用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验报告

正交法测几种因素对酶活力的影响一、实验原理1、酶反应受到多种因素的影响，如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶反应速度，并且各因素之间也相互影响（交互作用）。

1）底物浓度对酶反应速度的影响2）酶浓度对酶反应速度的影响3）温度对酶反应速度的影响的常数，它受底物的种类、浓度；溶液的离子强度、pH、反应时间等的影响。

4）pH对酶反应速度的影响是一个固定的常数，2、正交法1）正交法是利用正交表来安排多因素试验、寻求最优水平组合的一种高效率试验设计方法。

它从多因素试验的全部水平组合中挑选部分有代表性的水平组合进行试验，通过对这部分试验结果的分析了解全面试验的情况，找出最优水平组合。

2）正交法的优点：用较少的试验获得较全面的数据结果，避免了在多因素、多水平试验中对每个因素的每个水平都互相搭配进行的全面试验，节省大量的人力、物力，缩短了实验时间。

3）正交表的正交性：Ⅰ表中每一列（因素）各水平的重复数相等；Ⅱ表中任意两列横向形成的有序数对中，所有各种可能的有序数对的重复数相同。

用正交表安排的实验，具有均衡分散的特点。

即按正交表挑选出来的各因素水平组合在全部水平组合中的分布式均衡的。

4）正交实验的一般流程Ⅰ列出试验中的因素和水平数Ⅱ选择合适的正交表Ⅲ根据正交表进行实验设计Ⅳ实验并收集数据Ⅴ分析数据，得出结论5）结果分析Ⅰ利用各因素同一水平试验指标之和及平均数，可比较因素不同水平对试验的影响程度。

Ⅱ计算极差，可比较不同因素的影响程度。

Ⅲ找出最佳试验条件（理论值）。

3、本实验选取四个因素，即底物浓度[S]、酶浓度[E]、温度、 pH 值，每个因素选三个水平，选择正交表设计实验，实验设计如下表：表 14、本实验测定的是胰蛋白酶的活力，以血红蛋白为底物，血红蛋白水解后的产物多肽或氨基酸可用Folin-酚显色，在680nm下比色来得到产物浓度，从而通过一定时间内生成产物的量来判断酶反应的速度。

二、实验试剂1、2%血红蛋白液2、15%三氯乙酸（TCA）溶液3、0.3mg/mL牛胰蛋白酶（1：250）4、0.04mol/LpH为7、8、9的巴比妥钠-HCl缓冲液5、Folin-酚试剂：Folin-A(Ⅰ):-NaOHFolin-A(Ⅱ):-酒石酸钾（钠）临用前将A(Ⅰ)和A(Ⅱ)按50：1体积比混合得Folin-A试剂。

一、实验目的了解酶活性受哪些因素的影响，探究不同因素对酶活性的影响程度，为后续酶学实验提供理论依据。

二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效性、专一性和可调节性。

酶活性受多种因素影响，如温度、pH值、底物浓度、酶浓度、激活剂和抑制剂等。

本实验通过探究不同因素对酶活性的影响，了解酶活性的变化规律。

三、实验材料1. 试剂：淀粉酶、蔗糖酶、淀粉、蔗糖、NaOH、HCl、pH试纸、蒸馏水、斐林试剂等。

2. 仪器：试管、烧杯、量筒、胶头滴管、恒温水浴锅、pH计等。

四、实验方法1. 温度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别置于0℃、25℃、40℃、60℃、80℃的恒温水浴锅中，保温5分钟。

（2）取等量淀粉加入各试管中，分别加入等量淀粉酶溶液。

（3）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。

2. pH值对酶活性的影响（1）用pH试纸测定不同pH值（如3、5、7、9、11）的NaOH和HCl溶液。

（2）将淀粉酶溶液分别置于不同pH值的溶液中，保温5分钟。

（3）取等量淀粉加入各试管中，分别加入等量淀粉酶溶液。

（4）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。

3. 底物浓度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别置于25℃恒温水浴锅中。

（2）取不同浓度的淀粉溶液加入各试管中，分别加入等量淀粉酶溶液。

（3）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。

4. 酶浓度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别稀释成不同浓度。

（2）将淀粉酶溶液分别置于25℃恒温水浴锅中。

（3）取等量淀粉加入各试管中，分别加入不同浓度的淀粉酶溶液。

（4）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。

5. 激活剂和抑制剂对酶活性的影响（1）在淀粉酶溶液中加入适量的激活剂（如金属离子）。

（2）在淀粉酶溶液中加入适量的抑制剂（如氟化物）。

（3）取等量淀粉加入各试管中，分别加入加入激活剂或抑制剂的淀粉酶溶液。

（4）观察并记录各试管中淀粉水解的程度。

五、实验结果与分析1. 温度对酶活性的影响随着温度的升高，淀粉酶活性逐渐增强，在40℃时达到最大值，之后随着温度的继续升高，酶活性逐渐降低。

一、实验目的1. 了解影响酶活力的因素。

2. 掌握实验操作技能，包括实验设计、数据记录和分析。

3. 分析不同因素对酶活力的影响规律。

二、实验原理酶是一种具有催化功能的蛋白质，在生物体内发挥着至关重要的作用。

酶的活力受到多种因素的影响，如温度、pH值、底物浓度、酶浓度等。

本实验通过探究这些因素对酶活力的影响，揭示酶活力变化的规律。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉酶、淀粉、氯化钠、盐酸、氢氧化钠、葡萄糖、蒸馏水等。

2. 实验仪器：恒温水浴锅、试管、移液器、滴定管、pH计、计时器等。

四、实验方法1. 温度对酶活力的影响实验（1）将淀粉酶溶液置于不同温度（0℃、25℃、40℃、60℃、80℃）的水浴锅中，保温5分钟。

（2）分别取等量的淀粉溶液加入上述不同温度的淀粉酶溶液中，立即开始计时。

（3）每隔一定时间取样，用碘液检测淀粉剩余量，记录数据。

（4）重复实验，取平均值。

2. pH值对酶活力的影响实验（1）将淀粉酶溶液分别置于pH值为2、4、6、8、10的盐酸和氢氧化钠溶液中，调节pH值。

（2）分别取等量的淀粉溶液加入上述不同pH值的淀粉酶溶液中，立即开始计时。

（3）每隔一定时间取样，用碘液检测淀粉剩余量，记录数据。

（4）重复实验，取平均值。

3. 底物浓度对酶活力的影响实验（1）将淀粉酶溶液置于25℃的水浴锅中，保温5分钟。

（2）分别取不同浓度的淀粉溶液加入淀粉酶溶液中，立即开始计时。

（3）每隔一定时间取样，用碘液检测淀粉剩余量，记录数据。

（4）重复实验，取平均值。

4. 酶浓度对酶活力的影响实验（1）将淀粉酶溶液分别稀释成不同浓度（0.1g/mL、0.2g/mL、0.3g/mL、0.4g/mL、0.5g/mL）。

（2）将淀粉溶液置于25℃的水浴锅中，保温5分钟。

（3）分别取等量的淀粉溶液加入不同浓度的淀粉酶溶液中，立即开始计时。

（4）每隔一定时间取样，用碘液检测淀粉剩余量，记录数据。

（5）重复实验，取平均值。

酶活性影响因素实验报告酶活性影响因素实验报告引言酶是一种生物催化剂，能够在生物体内加速化学反应的进行。

酶活性的研究对于了解生物体的代谢过程以及开发新型药物具有重要意义。

本实验旨在探究不同因素对酶活性的影响，为酶的应用提供理论依据。

材料与方法1. 实验材料：酶溶液、底物溶液、缓冲液、试管、试管架、显微镜、计时器等。

2. 实验步骤：- 步骤一：将酶溶液、底物溶液和缓冲液按一定比例混合，制备反应液。

- 步骤二：将试管架放置在显微镜下，调节合适的放大倍数。

- 步骤三：将反应液倒入试管中，开始计时，并通过显微镜观察反应过程。

- 步骤四：记录不同实验组的反应时间，并进行数据分析。

结果与讨论1. 温度对酶活性的影响：通过实验发现，随着温度的升高，酶活性逐渐增加，但当温度超过一定范围后，酶活性开始降低。

这是因为酶分子在过高温度下会发生构象变化，导致其失去催化能力。

因此，在实际应用中需要控制好酶反应的温度，以保证最佳酶活性。

2. pH值对酶活性的影响：实验结果显示，在一定pH范围内，酶活性较高。

当pH偏离该范围时，酶活性显著下降。

这是因为酶分子对于酸碱环境的敏感性，过高或过低的pH值会导致酶分子的构象变化，从而影响其催化效率。

因此，在酶的应用过程中，需要根据具体的酶种类选择合适的pH条件。

3. 底物浓度对酶活性的影响：实验结果显示，随着底物浓度的增加，酶活性呈现出先增加后趋于稳定的趋势。

这是因为酶的活性受到底物的限制，当底物浓度过低时，酶分子与底物相遇的概率较低，导致酶活性降低。

而当底物浓度达到一定水平后，酶分子与底物的相遇概率趋于稳定，酶活性也相应趋于稳定。

因此，在实际应用中需要根据底物的浓度选择合适的酶用量，以保证最佳的催化效果。

结论本实验通过对酶活性影响因素的研究，发现温度、pH值和底物浓度对酶活性具有重要影响。

在酶的应用过程中，需要根据具体情况选择合适的温度、pH值和底物浓度，以保证最佳的酶活性和催化效果。

生化实验的方法--用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响1．正交试验设计法的基本思想正交试验设计法，就是使用已经造好了的表格--正交表--来安排试验并进行数据分析的一种方法。

它简单易行，计算表格化，使用者能够迅速掌握。

下边通过一个例子来说明正交试验设计法的基本想法。

[例1]为提高某化工产品的转化率，选择了三个有关因素进行条件试验，反应温度(A)，反应时间(B)，用碱量(C)，并确定了它们的试验范围：A：80-90℃B：90-150分钟C：5-7％试验目的是搞清楚因子A、B、C对转化率有什么影响，哪些是主要的，哪些是次要的，从而确定最适生产条件，即温度、时间及用碱量各为多少才能使转化率高。

试制定试验方案。

这里，对因子A，在试验范围内选了三个水平；因子B和C也都取三个水平：A：Al＝80℃，A2＝85℃，A3=90℃B：Bl＝90分，B2＝120分，B3=150分C：Cl＝5％，C2＝6%，C3＝7%当然，在正交试验设计中，因子可以是定量的，也可以是定性的。

而定量因子各水平间的距离可以相等，也可以不相等。

这个三因子三水平的条件试验，通常有两种试验进行方法：(Ⅰ)取三因子所有水平之间的组合，即AlBlC1，A1BlC2，A1B2C1，……，A3B3C3，共有33=27次试验。

用图表示就是图1 立方体的27个节点。

这种试验法叫做全面试验法。

全面试验对各因子与指标间的关系剖析得比较清楚。

但试验次数太多。

特别是当因子数目多，每个因子的水平数目也多时。

试验量大得惊人。

如选六个因子，每个因子取五个水平时，如欲做全面试验，则需56＝15625次试验，这实际上是不可能实现的。

如果应用正交实验法，只做25次试验就行了。

而且在某种意义上讲，这25次试验代表了15625次试验。

图1 全面试验法取点..........(Ⅱ)简单对比法，即变化一个因素而固定其他因素，如首先固定B、C于Bl、Cl，使A 变化之：↗A1B1C1 →A2↘A3 (好结果)如得出结果A3最好，则固定A于A3，C还是Cl，使B变化之：↗B1A3C1 →B2 (好结果)↘B3得出结果以B2为最好，则固定B于B2，A于A3，使C变化之：↗C1A3B2→C2 (好结果)↘C3试验结果以C2最好。

竭诚为您提供优质文档/双击可除影响酶活性的因素实验报告篇一：实验报告-不同因素对酶的影响实验报告课程名称：生物化学实验（甲）指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）三、主要仪器设备（必填）五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理（必填）四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析（必填）Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1.了解酶的专一性。

2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。

3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。

二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。

酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。

酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。

根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。

2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。

如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。

如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。

3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。

如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。

本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。

采用benedict试剂检测反应产物。

benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。

na2co3+2h2o2naoh+h2co3cuso4+2+na2so4还原糖(—choor—c=o)+2cu(oh)2cu2o(砖红色或黄色)+2h2与benedict试剂无呈色反应。

实验13 用正交法测定几种因素对酶活力的影响一、实验目的1.了解和掌握正交法的原理。

2.通过正交试验找出影响酶活力的主要因素。

二、实验原理酶反应受到多种因素的影响，如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶反应速度。

这种多因素的试验可通过正交法即用一特制的表格——正交表来安排试验、计算和分析试验结果。

这样就能通过少量试验取得较好的效果。

实践证明正交法是一个多、快、好、省的方法，目前已广泛用于工、农、医药业生产和科学实验中。

本实验运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度、pH值这四个因素对酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、酶浓度、温度和 PH值时酶的活性最大。

通过本实验初步掌握正交法的使用。

三、实验试剂及材料仪器1.2％血红蛋白液：于20ml蒸馏水中加入血红蛋白2.2g，尿素36g，lNNaOH溶液8ml，室温放置1小时，使蛋白变性。

如有不溶物，可过滤除去。

再加0．2MNaH2P04溶液至110ml及尿素4g，调节溶液pH达7.6左右。

2.15％三氯醋酸溶液：15g三氯醋酸溶于蒸馏水，并稀释至100ml。

3.牛胰蛋白水解酶液：3mg牛胰蛋白水解酶冷冻干粉，溶于10ml蒸馏水。

4. 0.1MpH7、8、9巴比妥缓冲液：见附录三。

5.Folin一酚试剂：见实验十七。

四、实验方法1 ．实验设计：本实验取四个因素，即底物浓度[S]、酶浓度[E]、温度、 pH 值。

每个因素选三个水平按一般方法，如对四个因素三个水平的各种搭配都要考虑；共需做 34 =81 次试验，而用正交表只需做9次试验。

选用L9 表（L是正交表的代号， L右下角的数字表示试验次数）。

L9表有两个特性；（ 1 ）每一列中“1”“2”“3” 这三个数字都出现三次，即它们出现的次数是相同的。

（ 2 ）每两列的横行组成的“数对”共有九个，九种不同的数对（1，1），（1，2），（1，3），（2，1），（2，2），（2，3），（3，1），（3，2），（3，3）各出现一次。

实验10 影响酶活力的因素——正交实验法（碘量法测定酶活力）四个班，每班分16组两个同学一组目的要求：初步掌握正交实验设计法（简称正交法）的使用，运用正交法测定底物浓度、温度和pH这三种因素对酶活力的影响。

实验原理：酶反应受到多种因素的影响，如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶的反应速度。

这种多因素的实验可通过正交法即用—特制的表格——正交表来安排试验，计算和分析实验结果。

这样就能通过少量实验取得较好的效果。

实践证明正交法是一个多、好、快、省的方法，目前已广泛用于农业生产和科学实验中。

本实验运用正交法测定酶浓度、温度、PH值这三个因素对酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、温度和pH值时酶的活性最大。

酶活力用硫代硫酸钠滴定法测定。

过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。

被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。

当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵做催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。

其反应为：H2O2+2KI+H2SO4→I2+K2SO4+2H2OI2+Na2S2O4→2NaI+Na2S4O6反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。

实验器材：试管15毫升试管9*16=144支吸管1毫升2*16=32支吸管5毫升2*16=32支吸耳球16个漏斗1个研钵（或者搅碎机）1个（1台）恒温水浴锅3台铁架台16个蝴蝶夹16个酸碱两用滴定管16个100毫升的三角烧瓶3*16=48个烧杯500毫升18个（装好水放到恒温水浴锅里）实验所需药品：1. 0.01 mol/L 的过氧化氢溶液每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升1.1毫升过氧化氢溶液，用蒸馏水定容至1000毫升。

（用带盖白色试剂瓶分装10瓶。

分装1000毫升即可，其余3000用白色大试剂瓶装好备用）2. 1.8 mol/L 的硫酸溶液（每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升）共配4000毫升95毫升浓硫酸，用蒸馏水定容至1000毫升。

用正交法测定几种因素对酶活力的影响实验报告记录————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：用正交法测定几种因素对酶活力的影响一、前言正交实验法正交实验法就是利用排列整齐的表-正交表来对试验进行整体设计、综合比较、统计分析，实现通过少数的实验次数找到较好的生产条件，以达到最高生产工艺效果。

正交表能够在因素变化范围内均衡抽样，使每次试验都具有较强的代表性，由于正交表具备均衡分散的特点，保证了全面实验的某些要求，这些试验往往能够较好或更好的达到实验的目的。

正交实验设计包括两部分内容:第一，是怎样安排实验;第二，是怎样分析实验结果。

酶活力酶活力（enzyme activity）也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。

酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。

测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。

酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。

在一般的酶促反应体系中，底物往往是过量的，测定初速度时，底物减少量占总量的极少部分，不易准确检测，而产物则是从无到有，只要测定方法灵敏，就可准确测定。

二、实验目的1.学习并掌握正交法应用原理。

2.采用正交法测定多种因素对酶活力的影响。

三、实验原理酶促反应常常同时受到多种因素(包括激活剂和抑制剂等)的交互影响，可采用正交法进行综合研究，即通过少量试验收到更好的效果：多快好省。

本实验以正交法同时测定[S]、[E]、温度和pH值对trypsin活性的影响，以求得酶活最大时相应影响因素的最佳值(水平)，并借此初步掌握正交法的使用。

四、实验器材和试剂实验器材：①试管②漏斗③温度计④吸管⑤恒温水浴锅⑥分光光度计实验试剂：①2%血红蛋白液(Hb)②15%三氯醋酸液(TCA)③trypsin酶液④0.04mol/L巴比妥缓冲液(pH 7, 8, 9)⑤考马斯亮蓝染液五、实验操作1.实验设计本实验为四因素三水平(总试验次数34=81)，可选用L9正交表（仅需9次试验)，展开后其特性为均衡搭配（1）每列中水平数1、2、3出现次数相同，均为3次；（2）每两列的横行数对(1-1/1-2/…/3-2/3-3)各出现一次。