新型高效液相色谱柱的保护柱
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［２］Ｊ．Ａ．Ｌｕｂｋｏｗｔｚ，Ｂ．Ｐ．Ｓｅｍｏｎｉａｎ，Ｊａｖｉｅｒ
Ｇａｌｏｂａｒｄｅｓ，Ｌ．Ｂ．Ｒｏｇｅｒｓ，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，
５０（４），６７２（１９７８）．
［３］Ｐ．Ｌ．Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｒ．Ａ．Ｇａｔｔｅｎ，Ｃ．Ｏｎｔｉｖｅｒｏｓ，
Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｓｃｉ．，２０，９７（１９８２）．
［４］中国科学院大连化学物理研究所，分析化学，５
（５），４０２（１９７７）．
［５］汪庆范、柳均、孙逊运，色谱，３，２６６（１９８５）．［６］汪庆范、孙逊运、柳均，色谱，３，２６４（１９８５）．［７］Ｐ．Ｌ．Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ，４，５２４，０７（１９８５．（收稿日期：１９８７年９月１６日）Ｑｕｉｃｋ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｌｉｆｅｔｉｍｅ ｏｆ Ｔｈｅｒｍｉｏｎｉｃ Ｓｏｕｒｃｅ ｉｎＮｉｔｒｏｇｅｎ－Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｗｉｔｈ ＡＰＰＬＥ ⅡＣｏｍ－ｐｕｔｅｒ Ｌｉｕ Ｆｅｎｇｌｉｎｇ ａｎｄ Ｓｕｎ Ｘｕｎｙｕｎ，ＤｔｐｒｔｍｅｎｔｏＣｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｔｅａｃｈｅｒｓ＇Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉ’痭ｎａｎＡ ｐｒｏｇｒａｍ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍａｋｅ ａ ｑｕｉｃｋｓｕｒｖｅｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｆｅｔｉｍｅ ｏｆ ｔｈｅｒｍｉｏｎｔｃ ｓｏｕｒｃｅ ｉｎｎｉｔｒｏｇｅｎ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｏ ｐｌｏｔ ｔｈｅ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｓｅｎｓｉｔｉｖ１ｔｙ ｖｅｒｓｕｓ ｔｉｍｅ ｈａｓ
ｂｅｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ．Ｏｎｌｙ ２～３ ｍｉｎｕｔｅｓ
ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｄａｔａ ｗｉｔｈ
ＡＰＰＬＥ Ⅱｃｏｍｐｕｔｅｒ．
新型高效液相色谱柱的保护柱
于亿年李玉珊吴丽华卢佩章
（中国科学院大连化学物理研究所）
（中国大连色谱技术研究开发中心）
由于液相色谱柱的高效分离性能，其应用越来
越广泛。在现有的有机化合物分析中，大约有８０％
可直接用液相色谱法进行分析、分离。但在实践中
发现，分离某些样品时，特别是生化、药物样品中
的大分子化合物，染料及其它一些高分子量化合
物，极易堵塞和污染液相色谱柱。这给分析工作带
来了一定的困难，使得实验难以重复，降低了色谱
柱的使用寿命，这在国内外都是极为重视的问
题。
为了解决高效液相色谱柱的堵塞和污染而又较
少地影响柱效，我们研制成功了新型保护柱。根据
保护柱的功能，我们从三个方面加以改进，以达到
流动相在保护柱中停留时间尽可能短的要求，即保
护柱的结构，保护柱与分离柱的连接方式，保护柱
内的填充物。
实验结果达到了我们预期的要求，效果较好。
实验部分
（一）仪器本实验采用日本分光株式会社
的Ｆａｍｉｌｉ Ｃ１００紫外分光可调波长检测器，上海科仪厂产ＹＳＢ—２型平流泵，上海自动化仪表二厂产台式记录仪，采用阀进样（５ｌ美国Ｒｕｅｏｄｙｎｅ７０１０，样品：苯，萘，联苯，菲。（二）带保护柱的高效液相色谱柱的制备为了减少死体积，尽量减少对柱效的影响，保护柱和分离柱之间的连接，采用直接接触式（见图１）。我们自行设计和制造的液相色谱柱，可与大部分国内外仪器相连接，而不必改动。柱管内径为４．６ｍｍ或５ｍｍ二种：各种柱长规格均有，以１５０ｍｍ和２５０ｍｍ为主。保护往为１０ｍｍ，２０ｍｍ，３０ｍｍ三种。分离柱的担体填装采用非等比匀浆高压装柱。保护柱由于长度短，粒度粗，采用手装法。图１带保护柱的高效液相色谱柱１．保护柱，２．分离柱。（三）实验条件分别选用ＹＷＧ－Ｃ１８，φ×１５０ｍｍ；Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ，５Ｃ８５１５０ｍｍ和ＹＱＧＧ１６ ３，φ．６１２５ｍｍ三根分离柱。分离柱前分别装上几种规格的保护柱进行各种实验。所有的实验条件均相同。流动相：ＧＨＯＨ：Ｈ２０＝８３：１７，室温下操作，流髁量１ｍｌ／ｍｉｎ，进样量５ｌ紫外检测器灵敏度为
０．３２波长２５４毫微米。
实验结果
实验结果详见图２和表１，２。
讨论
（一）在同一根色谱柱上，装不同长度保护柱
对柱效的影响，结果见表３。
在表３中，１．保护柱中填料比表面积８ｍ２ｇ
２．柱效以不装保护柱为比较基准，３．柱效损失以
样品中柱效最大的联苯计算，４．色谱分析柱是
Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ １５Ｃ１８，５１５０ｍｍ。
（二）在同一根色谱柱上，保护柱内装填不同
填料对柱效的影响，见表４。
由表３，４可以清楚看出，保护柱以１０ｍｍ～
２０ｍｍ为宜，保护柱中填料以较大粒度的薄壳型担
体为好，键合与否影响不大。
结论
总括以上的实验可以看出：
（一）我们研制的保护柱，其使用长度在
２０ｍｍ以下为宜，柱效损失可在３％以内。当采用
１ｍｍ长保护柱时，作十八种氨基酸样品实验，在
连续进样５０～８０次（每次１０２ｌ）之后，柱压才
上升９．８０７１０５～１．９６１１０６Ｐａ，这时取下更换一
支新的保护柱，分离柱性能基本没有发生什么变
化。我们曾将带有保护柱的分离柱，提供给大连水
产学院等几个单位试用，均反映效果良好。
（二）与国外商品保护柱比较
Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ公司、Ｂｅｃｋｍａｎ公司、
Ｃｈｒｏｍｐａｃｋ公司等公布的结果为装保护柱后，分
表１ ＹＷＧ Ｃ１８ ５μφｌ５０ｍｍ柱实验结果
表２保护柱长１０ｍｍ＋ＹＷＧ Ｃ１８ φ１５０ｍｍ柱实验结果
表３不同长度保护柱对柱效的影响
离柱柱效损失为５～６％，分开的连接型式柱效损失
可达１０％左右。
表４不同填料的保护柱对柱效的影响
参考文献
［１］ＢＴＯ－ＲＡＤ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｋ １９８５．
［２］ＨＰＬＣ Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ １９８４．
［３］Ｔｈｅ Ｃｈｒｏｍｐａｃｋ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
１９８４．
（收稿日期：１９８７年４月２９日）
Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｇｕａｒｄ Ｃｏｌｕｍｎ ｆｏｒ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｙｕ Ｙｉｎｉａｎ，Ｌｉ Ｙｓａｎ，Ｗｕ Ｌｉｈｕａ
ａｎｄ Ｌｕ Ｐｅｉｃｈａｎｇ，Ｄａｌｉａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏＣｈｅｍｉｃａｌ
Ｐｈｙｓｉｃｓ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ，Ｄａｌｉａｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏ－
ｇｒａｐｈｉｃ Ｒ．＆Ｄ．Ｃｅｎｔｒｅ ｏｆ Ｃｈｉｎａ
Ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ｇｕａｒｄ ｃｏｌｕｍｎ ｃａｎ ｈｅｌｐ ｔｏ ｅｘｔｅｎｄ
ｔｈｅ ｌｉｆｅｔｉｍｅ ｏｆ ａｎ ＨＰＬＣ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ｓｉｇｎｉ－
ｆｉｃａｎｔ ｌｏｓｓ ｉｎ ｐｌａｔｅ ｃｏｕｎｔ．ＨＰＬＣ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ ｇｕｒａｄ ｃｏｌｕｍｎ ｉｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ，ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，ｄｙｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ
ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．
高效液相色谱荧光检测法分析氨基酸
常建华宋正华郭治安
（西北大学化学系，西安）
氨基酸的分析方法应用最普遍的是离子交换色谱法［１］。在－ＳＨ存在下，邻苯二甲醛（ＯＰＡ）与伯氨基在柱后反应产生荧光物质进行被基酸的检测是一种有效的微量分析法［］６而亚氨酸则须先用次氯酸钠氧化再与ＯＰＡ反应。整个系统如图１如示。我们应用此法分析了谷物的总氨基酸和茶叶中的游离氨基酸含量。实验部分（一）仪器及试剂１．仪器岛津ＬＣ－６Ａ ＨＰＬＣ仪；ＲＦ－５３５荧光检测器；ＳＣＬ－６Ａ主机控制器；ＣＲ－３Ａ数据处理系统，手动进样。２．往子分析柱是Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋ ＩＳＣ－０７／
Ｓ１５０４Ｌｉ柱，１５０４ｍｍｉｄ．，７μ蘭１０％交联度的苯
乙烯－二乙烯基苯聚合物的阳离子交换树脂。
３．试剂（１）流动相Ａ：４２．３二水柠檬酸
锂、２１０ｍｌ甲基溶纤素、４０ｍｌ ６０％ＨＣＩＯ，蒸馏水
稀释到３０００ｍｌ，ｐＨ＝２．６５。＃）流动相Ｂ：２８．２ｇ二
水柠檬酸锂，１２．４ｇ硼酸，用４ｍｏｌ／ＬｉＯＨ调鱬ｐＨ＝１０．０，
稀释到１０００ｍｌ。（３）流动相Ｃ：４．２ｇＬｉＯＨ配成
５００ｍｌ水溶液，清洗柱子用。（４）反应液Ａ：先配缓
冲液无水Ｎａ２ＣＯ３ １２２．３ｇ⑴硼酸４０．７ｇ硫酸钾
５６．４ｇ溶后稀释到３０００ｍｌ，ｐＨ＝１０．３。在１０００ｍｌ
缓冲液中加入７％ＮａＣＩＯ ０．４ｍｌ即是反应液Ａ。（５）
反应液Ｂ：在４５０ｍｌ缓冲液中加入４００ｍｇＯＰＡ，７ｍｌ
乙醇、１０％ＣＨ（ＣＨ）ＨＯ（ＣＨＣ２Ｏ）ｎＨ溶液
２ｍｌ巯基乙醇１ｍｌ以上用日本片山化学工业株
式会社的试剂。（６）３７种氨基酸的标样，出自日本
和光纯药工业株式会社。
（二）色谱条件总流速０．４ｍｌ／ｍｉｎ；梯度洗
脱１９０分钟；荧光检测器Ｅｘ３５０ｎｍ，Ｅｍ４５０ｎｍ恢柱
温３８５８℃妫，反应温度５５。梯度曲线见图２。
（三）样品的准备
１．谷物水解样在６ｍｏｌ／Ｌ ＨＣＩ中１１０℃封
管水解２４小时，用流动相Ａ稀释样品。
