml，30ml），萃取液用蒸馏水洗涤2次（20ml，20ml），再用5%氢氧化钠—2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取4次（30ml，20 ml ，20ml，20ml），合并萃取液，用氯仿洗涤数次至氯仿层无色，弃去氯仿层，用5%氢氧化钠—2%氢氧化铵混合碱液定容至100ml，摇匀，以5%氢氧化钠—2%氢氧化铵混合碱液为空白对照，在490nm下，以1cm比色杯测定吸光度，由线性方程计算即得供试品溶液的浓度。

蒽醌类化合物按结构的不同可分成羟基蒽醌类、氧化蒽酚及蒽酚类、二蒽酮类。目前其提取方法主要采用溶剂提取法，如浸渍、渗漉、连续回流提取等方式，所用的溶剂主要有乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、苯、石油醚、吡啶、丙酮、硫酸溶液、盐酸溶液及氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化铵等溶液。其含量测定方法有重量法、荧光法、比色法、极谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等，而单味植物药或其复方制剂中的蒽醌化合物含量，一般以大黄素或大黄酸、1，8-二羟基蒽醌为标准测定游离蒽醌或总蒽醌，结合蒽醌的量等于总蒽醌减去游离蒽醌。

1 比色法

根据蒽醌类及其苷大多数是黄色或橙红色的，羟基蒽醌能溶于碱溶液中而显红或紫红色；蒽酚和二蒽醌与碱液不显红色，只能呈黄色，需经氧化成羟基蒽醌后才与碱作用显红色；羟基蒽醌类因结构不同与醋酸镁的甲醇溶液反应可显橙、红、蓝、紫等色的性质而比色测定。

中药大黄的成分检测方法研究

中药大黄不仅仅是中药材同时也可作为食材，在使用的过程中为了保证药品的纯度在对其进行检测时可利用现代科技技术。本次研究的目的则是分析中药大黄的几种检测方法。

标签：中药；大黄；检测方法；成分

在中药中大黄是常见且常用的一种药材，应用范围较广，大黄具有斜热通肠、凉血解毒、祛瘀等功效[1]。大黄的应用价值比较高，分布在四川、甘肅等地区，然而大黄的种类比较多，但是能用的却比较少。

1 HPLC检测法

流动相为甲醇-1.0%冰醋酸，在430 nm下进行检测，在图谱中有23个共有峰，针对12个来自不同产地及不同时间段收集样本来说其相似度>90%，在检测中药大黄成分时具有专属性指纹图谱的优势。利用微乳电动毛细管色谱法对来源不同掌叶大黄监理指纹图谱，采用没有经过图层的石英毛细管柱，以SDS、正丁醇、硼砂溶液与正辛烷作为缓冲液，再添加由乙腈组成的O/W型微乳体系，将分离电压及检测波长分别设置为18 kV及280 nm。在检测完成之后通过聚类分析及相似度对其进行分析，然后将研究的掌叶大黄分为道地药材、一般药材及次品[2]。在确定大黄指纹图谱共有的模式之后，利用HPLC法对掌叶大黄不同炮制品水提取物的指纹图谱，再根据灰关联度分析的方法对止血谱效的关系进行分析。大黄经炮制后鞣质类成分及蒽醌类成分的含量变化对大黄止血效果有着重要的影响作用。当以流动相为乙腈-水-1%冰醋酸时，在254 nm之下可有效的反应出了大黄中含有的化学成分指纹图谱，因此可确定大黄指纹图谱最佳进样量时61.35 ug。

2 薄层扫描色谱法

利用超临界流体萃取薄层色谱扫描方法对大黄中所含大黄素进行测定，超临界流体萃取技术具有提取物纯净的优势，可以直接分析点样。使用薄层层析方法分离大黄中游离型及结合型蒽醌类，然后再利用薄层扫描的方法对其含量进行测测定。在硅胶G层上使用正己烷-乙酸乙酷-甲酸对生大黄、熟大黄及配方颗粒中的大黄素进行测定，同时使用双波长薄层扫描仪进行测定。

实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识【精选-PPT】

实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离与检识

一. 实验目的

1. 熟悉并掌握大黄中游离蒽醌的提取分离与检识的基本原理和方法；

2. 学会用硅胶柱层析法分离大黄提取物中的游离蒽醌；

3. 学会用TLC法检测游离蒽醌的纯度和确定游离蒽醌的Rf值；

4. 了解游离蒽醌的酸碱性质。

二. 实验原理

游离蒽醌：是大黄素（还有大黄酸、甙）的主要成分之一。它是一种有机物，结构中有两个官能团——酮基和芳环。它的化学性质是一种具有两个官能团的酮类化合物，也是一种大环芳香族化合物，具有吸氧性，容易被还原为蒽醌酚，具有明显的紫外吸收，所以在一般试验室条件下，易被检测到。

大黄提取物中游离蒽醌的提取分离与检识方法：

①提取：将大黄粉末催化加热于浓H2SO4溶液中，经水蒸气蒸馏、提取、分液提取游离蒽醌。

②分离：用硅胶柱层析法分离游离蒽醌。硅胶柱层析法的原理是根据不同的化学性质，通过分配系数，用不同的溶剂作为流动相，将混合物的成分逐一分离出来，从而达到分离的目的。

③检测：用TLC法检测游离蒽醌的纯度和确定游离蒽醌的Rf值。

三. 实验仪器与药品

仪器：天平、电热板、恒温水浴、溶液振荡器、玻璃试管、吸滤瓶、硅胶柱、白瓷漏斗、蒸馏器、滴定管、吸管、刮刀、紫外分光光度计等。

药品：大黄提取物、浓H2SO4、90%乙醇、十氢蒽醌、石英硅胶等。

四. 实验步骤

1. 提取游离蒽醌

取2g大黄粉末加入25ml浓H2SO4液中，加少量的多元醇作为催化剂，保持温度在98℃左右，反应2.5小时。冷却后将混合液加入烧杯中，加入50ml蒸馏水振荡搅拌。放置沉淀，用滤纸过滤得到粗品，洗涤过滤渣用水，过滤液集中。去除多余的水分，用90%乙醇提取游离蒽醌。

2. 硅胶柱层析分离

在硅胶柱中装入3g石英硅胶，用去离子水洗涤柱，然后用90%乙醇填充柱床5-10ml，使之不能流出。将上述提取物均匀地吸入硅胶柱中，柱头用90%乙醇堵住，用90%乙醇洗涤柱。开泵，以90%乙醇作为流动相，以无菌的小试管收集每3-4滴从柱床流出的溶液，检测游离蒽醌。

论文标题

高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量

班 级 药学30801

专业名称 药学

系部名称 制药工程系

河北化工医药职业技术学院

- 1 毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明

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