淋病奈瑟菌3种检测方法结果分析(1)

检验医学与临床２００９年１０月第６卷第２Ｏ期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２００９，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．２０　

淋病奈瑟菌３种检测方法结果分析　

黄培忠　，马　超　，黄静。（１．河南省睢县人民医院检验科４７６９００；‘　

２．河南省睢县疾病预防控制中心４７６９００）　

【摘要】　目的　分析评价淋病奈瑟茵（ＮＧ）３种检测方法的结果。方法　聚合酶链反应（ＰＣＲ）、细菌培养和革　

兰（Ｇｒａｍ）染色。结果ＰＣＲ共检测４６１份白带和尿道分泌物标本，Ｎ　ＤＮＡ阳·ｔ＇ｔ－１２３份，阳性率为２６．６８％，男性　

１０７份尿道分泌物，ＮＧＤＮＡ　４７份，阳性率为４３．３９　；女性３５份阴道分泌物，ＮＧＤＮＡ　７６份，阴性率为２１．４７　。　经统计学处理，男女之间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。细菌培养：３５份男性尿道分泌物检出淋病奈瑟茵８份，检　

出率为２２．８５　。Ｇｒａｍ染色２８８份标本，找到ＮＧ　４４份，检出率为１５．２７　。男性尿道分泌物２１Ｏ份，检出ＮＧ　３８　份，检出率１８．０９　，阴道分泌物７８份，检出ＮＧ　６份，检出率为７．６９　。３种检测方法经统计学处理，Ｙ　＝１５．６８，Ｐ　

ｄ０．０１，三组之间差异有统计学意义。结论　ＮＧ　３种检测方法以ＰＣＲ最为灵敏，且特异性强。细菌培养检出率次　

之。Ｇｒａｍ染色再次之。Ｇｒａｍ染色检出率虽较低，特异性高，在基层医院无ＰＣＲ设备及细菌培养条件者可首选，在　

男女性病患者症状明显，脓性分泌物较多，直接涂片作Ｇｒａｍ染色是一种经济实用、简便易行的检测方法。结果报　告快速，深受临床医生及患者的欢迎。有细菌培养条件的医院，如性病患者有症状，无论有无脓性分泌物，每例力争　在用药前作细茵培养＋药敏，一是通过细菌培养不但检出ＮＧ，还可检出化脓性球茵和Ｇ一杆菌，甚至一些真菌，如　

念珠茵。二是能得到耐药性监测，细菌对哪些抗生素耐药，避免使用，减少浪费医疗费用及耐药性茵珠产生。ＰＣＲ　

是一种比较先进的分子生物学检验技术，如Ｇｒａｍ染色未找到ＮＧ，细菌培养因用药末分离到细茵，应作ＰＣＲ检测，　

能显示出ＰＣＲ的优越性及独到之处。　【关键词】淋病奈瑟茵；　聚合酶链反应；　细茵培养；　革兰染色　

中图分类号：Ｒ３７８．１６；Ｒ４４６．６　文献标志码：Ｂ　文章编号：１６７２—９４５５（２００９）２０—１７５０—０２　

淋病（ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）是经典的性传播疾病之一，淋病奈瑟菌　

（ＮＧ）是淋病的病原菌，其检测方法多种，是诊断淋病的重要手　

段。本文收集、回顾、总结２００６年８月２７日至２００８年１２月　

２２日用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｅｏｎ，ＰＣＲ）、细菌　

培养及涂片革兰（Ｇｒａｍ）染色３种检测方法结果分析资料，以　

总结经验，进一步提高检验工作质量，供同道参考。　

１材料与方法　１．１材料来源男性来自本院皮肤性病专科就诊的患者，女　

性为本院妇科门诊患者。　１．２标本采集方法［１　男性患者如尿道口脓性分泌物较多，　

以特制小头棉拭子（经灭菌后使用）蘸取后接种于巧克力平板　

上。另取１支棉拭子取标本后涂片作Ｇｒａｍ染色。另取１支　

蘸取标本后置于盛有生理盐水的１　ｍＬ离心管内作ＰＣＲ，编号　

并记录有关症状体征。如无脓性分泌物，嘱患者用双手掰开尿　

道口，用上述棉拭子插入尿道约ｌ－Ｏ～１．５　ｃｍ旋转，稍停数秒　

钟取出，如上述方法作细菌接种，涂片作Ｃｒａｍ染色和将棉拭　

子盛于１　ｍＬ生理盐水离心管内作ＰＣＲ，编号登记并记录有关　

症状体征。女性患者由妇产科医师用窥器扩开阴道后用无菌　

棉拭子在阴道后穹窿部旋转一圈，停留数秒钟，置于已灭菌生　

理盐水１　ｍＬ的小青霉素瓶内立即送验。另取１支棉拭子如　

上述方法取标本后。立即涂片作Ｇｒａｍ染色。　

１．３检验方法　１．３．１仪器（１）ＰＣＲ仪器为美国电脑基因扩增仪（Ｓｉｎａ　Ａ—　

ｍｅｒｉｃａｎ　Ｂｉａｔａｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃａ　ＳＡＢＣ－ＰＣＲ）；（２）ＴＧＬ－１６Ｂ台式离心　

机；（３）ＸＫ９６一Ｂ快速混匀器，江苏姜堰新康仪器厂；（４）ＤＹＹ一　

Ⅲ一５型稳压稳流电泳仪及ＤＹＹ－３１型电泳槽，北京六一仪器　

厂；（５）ＵＶ－１５０紫外透射分析仪。　

１．３．２试剂　淋球菌ＰＣＲ检测试剂盒（Ｎ　ＤＮＡ　ＰＣＲ　ＫＩＴ　２０Ｔ／ＫＩＴ）洛阳华美生物工程公司，在有效期内使用。　

１．３．３方法吸取白带或尿道分泌物上清液３００　Ｌ于１　ｍＬ　

离心管内，离心１４　０００　ｒ／ｍｉｎ　５ｍｉｎ，弃云上清液，加入裂解液　５Ｏ“Ｌ充分振荡混匀，在沸水中裂解１５　ｍｉｎ，取出离心１４　０００　ｒ／ｍｉｎ　５　ｍｉｎ取上清液２　Ｌ加入混合物管内（ＰＣＲ反应管内加　

入混合物２６　Ｌ及液体石腊２滴），同时作阳性对照（上述混合　

物管内加入阳性对照２　Ｌ）。置于ＰＣＲ扩增仪内，９４℃预变　

性３００　ｓ（５　ｍｉｎ），９４℃４５　Ｓ，５５℃４５　ｓ，７２℃４５　Ｓ，循环３５圈。　７２℃延伸３００　ｓ（５　ｍｉｎ），取扩增物２Ｏ　Ｌ于预先制备好琼脂糖　

凝胶板上，８ｏ～１００　ｍＶ电泳１５　ｍｉｎ于紫外线透射分析仪上观　

察，与阳性对照区带相同，清晰规则整齐明亮较窄的区带判为　

阳性，否则为阴性。　１．３．４细菌培养培养基为巧克力平板，氧化酶试纸，葡萄　

糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖微量生化发酵管。培养条件３５　℃１Ｏ　ＣＯ　环境，按《全国临床检验操作规程》方法进行＿２］。　

１．３．５　Ｇｒａｍ染色按文献［２３方法进行。直接涂片找ＮＧ，　

油镜检查找到Ｇ一双球菌，咖啡豆形，成双排列，分布于白细胞　

内外，报告为“找到Ｇ一双球菌咖啡豆形，成双排列，分布于多　

形核细胞内外，形似淋球菌ｒ３］’，。　

１．４统计学方法采用ｘ　检验。　

２　结　果　２．１　ＮＧ－ＤＮＡ共检测４６１份白带＋尿道分泌物标本　见表　

１。经统计学处理ｘ　一２１．１８，Ｐ＜Ｏ．０１，男女之间检出率差异　

有统计学意义。　

表１　ＰＣＲ方法检出率男女之间比较（／２）　

注：Ｘ　＝２１．１８，Ｐ＜０．０１　ａ　

２．２细菌培养　３５份尿道分泌物，检出ＮＧ　８份，检出率为　

２２．８５　（见表２）。

　检验医学与临床２００９年１０月第６卷第２ｏ期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌ｜ｎ！　！！　竺　！！　！　：　：　：　

２．３　Ｇｒａｍ找ＮＧ共检测２８８份标本，找到ＮＧ　４４份，检出　

率为１５．２７　（见表２）。男性尿道分泌物２１０份，检出ＮＧ　３８　

份，检出率为１８．Ｏ９　，阴道分泌物７８份，检出ＮＧ　６份，检出　

率为７．６９　。３种检测方法经统计学处理　一１５．６８，Ｐ＜　０．０１，三组之间检出率有非常显著的差异。ＰＣＲ灵敏度最高，　

故检出率也较高，细菌培养次之，Ｇｒａｍ染色再次之。　

表２　ＰＣＲ、细菌培养、Ｇｒａｍ染色方法比较　

注：］ｃｚ　２１．１８，Ｐ＜ｏ．Ｏｌ。　

３讨　论　３．１　Ｇｒａｍ染色是一种古老经典的染色方法，简便实用，形态　

易认，在临床上应用非常广泛自如。本组资料作Ｇｒａｍ染色男　

性２１０份标本，３８份找到典型的ＮＧ，女性７８份标本，６份找到　

ＮＧ，检出率较男性低。作者认为，男女性病患者在急性淋球菌　

尿（阴）道炎时脓性分泌物增多，症状明显，特点显著，应先作　

Ｇｒａｍ染色，并在２　ｈ内向临床汇报结果ｎ］。一是及早明确诊　

断及时治疗，二是减少费用，减轻患者的经济负担，尤其在无　

ＰＣＲ设备的基层医院更为适合。　３．２细菌培养＋药敏　在淋病急性期，脓性分泌物增多，可将　

涂片Ｇｒａｍ染色前提，２　ｈ内报告结果，如找到ＮＧ且数量较　多，可取２块巧克力平板，一块作细菌分离，一块作药敏试验，　

这样药敏结果可在２４　ｈ读出，先报告临床，接下来再系统鉴定　细菌，做到诊断治疗两不误ｎ］。　

３．３　ＰＣＲ是一种灵敏度高、特异性强的分子生物学检验高　

新技术。本科自１９９９年８月２７日开展以来，应用前景良好。　

本组男性较女性检出率高，作者认为男性选择病例严格典型，　

梅毒血清学实验的方法评价　

李晓梅（云南省腾冲县人民医院检验科６７９１００）　１７５１　·　

症状明显，故检出率高，而女性多无症状，病例选择上不严格，　

故检出率低。通过本院几年的工作实践，有以下几点体会：（１）　

标本应新鲜，最好当天取标本，当天完成项目操作，因ＮＧ比较　

脆弱，对外抵抗力弱，菌体易自溶。本文有２份标本作Ｇｒａｍ　

染色找到ＮＧ，放置数日后作ＰＣＲ，ＮＧ－ＤＮＡ阴性。（２）ＰＣＲ　

整个操作过程要求严格无菌，工作室分试剂准备区、样品处理　

区、基因扩增区、产物分析区、彼此隔离，不得反向［５］。操作时　

戴手套、口罩，做好自身防护，离心管、一次性枪头用后弃去，尽　

管减少污染的概率及假阳性出现。（３）观察结果时真假区带要　

区别好，真区带即阳性区带整齐规则、清晰明亮、较窄，与阳性　

对照相同位置平行，似金条状。假区带即引物带，较宽模糊不　

甚透亮的区带与阳性对照不平行。应强调每次作阳性对照。　

（４）琼脂糖凝胶板５Ｏ　ｍＬ浇３次后不能反复使用，电泳槽内电　

泳液用３次后应及时更换，否则影响结果的准确性。在ＰＣＲ　

应用方面，如Ｇｒａｍ染色未找到ＮＧ，细菌培养因用药未生长细　

菌，应考虑ＰＣＲ检测，更能发挥其优越性及独到之处。　

参考文献　

［１］张秀珍．当代细菌检验与临床［Ｍ］．北京：人民卫生出版　

社，１９９９：２０８．　Ｅ２３叶应妩，王毓三．全国临床检验操作规程Ｉ－Ｍ］．２版．南京：　

东南大学出版社，１９９７：４８７．　［３］周庭银，赵虎．临床微生物学诊断与图解Ｉ－Ｍ］．上海：上海　

科学技术出版社，２００１：８４．　Ｅ４］过祥豹．现代临床微生物学理论与实践Ｅｃ３．西安：第四军　

医大学，１９９０：１７９．　

Ｅ５３武建国，童明庆．临床基因诊断［Ｍ］．南京：东南大学出版　社，２００２：８．　

（收稿日期：２００９—０６—０５）　

【摘要】　目的　探讨ＲＰＲ、Ｔｒｕｓｔ、免疫印迹法（ＷＢ法）、血凝ＴＰＰＡ法、ＥＬＬＳＡ法的敏感性。方法　ＲＰＲ、　

Ｔｒｕｓｔ、ＷＢ法、血凝ＴＰＰＡ法、ＥＬＬＳＡ法。结果　非特异性抗体检测：（１）ＲＰＲ试验结果，进口ＲＰＲ试剂检测８６份　梅毒血清，阳性８Ｏ份，阴性６份。阳性率９４．２　。国产ＲＰＲ检测８６份梅毒血清，阳性７８份，阳性率为９Ｏ．１％。１１４　

份对照血清中进口ＲＰＲ　１０份阳性，国产试剂２份阳性。结果经Ｙ　检验，差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。（２）Ｔｒｕｓｔ　

试验结果：试剂（１）、（２）检测８６份梅毒血清，均为８Ｏ份阳性，６份阴性，阳性率为９４．２　。对照组中，两种试剂均有　

２份阳性结果，经　检验，差异无统计学意义（Ｐ＞ｏ．０５）。特异性抗体检测：３种特异性抗体检测结果，ＴＰＰＡ法测　定８６份梅毒血清，７２份阳性，１４份阴性，阳性率为８３．７　。ＥＬＩＳＡ法测定８６份梅毒血清，７５份阳性，１１份阴性，　

阳性率为８７．２　。ＷＢ法测定８６份梅毒血清，８６例均为阳性反应，阳性率为１００　。３种特异性抗体检测法检测　

ｌｌ４份对照血清无一份阳性。结论　比较３种方法检测抗体发现，ＷＢ法最先检测到血清中的４７０００蛋白抗体，　

４７０００蛋白抗体可作为梅毒的早期诊断指标，４５０００、１５５００、１７０００蛋白抗体和心磷脂抗体在治疗后变化明显，可考