4个品种李树果实对李实蜂酶活力的影响

第４２卷第７期　２００　６年７月　林　业　科　学　

ＳＣＩＥＮＴＩＡ　ＳＩＬＶＡＥ　ＳＩＮＩＣＡＥ　Ｖｏ１．４２．Ｎｏ．７　Ｊｕ１．，２００　６　

４个品种李树果实对李实蜂酶活力的影响　

黄大庄　张　爽　张彦广　阎海霞　苏金浩　

（１．河北农业大学保定０７１０００；２．保定职业技术学院保定０７ｔｏｏｏ）　

摘　要：　通过野外调查并进行方差分析发现，大石早生等４个李品种受李实蜂危害程度存在显著差异。对取食４　个品种李果实的李实蜂幼虫进行羧酸酯酶、谷胱甘肽一Ｓ一芳基转移酶活力测定，结果表明：不同品种对李实蜂羧　酸酯酶、谷胱甘肽一Ｓ一芳基转移酶酶活力存在显著差异；进行酯酶同工酶及过氧化物酶电泳也显示：取食不同品　种李果的李实蜂酶谱有显著差异，且酶活力大小与抗虫性强弱有关系。　关键词：李；李实蜂；酶活力；抗虫性　中圈分类号：￥８８８　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１—７４８８（２００６）０７—００５６—０４　

Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｆｒｕｉｔｓ　ｏｆ　４　Ｐｌｕｍ　Ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｎｚｙｍｉｃ　

Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｈｏｐｌｏｃｏｍｐａ　ｆｕｌｖｉｃｏｎｉｓ　

Ｈｕａｎｇ　Ｄａｓｈｕａｎｇ　Ｚｈａｎｇ　Ｓｈｕａｎｇ　Ｚｈａｎｇ　Ｙａｎｇｕａｎｇ　Ｙａｈ　Ｈａｉｘｉａ　Ｓｕ　ＪｉｒＩｌｌａ　（１．如　ｔ妇　Ｕ，ａｖｅｒｓ￣ｏｆＨｅｂｅｉ　Ｂａｔｔｌｉｎｇ　０７１０００；２．Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＢａｏｄ／ｎｇ　Ｂａｏｄ／ｎｇ　０７ｔｏｏｏ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｒｅ　ＷｇＳ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｄａｍａｇｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｆｏｕｒ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｌｕｍ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｏｕｔｓｉｄｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｓｓａｙ　ｏｆ　ｃａｒｂｅｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ　ａｎｄ　ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ—Ｓ—ａｒｏｍａｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｏｆ　Ｈｏｐｌｏｃｏｍｐａ　ｆｕｌｖｉｃｏｎｉｓ　ｌａｒｖａ　ｆｅｅｄｉｎｇ　ｏｎ　ｆｏｕｒ　ｐｌｕｍ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏｔａｂｌｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｆ　ｃａｒｂｅｘｙｌｅｓｔ　ａｎｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　ａｌｓｏ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　Ｗａｓ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｐｅｓｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｌｕｍ；Ｈｏｐｌｏｃｏｍｐａｆｕｌｖｉｃｏｎｉｓ；ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ；ｐｅｓｔ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　

李实蜂（Ｈｏｐｌｏｃａｍｐａｆｕｌｖｉｃｏｎｉｓ）属膜翅目，叶蜂科，是李（Ｐｒｕｎｕｓ　ｓａｌｉｃｅｉｎａ）果的一种重要害虫。近年来，李　

实蜂为害日趋严重，给生产造成了巨大的经济损失。国内已有一些关于李实蜂的研究报道，但多偏重于生物　学习性和防治等方面，本实验通过野外调查发现，大石早生、大石中生、盖李、黑宝石４个品种李受李实蜂为　害程度存在显著差异，并测定了李实蜂幼虫的活力，探讨李实蜂体内解毒酶活力与李实蜂寄主植物之间的联　

系，为选育抗李实蜂品种及李实蜂的综合治理提供科学的理论依据。　

１材料与方法　

１．１李实蜂为害不同品种李果的调查分析　

在河北省易县解村林场５年生李树园调查，李各品种定植时采用随机区组设计。分别在每株树上、中、　下不同方位取样枝，统计结果数和受害果实数。将调查数据进行方差分析，以确定不同品种的受害情况。　

１．２不同品种李果对李实蜂酶活力的影响　

１．２．１李实蜂虫果的采集２００１年５月于易县解村林场采集李实蜂危害的大石早生、大石中生、盖李、黑宝　石４品种的李果，放入冰箱中一２０℃保存。　

１．２．２测定酶源的制备从虫果中取出幼虫，ｌ０头每组，放入玻璃匀浆器加水４　ｍＬ，冰浴匀浆，于４℃下　１０　０００　ｒ・ｍｉｎ．１离心３０　ｍｉｎ。取上清液作为酶源，浓度为２．５头・ｍＬ～，用于谷胱甘肽一ｓ一芳基转移酶活力测　

定；稀释浓度至０．２头・ｍＬ～，用于酶源蛋白质含量测定和羧酸酯酶活力测定。　

１．２．３酶源蛋白质含量测定蛋白质标准曲线的确定：采用考马斯亮蓝染色法将试剂混匀后，用７２００型分　

光光度计测５９５　ｎｍ处光密度值，重复６次，求蛋白质标准曲线方程。酶源蛋白质含量的测定：反应体系为　

０．２头・ｍＬ　酶源０．４　ｍＬ，水２．６　ｍＬ，０．０２％ＣＢＢ—Ｇ２５０　３．０　ｍＬ，总体积６　ｍＬ，混匀后，用７２００型分光光度计　

测５９５　ｎｍ处光密度值，重复６次，根据蛋白质标准曲线方程求酶源蛋白质含量。　

收稿日期：２Ｏ０４—０７—０７。　

基金项目：河北省林业厅“李实蜂发生规律与无公害治理技术”（９７１１１—２）。　维普资讯 http://www.cqvip.com 第７期　黄大庄等：４个品种李树果实对李实蜂酶活力的影响　５７　

１．２．４羧酸酯酶活力测定反应体系为：０．０４　ｍｏｌ・Ｌ～ｐＨ７．０磷酸缓冲液７　ｍＬ，０．０３　ｍｏｌ・Ｌ　醋酸一Ｇｔ一萘酯　酶底物液（含０．０００　１　ｍｏｌ・Ｌ　水杨酸毒扁豆碱）５　ｍＬ，０．２头・ｍＬ　酶源０．３　ｍＬ，在３７　ｃ【＝水浴中震荡３０　ｒａｉｎ，加　

入坚固蓝显色剂１　ｍＬ，２５℃恒温放置３０　ｒａｉｎ，７２００型分光光度计测６ＯＯ　ｎｍ处光密度值，重复６次。根据Ｇｔ一　

萘酚标准曲线方程求出酶促生成的Ｇｔ一萘酚量。对酶的比活力进行方差分析。　

１．２．５谷胱甘肽一Ｓ一芳基转移酶的活力测定反应体系为０．０６　ｍｏｌ・Ｌ～ｐＨ７．０磷酸缓冲液（含０．００２　ｍｏｌ・　Ｌ　乙二胺四乙酸）５．２　ｍＬ，０．０５　ｍｏｌ・Ｌ　还原型谷胱甘肽底物液０．６　ｍＬ，０．０３　ｍｏｌ・Ｌ～２，４一二硝基氯苯丙酮　

底物液０．２　ｍＬ，２．５头・ｍＬ　酶源０．２　ｍＬ，总体积６　ｍＬ，在２５　ｃＩ＝下反应５　ｒａｉｎ，分光光度计测３４０　ｎｍ处吸光度，　

重复３次，根据酶源蛋白质含量求出酶的比活力，对酶的比活力进行方差分析。　

１．２．６电泳酶源制备从不同品种李虫果中取李实蜂老熟幼虫，每组１０头，放人玻璃匀浆器中，加样品提　取液（ｐＨ　８．０　Ｔｒｉｓ—ＨＣ１缓冲液）１　ｍＬ匀浆，再加１　ｍＬ提取液冲刷匀浆器，洗人离心管，放人离心机中于４℃　

下１０　０００　ｒ・ｒａｉｎ　离心１５　ｒａｉｎ，取上清夜，置于冰箱中备用。　１．２．７　同功酶电泳采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳。分离胶浓度为１２％、浓缩胶浓度为３．７５％，电极缓　

冲液为ｐＨ８．３　Ｔｒｉｓ一甘氨酸缓冲液。每个样品槽点样量为３５　。电泳开始时为２０　ｍＡ稳流，进入分离胶后　

３０　ｍＡ稳流，电泳５　ｈ左右。　１．２．８酯酶及过氧化物酶染色酯酶染色：电泳结束后，凝胶用蒸馏水洗涤数次，浸入底物和显色液混合液　［醋酸一１一萘酯０．０２５　ｇ，醋酸一２一萘酯０．０２５　ｇ，坚牢蓝ＲＲ０．１　ｇ，加丙酮４　ｍＬ溶解后，加磷酸缓冲液　

（ｐＨ７．０，０．１　ｔｏｏｌ・Ｌ　）定容至１００　ｍＬ］中约３０　ｍｉｎ，到黑褐色酯酶带清晰为止。用蒸馏水漂洗几次，固定于　７％醋酸液中。第３天进行照相。过氧化物酶染色：电泳结束后，凝胶用蒸馏水洗涤数次，浸入染色液（７０　ｍｇ　

抗坏血酸，加入２０　ｍＬ联苯胺储备液，２０　ｍＬ　０．６％Ｈ２Ｏ　，Ｈ２Ｏ　６０　ｍＬ）中，待出现酶带，立即倒出染色液。用蒸　

馏水洗涤干净，即用水保存。第２天照相。　

２结果与分析　

２．１不同品种李树受李实蜂为害情况　

将１９９８、１９９９年解村林场４个品种调查统计结果反正弦转换，进行统计分析，如表１。经方差分析，李实　蜂对各品种的危害程度存在极显著差异。进一步利用新复极差法对比各处理的平均值，如表２。由此可知，　李实蜂对４个品种的李果为害差异极其显著，且黑宝石受害最重，大石早生受害最轻。　表１解村林场不同品种李树受害情况　Ｔａｂ．１　Ｓｕ　ｒｅｒ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｉｍｎ　ｉｎ　Ｘｉｅｅｕｎ　ｆｏｒｅｓｔ　ｃｅｎｔｅｒ　

２０００年解村林场盖李、黑宝石、　大石早生、大生果实被害率平均值分　

别是８１．９５％，９０．ｏ４％，８１．１５％和　

７６．４０％。将其进行反正弦（ａｒｅｓｉｎ　

置“　）转换，方差分析结果表明果实受　

害率差异显著。进一步利用新复极差　法对比各处理平均值。结果见表３。　

可知，李实蜂对４个品种的李果危害　表２多重比较表　Ｔａｂ．２　Ｍｕｌｔｉ－ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　

表３多重比较表　Ｔａｂ．３　Ｍｕｌｔｉ－ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　

差异显著，其中黑宝石受害最重，大石中生受害最轻。且黑宝石与大石中生达极显著水平，结果与１９９８、１９９９　

年调查结果基本一致。说明不同品种的李树对李实蜂的抗性存在差异。

　维普资讯 http://www.cqvip.com ５８　林业科学　

２．２取食不同李树品种的李实蜂幼虫羧酸酯酶、谷胱甘肽一Ｓ一芳基转移酶活力测定（表４）　羧酸酯酶比活力的大小顺序为盖李＞大石早生＞大石中生＞黑宝石，取食盖李的李实蜂幼虫羧酸酯酶　

活性最高，比活力为４６．０２９　３。取食黑宝石的李实蜂羧酸酯酶活性最低，比活力为２９．３１０　０，两者相差１．５７　

倍。方差分析表明，４种李树品种对李实蜂幼虫羧酸酯酶的影响存在显著差异。经多重比较，盖李、大石早　

生、大石中生与黑宝石之间存在显著差异。　谷胱甘肽一Ｓ一芳基转移酶活力的大小顺序为黑宝石＞大石中生＞大石早生＞盖李，方差分析表明，４　

种李树品种对李实蜂幼虫谷胱甘肽一Ｓ一芳基转移酶的影响存在显著差异。　裹４取食不同李树品种的李实蜂幼虫羧酸蘸蕊、谷胱甘肽一Ｓ一芳基转移蕊活力测定结果　Ｔａｂ．５　Ｃａｒ￣ｘｙｉｍｅｒａｓｅ＠ｌｌｚｙｍｅ（ＣＥ）。Ｇｉｕｔａｔｈｉｏｎｅ—Ｓ－ａｒｏｍａｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＧＴ）ａｓｓａｙ　ｏｆ　Ｈｏｐｌｏｃｏｍｐａｆｕｌｖｉｃｏｎｉｓ　ｌａｒｖａ　ｆｅｅｄｉｎｇ　Ｏｎ　ｆｏｕｒ　ｐｌｕｍ　ｖａｒｉｅｔｉｅｓ　品种　羧酸酯酶比活力ＣＥ叩ｅｃｉ６ｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ／Ｄｕｎｃａｎ’８显著性检验　谷胱甘肽转移酶比活力Ｄｕｎｃａｎ’ｓ显著性检验　Ｖａｒｉｔｉｅａ　［一ｒｎｍｎｌ・噶　（３０血）　］　Ｎｏｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔ鳅（ａ＝０．ｏ５）Ｇｒ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｃＩｉｖｉ　［０Ｄ・喵　（　）　］Ｎｏｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔ鳅（ａ＝０．ｏ５）　

裹５蕊谱分区　Ｔａｂ．５　Ｚｙｍｏｇｒａｍ　ｓｅｃｔｉｏｎ　２．３酶谱分析　根据Ｒｆ值，将酯酶同功酶酶谱划分为４组区带。如图１及表　５，即酯酶Ｉ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，分别相当于Ｒｆ　０—０．１、０．１１—０．２０、０．２１—　

０．３０、０．３１—１．００（距负极７．１　ｃｍ处为溴酚蓝示踪线）。由酶谱图　可见，取食大石中生的李实蜂幼虫酯酶酶谱可见７条带，取食其他　３种的幼虫可见６条带。第１条带酶活性极高，为李实蜂种的特