动物细胞
微生物细胞
__________法、基因 显微注射 ________ 感受态细胞 __________法 农杆菌转化 枪法、花粉管通道 __________法 技术 (用Ca2+处理) 受精卵、体细胞
受精卵 ______
原核细胞
(4)目的基因的检测与鉴定:
①导入检测: DNA分子杂交 技术(使用DNA探针)。
(1)用限制酶________和________酶处理两个基因后,可得到A、D端相连 的目的基因。 (2)将上述目的基因插入如图所示质粒的________中,构建_______,然后 将其导入农杆菌中。 (3)利用______________法将目的基因导入油菜叶片中,并通过筛选获得转 解析 基因油菜细胞,通过_______技术可培育成转基因油菜植株。 (4)用_________法可检测转基因油菜的染色体DNA上是否插入了目的基 因,用______法可检测转基因油菜植株中的目的基因是否翻译成蛋白质。
2.(2017· 江苏高考)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合 蛋白,某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得 目的基因,构建转基因工程菌,用于重金属废水的净化处 理。PCR扩增过程示意图如下,请回答下列问题:
(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过________获得 ________用于PCR扩增。 (2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2),为方 便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的________________位点。设 计引物时需要避免引物之间形成________________,而造成引物自连。 (3)图中步骤1代表________,步骤2代表退火(复性),步骤3代表延伸, 这三个步骤组成一轮循环。 (4)PCR扩增时,退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏 ____________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有 关,长度相同但________的引物需要设定更高的退火温度。